SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:生信分析SNHG17、E2F1和CENPE在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达,生信分析三者的调控关系。qRT-PCR检测SNHG17、E2F1和CENPE的mRNA水平。Western blot检测E2F1和CENPE的蛋白表达。CCK-8、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。RIP实验验证SNHG17与E2F1的结合关系;ChIP实验检测E2F1与CENPE的结合关系。构建异种瘤模型验证SNHG17对肾透明细胞癌生长的影响。结果:SNHG17和CENPE在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达水平均显著上调。沉默SNHG17转染肾透明细胞后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭受到明显抑制。体内实验也验证了沉默SNHG17抑制肾透明细胞癌的生长。此外,RIP实验显示SNHG17能够与转录因子E2F1结合。ChIP实验检测转录因子E2F1与CENPE启动子区的结合,结果表明E2F1能够显著富集在CENPE的启动子区。体外功能实验表明SNHG17通过招募E2F1激活CENPE表达从而促进肾透明细胞癌细胞的增殖和转移。结论:SNHG17招募E2F1上调CENPE,促进肾透明细胞癌细胞的致瘤性。

lncRNA SNHG17对肝细胞癌的增殖、侵袭和细胞周期作用的影响研究

目的 探讨lncRNA小核仁RNA宿主基因17(small nucleolar RNA host gene 17,SNHG17)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的作用。方法 使用qRT-PCR检测比较90例HCC患者肿瘤组织与癌旁组织,正常人肝永生化细胞THLE-3,肝癌细胞HepG2和SNU-182系中SNHG17的表达水平差异。使用靶向SNHG17的si-SNHG17和阴性对照siRNA转染HepG2和SNU-182细胞,后分别使用CCK8分析、细胞集落形成实验、流式细胞术分析和Transwell分析不同转染细胞的功能差异。结果 与癌旁组织相比,HCC组织中SNHG17表达显著上调,与正常转化的人THLE-3细胞相比,HepG2和SNU-182细胞中SNHG17表达显著增加。SNHG17高表达组患者的肿瘤更大,TNM分期更差(P均<0.05)。与阴性对照siRNA转染相比,si-SNHG17转染的HepG2和SNU-182细胞,CCK8检测显示细胞活力明显降低,细胞集落数量显著减少,G_(0)/G_(1)期细胞比例更高,Transwell实验显示侵袭细胞数量显著减少(P均<0.05)。结论 抑制SNHG17可显著抑制肝癌细胞的活力、增殖和侵袭,导致细胞周期G_(0)/G_(1)期阻滞,可能作为未来肝癌治疗的新靶点。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

长链非编码RNA SNHG17通过抑制p57表达促进肺癌进展

目的:分析肺癌中长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)与p57的表达相关性及功能联系。方法:通过starBase数据库分析SNHG17和p57在肺癌组织和正常组织中的表达差异;采用人正常肺上皮细胞BEAS-2B和人肺癌细胞系A549、H1975进一步分析SNHG17和p57在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达差异;采用qRT-PCR和Western印迹检测si-SNHG17在mRNA和蛋白表达方面对SNHG17和p57的影响;采用CCK-8法检测siSNHG17对A549细胞增殖的影响;采用Transwell法检测si-SNHG17对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:通过数据分析发现SNHG17在肺腺癌和肺鳞癌组织中显著高表达,而p57在肺腺癌和肺鳞癌组织中却显著低表达;与正常肺细胞相比,SNHG17和p57在肺癌细胞中的表达趋势与在肺癌组织中一致;SNHG17和p57的表达呈负相关;沉默SNHG17使p57的表达一定程度上调,A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到抑制。结论:SNHG17在肺癌中高表达,促进肺癌细胞增殖,并通过调节p57的表达来抑制肺癌细胞的增殖和迁移。SNHG17和p57在肺癌中的具体作用机制仍有待进一步研究。

利用CRISPR/Cas9技术进行lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的:构建lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型,为探讨snhg17在肿瘤发生中的作用机制及体内实验研究提供更特异可靠的动物模型。方法:确定snhg17-KO基因敲除小鼠特异性靶标sgRNA1、sgRNA2,引导与核酸酶Cas9结合进行RNA的体外转录,将有活性的sgRNA和Cas9RNA通过C57BL/6小鼠受精卵的显微注射方式,获取snhg17基因敲除的纯合子小鼠。运用聚合酶链反应(PCR)和基因测序方法,针对获得的子代小鼠,进行基因型的鉴定。结果:lncRNA snhg17-KO基因敲除小鼠模型构建成功。结论:本研究采用CRISPR/Cas9技术首次构建出snhg17基因敲除小鼠的动物模型,为探讨snhg17在肿瘤发生、发展中的作用提供更为便捷、可靠的动物模型及研究平台。

lncRNA SNHG17靶向miR-525-5p对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨lncRNA SNHG17对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。方法qRT-PCR检测正常胎盘组织、子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17和miR-525-5p表达。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo,分别转染si-SNHG17、anti-miR-525-5p及其阴性对照;采用平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-525-5p与SNHG17的靶向关系。结果与正常胎盘组织比较,子痫前期胎盘组织中lncRNA SNHG17表达升高,miR-525-5p表达降低(P<0.05)。转染si-SNHG17后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多,划痕愈合率升高(P<0.05)。lncRNA SNHG17靶向调控miR-525-5p;共转染si-SNHG17和anti-miR-525-5p后细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少,划痕愈合率降低(P<0.05)。结论沉默lncRNA SNHG17可通过促进miR-525-5p表达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭。

SNHG17对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖及迁移的影响

目的探讨SNHG17在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和组织中的表达及对肿瘤细胞增殖及迁移的影响。方法收集2018年1月至2019年12月深圳市人民医院病理科40例三阴性乳腺癌组织标本,通过碱性磷酸酶原位杂交检测癌和癌旁正常组织中SNHG17的表达情况。构建过表达SNHG17质粒,经一代测序验证质粒。采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测转染SNHG17过表达质粒后过表达组和对照组SNHG17 RNA表达水平。使用CCK8检测过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞增殖的影响。通过平板克隆形成实验观察过表达SNHG17对MDA-MB-231细胞克隆能力的影响。进行Transwell小室实验观察过表达SNHG17对肿瘤细胞的迁移能力及侵袭能力的影响。结果原位杂交显示SNHG17在乳腺癌组织表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。构建SNHG17过表达质粒,经过一代测序验证碱基序列完全匹配。通过qRT-PCR发现,SNHG17过表达组与对照组相比,细胞中SNHG17RNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK8检测表明SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞增殖活性较对照组增加,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);不同检测时间之间MDA-MB-231细胞增殖活性差异有统计学意义(P<0.05);组间与时间之间存在交互作用,组间差异随时间变化而增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。平板克隆形成实验结果显示,SNHG17过表达组克隆细胞数较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步Transwell细胞迁移和侵袭实验结果显示,SNHG17过表达组MDA-MB-231细胞迁移和侵袭数目均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG17在MDA-MB-231细胞系及乳腺癌组织中高表达,过表达SNHG17后可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。