高压氧辅助抗蛇毒血清对早期蝮蛇咬伤中毒患者患肢肿胀情况、心肌酶谱、炎症因子水平改变的影响

目的探究高压氧辅助抗蛇毒血清对早期蝮蛇咬伤中毒患者肿胀情况、心肌酶谱、炎症因子水平改变的影响。方法选取2021年5月至2023年1月在资阳市第一人民医院急诊治疗的早期蝮蛇咬伤中毒患者83例为研究对象,按随机数字表法分为观察组(n=41)和对照组(n=42),对照组给予抗蛇毒血清治疗,观察组在此基础上给予高压氧辅助治疗,观察两组临床疗效、肿胀消失时间、疼痛消失时间及住院时间,比较两组治疗前后患肢肿胀情况、视觉模拟评分法(VAS)评分、心肌酶谱[血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]、炎症因子[C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)]变化情况。结果治疗前,两组的患肢肿胀情况、VAS评分、CK、CK-MB、cTnI、CRP、IL-6及PCT水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组总有效率(97.56%)高于对照组(83.33%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.822,P<0.05);观察组肿胀消失时间、疼痛消失时间及住院时间均短于对照组,差异有统计学意义(t=7.058、7.618、11.170,P<0.05);观察组肢体周径小于对照组,VAS评分均低于对照组,差异有统计学意义(t=14.397、6.791,P<0.05);观察组血清CK、CK-MB及cTnI水平均低于对照组,差异有统计学意义(t=16.524、4.734、5.740,P<0.05);观察组血清CRP、IL-6及PCT水平均低于对照组,差异有统计学意义(t=4.945、4.999、6.591,P<0.05)。结论高压氧辅助抗蛇毒血清可缓解早期蝮蛇咬伤中毒患者患肢肿胀情况,降低心肌损伤,抑制炎症反应,有效提高临床疗效。

医院制剂蛇药酒抑制眼镜蛇毒酶活性的实验研究

目的探讨医院制剂蛇药酒抗眼镜蛇毒中4种主要酶活性的效果。方法采用不同浓度蛇药酒与蛇毒共孵育作为蛇药酒组,同时设置无蛇药酒的蛇毒对照组。通过琼脂平板法比较蛇药酒组及蛇毒对照组产生透明圈的直径,以检测不同浓度蛇药酒对眼镜蛇毒中磷脂酶A_(2)(PLA_(2))、纤维蛋白原溶酶(以下简称纤溶酶)的抑制作用;分别以福林法和浊度法检测两组的蛋白水解酶和透明质酸酶活性,观察蛇药酒对眼镜蛇毒中蛋白水解酶、透明质酸酶的抑制作用。结果蛇药酒浓度为0.0008、0.004、0.02、0.1、0.5 mg/ml时,对眼镜蛇毒中的PLA_(2)有较强的抑制作用;蛇药酒浓度为1.3、13、130 mg/ml时,可明显抑制纤溶酶活性;蛇药酒浓度为0.5、2、8、32 mg/ml时,对蛇毒中蛋白水解酶抑制作用显著;蛇药酒浓度为0.0625、0.125、0.25、0.5、1 mg/ml时,对眼镜蛇毒中透明质酸酶抑制作用呈剂量依赖性。结论医院制剂蛇药酒在体外有直接抑制眼镜蛇毒中PLA_(2)、纤溶酶、蛋白水解酶及透明质酸酶的作用。

一种蛇毒类凝血酶纯化新方法

目的提供一种蛇毒类凝血酶的新纯化方法。方法蛇毒经预处理后,依次经过苯甲脒琼脂糖凝胶亲和色谱、阳离子交换色谱和疏水色谱后获得蛇毒类凝血酶,分别对活性、分子量及纯度进行检测,并与使用现有专利方法制备的蛇毒类凝血酶进行质量比较。结果新方法制备的蛇毒类凝血酶与现有专利方法相比,分子量无明显差异,但新方法的比活力更高,且纯度更高,同时新方法的工艺稳定性更佳。结论新方法与现有专利方法相比,简化了工艺步骤,缩短了纯化周期,减少了过程环境暴露风险,可获得高纯度类凝血酶,工艺稳定性高,产品质量一致性好,利于临床安全用药。

柿子单宁对几种蛇毒中主要酶的抑制作用及其机理初探

【目的】分析柿子单宁(persimmon tannin,PT)对江浙蝮蛇、尖吻蝮蛇、眼镜蛇毒中主要酶活力的抑制作用,初步研究两者相互作用的机理。【方法】将蛇毒与PT以不同比例混合后在37℃下温育1h,离心分离,测定上清液中主要酶活力变化,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对粗毒和作用后所得沉淀及上清液进行分析。【结果】当蛇毒与PT质量比达到1﹕1时,粗毒中蛋白质水解酶、磷脂酶A2、L-氨基酸氧化酶、精氨酸酯酶、乙酰胆碱酯酶、类凝血酶活力被完全抑制,且酶活力的下降与PT含量呈剂量增加效应;SDS-聚丙烯酰胺电泳表明,PT与蛇毒蛋白具有很强的非特异性结合能力。但对不同结构蛋白质结合能力和选择性也明显不同。【结论】柿子单宁在体外条件下对蛇毒中几种酶的活力具有明显的抑制作用,PT与蛋白结合是导致酶失活的重要原因。

白眉蝮蛇蛇毒及蛇毒酶的激光解吸飞行时间质谱研究

In this paper, three kinds of snake venoms and four kinds of enzymes (phospholipase A 2, fibrinolytic enzyme, arginine esterase and L amino acid oxidase) isolated from the snake venom were analyzed. As the snake venom was different, the MALDI/TOF/MS showed difference. The MALDI/TOF/MS determination results could be affected by the concentrations of snake venom enzymes. And the mechanisms of desorption and ionization was also given in this study. By using MALDI/TOF/MS we obtained the accurate molecular weights and homogeneities of the enzymes. The apparent characteristics of the positive MALDI/TOF/MS of enzymes composed by two subunits were also given out. The results showed that MALDI/TOF/MS is an effective analytic method for discovering new components from snake venom complexes. And it is reliable to use this method to determine the molecular weights and purifies of protein molecules. [WT5HZ]

重组巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达

以毕赤酵母为表达系统,建立生产重组巴曲酶的技术工艺路线。通过递归式PCR的方法,人工合成了巴曲酶基因,将其插入pPIC9表达质粒中,转化至毕赤酵母GS115(his4),筛选出的表达株经甲醇诱导,表达了重组巴曲酶,并得以纯化。从每升发酵液中可纯化得到10mg重组巴曲酶,其比活为238NIHunits/mg,分子量为30.55kD。重组巴曲酶在体外可使纤维蛋白凝固,在体内缩短小鼠出血时间。为开发重组的蛇毒类凝血酶止血剂打下了基础。

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的 :从蝮亚科尖吻蝮蛇毒 (Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶 (Non- hem onrrhagicfibrinolytic enzym e,NHFL E)并对其理化性质进行研究。方法 :应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFL E,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力 ,用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)测定其相对分子质量 ,用皮内出血实验测定其出血活性。结果 :从蝮亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶 ,它的相对分子质量为 2 5 0 0 0 ,没有出血活性 ,在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白 ,相对活性为粗毒的 3.2倍。结论 :从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为 2 5 0 0 0的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性 。

长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析

用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法对长白山眉蝮蛇蛇毒所含4种主要酶:磷脂酶A_2、精氨酸酯酶、纤溶酶及L-氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,结果表明WALDI-TO-FMS具有灵敏度高、分辨能力强、分析时间短及样品用量少等优点.用MALDI-TOFMS法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷、快速且重现性好,是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳所无法比拟的.

蛇毒类凝血酶研究进展

对有关蛇毒类凝血酶(SVTLEs)的分布分类、理化性质、酶学性质、结构特征、基因克隆表达、临床应用等方面的研究资料进行了概括和综述。结果发现:SVTLEs主要分布在蝮亚科和蝰科毒蛇的毒液中;根据SVTLEs水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度不同,可将其分为SVTLE-AB、SVTLE-A和SVTLE-B等3类;多数SVTLEs的分子量在30～50kD,含6个二硫键,pI较低,部分SVTLEs的pI较高;SVTLEs可水解TAME和BAEE,其活性可被DFP和PMSF所抑制,但不被胰蛋白酶trypsin及凝血活性中心His的专一抑制剂TLCK和EDTA抑制;对SVTLEs的一级结构和二级结构研究较多,对高级结构研究有待深入;很多SVTLEs基因在大肠杆菌中成功获得了表达,但表达物不能被糖基化和正确折叠,故没有活性或活性不高,而其在真核表达系统中表达活性较高;部分碳水化合物具有稳定SVTLEs结构及提高SVTLEs的酶活力的作用;SVTLEs的临床应用涉及心肌梗塞、缺血性中风、血栓性疾病等疾病的治疗。SV-TLEs未来的研究重点将集中于其在真核表达系统的表达和对其高级结构的解析。

新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究

目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致.试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性.腹腔注射Agacutin0.5～2 U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%).结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子Ⅱ和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成.

不同剂量蛇毒抗高凝状态酶对小鼠肝癌H2 2生长作用的实验研究(英文)

目的 :探讨不同剂量蛇毒抗高凝状态酶 (AHCSE)对小鼠肝癌H2 2生长作用的影响。方法 :小鼠皮下接种小鼠肝癌(H2 2 )后 ,待肿瘤长成 1 0mm2 分别经腹腔注射不同剂量AHCSE,每天 1次 ,连续 1 0d ,观察瘤重抑制率、瘤体积、抑瘤率、脾指数和白细胞及其组成成分 ,统计采用LDS t,检验水准α =0 .0 5。采用白细胞及其组分与脾指数的相关和回归。结果 :中、高剂量组AHCSE具有明显的抗肿瘤作用 ,而低剂量组抗肿瘤作用效果不佳 ,但高剂量组的小鼠体重降低明显。实验组的脾系数明显高于对照组 ,并且随着AHCSE的剂量增大脾系数也增大。白细胞随着AHCSE剂量的增大而增大 ,白细胞及其组分与脾指数存在相关性和回归直线。结论 :在一定的范围内 ,随着AHCSE的剂量增大 ,抗肿瘤效果增强 ,但副作用也增大 。

在大肠杆菌中表达蝮蛇毒类凝血酶基因gloshedobin

将大连蛇岛蝮蛇毒腺中的类凝血酶基因gloshedobin克隆到pET-32a(+)上,构建了T7启动子控制的大肠杆菌表达质粒,并考察了质粒的稳定性. 采用IPTG诱导,以融合蛋白的形式进行表达,得到以包涵体形式存在的类凝血酶. 通过实验对诱导时间、诱导温度及诱导剂浓度进行了优化,并采用正交实验考察了金属离子对表达的影响,结果表明Fe3+, Co2+对类凝血酶的表达有促进作用.

精制蛇毒酶乳膏制备方法探讨及微量元素含量的测定

目的 :探讨精制蛇毒酶乳膏制备方法及对微量元素含量进行分析。方法 :对乳膏的稳定性进行实验检测 ,并用原子吸收分光光度法测量其微量元素 Zn、Fe、Mg、Cu的含量。结果 :精制蛇毒酶乳膏对光和热不稳定 ,需避光密封贮存。 Zn、Fe、Mg、Cu含量分别为 0 .2 5 9,0 .32 6 ,0 .372 ,0 .0 2 5μg/ m l。结论 :混合加热法制备精制蛇毒酶乳膏成品性能最稳定 ,便于贮存和应用。微量元素的存在可以促进精制蛇毒酶乳膏药效的发挥。

蛇毒抗高凝状态酶抑制小鼠肝癌H22生长作用的实验研究

目的 探讨蛇毒抗高凝状态酶 (AHCSE)对实验性BALB/C小鼠抗肿瘤 (H2 2肝癌 )的作用。方法 小鼠皮下接种小鼠肝癌H2 2后 ,待肿瘤长成 10mm3 左右分别经腹腔注射AHCSE、5 Fu和肝素 ,每天 1次 ,连续 10天 ,观察瘤重、瘤重抑制率、瘤体积、瘤体积抑瘤率和脾指数。结果 AHCSE有显著的抗肿瘤作用 (P <0 .0 1) ,抗肿瘤效果与 5 Fu接近 ,但副作用较小 ,而肝素效果不佳 ;AHCSE组的脾系数有显著增高。结论 AHCSE有显著抗肿瘤作用 。

蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征

使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝血活力为 91 .0NIHu mg.该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,肝素不影响该组分的凝血活性 ,EDTA部分抑制其活性 ,苯甲基磺酰氟 (PMSF)则会产生不可逆抑制作用 .该酶N 末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF 。

尖吻蝮蛇类凝血酶基因的克隆及生物信息学分析

为了获得蛇毒类凝血酶基因,本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5'和3'保守性序列设计了引物;通过RT-PCR从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增到1个808bp特异性片段,将该cDNA重组到pMD18-T载体中,利用生物信息学的方法对测序结果进行了分析。结果表明:该特异性片段中有一个783bp的开放阅读框架,其编码蛋白质序列与蛇的类凝血酶序列有98.5%的同源性,也具有蛇毒类凝血酶的典型特征。结论:本实验获得了一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶基因。

长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因特异片段的制备与分析

目的 :分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段 ,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础。方法 :应用RT -PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段 ,克隆于pGEM T载体上 ,进行测序和NCBI数据库同源性分析。结果 :获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为 2 89bp ,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性。结论 :本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段。根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段。

白唇竹叶青蛇(Trimeresurus albolabris)毒降纤酶的分离纯化以及性质

目的从白唇竹叶青蛇(T.albolabris)毒中分离纯化无出血作用的降纤活性组分,探讨其理化性质及部分生物功能。方法用DEAE-SephadexA-25,SephadexG-100和CM-SephadexC-50三步色谱法进行分离纯化。SDS-PAGE和HPLC鉴定其纯度和相对分子质量,平板法测定其降纤活性。结果从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化获得单一的降纤组分,能迅速水解纤维蛋白原或纤维蛋白原Aα链,缓慢水解Bβ链,而对γ链无作用,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为56000。EDTA能抑制其纤维蛋白原水解活性,而PMSF、β-巯基乙醇对其活性无影响,提示该组分为单链α金属蛋白酶。结论从白唇竹叶青蛇毒中分离纯化得到1种无出血作用且降纤活性强的新蛇毒降纤酶。

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶对动物凝血功能的影响

目的 :探讨尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶 (Non- hem onrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFL E)对动物凝血功能的影响。方法 :用动物体内外实验方法观察 NHFL E对富血小板血浆中经 ADP诱导的血小板聚集的影响及 NHFL E对凝血功能的影响。结果 :NHFL E能明显延长全血凝固时间、活化的部分凝血酶原时间、凝血酶时间和凝血酶原时间 ,产生抗凝作用。动物体内注射 NHFL E后血浆纤维蛋白原含量降低 ,优球蛋白的溶解时间缩短。结论 :尖吻蝮蛇毒 NHFL E对动物的凝血功能有影响 。

蛇毒类凝血酶的研究进展

已在40余种蛇毒中发现类凝血酶成份,其有效的体内抗凝、体外促凝作用逐渐受到关注.对它的性质结构及制备纯化的研究取得重要成果.在揭示酶的功能与结构关系以及临床抗血栓应用方面前景广阔.