目的探讨基于SNaPshot技术的精液特异性编码区单核苷酸多态性(coding region single nucleo⁃tide polymorphism,cSNP)遗传标记检测在精液(斑)溯源及混合体液(斑)鉴定中的可行性。方法制备16例精液斑和11例精液-静脉血混合斑样本,提取其...目的探讨基于SNaPshot技术的精液特异性编码区单核苷酸多态性(coding region single nucleo⁃tide polymorphism,cSNP)遗传标记检测在精液(斑)溯源及混合体液(斑)鉴定中的可行性。方法制备16例精液斑和11例精液-静脉血混合斑样本,提取其基因组DNA(genomic DNA,gDNA)和总RNA,并将总RNA逆转录为互补DNA(complementary DNA,cDNA)。在已验证的精液特异性mRNA编码基因上筛选cSNP遗传标记。基于SNaPshot技术构建cSNP复合检测体系并通过CE对样本进行基因分型。结果成功构建了包含5个精液特异性cSNP的复合检测体系。在16例精液样本中,除了位于TGM4基因上的cSNP在cDNA的检测结果中出现等位基因丢失外,其余cSNP的gDNA和cDNA分型结果高度一致。检测精液-静脉血混合斑时,检出的cSNP分型结果均与精液提供者的基因型一致,未受到静脉血提供者基因型的干扰。结论应用SNaPshot技术检测精液特异性cSNP的方法可以应用于法医学精液(斑)的基因分型,并为混合体液(斑)中精液来源个体的判定提供信息。展开更多
目的建立一种先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的快速基因检测方法。方法选择中国人群21-羟化酶缺乏症相关基因CYP21A2的突变热点Exon3 Del 8bp、Q318X、R356W、IVS2 A/C>G、I172N、P30L和V281L共7个位点进行巢式PCR。设计上述...目的建立一种先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的快速基因检测方法。方法选择中国人群21-羟化酶缺乏症相关基因CYP21A2的突变热点Exon3 Del 8bp、Q318X、R356W、IVS2 A/C>G、I172N、P30L和V281L共7个位点进行巢式PCR。设计上述突变热点的单链延伸引物进行扩增,采用SNaPshot技术对上述7个突变热点进行一次性基因分型检测。结果建立了一套满足质量控制标准的CYP21A2基因快速检测的方法,5例阳性干血片标本患者SNaPshot技术和测序技术的结果完全吻合,有2例复合突变,3例纯合突变,显示SNaPshot技术高度的特异性和灵敏度。结论采用SNaPshot技术检测CYP21A2基因具有高通量、准确、对样本容受性高的特点,便于临床应用。展开更多
文摘目的探讨基于SNaPshot技术的精液特异性编码区单核苷酸多态性(coding region single nucleo⁃tide polymorphism,cSNP)遗传标记检测在精液(斑)溯源及混合体液(斑)鉴定中的可行性。方法制备16例精液斑和11例精液-静脉血混合斑样本,提取其基因组DNA(genomic DNA,gDNA)和总RNA,并将总RNA逆转录为互补DNA(complementary DNA,cDNA)。在已验证的精液特异性mRNA编码基因上筛选cSNP遗传标记。基于SNaPshot技术构建cSNP复合检测体系并通过CE对样本进行基因分型。结果成功构建了包含5个精液特异性cSNP的复合检测体系。在16例精液样本中,除了位于TGM4基因上的cSNP在cDNA的检测结果中出现等位基因丢失外,其余cSNP的gDNA和cDNA分型结果高度一致。检测精液-静脉血混合斑时,检出的cSNP分型结果均与精液提供者的基因型一致,未受到静脉血提供者基因型的干扰。结论应用SNaPshot技术检测精液特异性cSNP的方法可以应用于法医学精液(斑)的基因分型,并为混合体液(斑)中精液来源个体的判定提供信息。
文摘目的建立一种先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的快速基因检测方法。方法选择中国人群21-羟化酶缺乏症相关基因CYP21A2的突变热点Exon3 Del 8bp、Q318X、R356W、IVS2 A/C>G、I172N、P30L和V281L共7个位点进行巢式PCR。设计上述突变热点的单链延伸引物进行扩增,采用SNaPshot技术对上述7个突变热点进行一次性基因分型检测。结果建立了一套满足质量控制标准的CYP21A2基因快速检测的方法,5例阳性干血片标本患者SNaPshot技术和测序技术的结果完全吻合,有2例复合突变,3例纯合突变,显示SNaPshot技术高度的特异性和灵敏度。结论采用SNaPshot技术检测CYP21A2基因具有高通量、准确、对样本容受性高的特点,便于临床应用。