亚砷酸钠对HaCaT细胞的氧化应激作用

目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人皮肤永生化角质形成细胞株(HaCaT)的氧化应激作用。方法用AlamarBlue还原法检测NaAsO2对细胞活力的影响,用PI染色法检测细胞的凋亡和坏死率,利用2′7′二乙酰二氯荧光素(DCFHDA)检测细胞内ROS水平,同时用荧光法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量。结果0001μmolL至1μmolL组的AlamarBlue还原率显著高于对照组,而10μmolL以上组的AlamarBlue还原率下降,20μmolL组的凋亡和坏死率显著高于对照组,各实验组的DCF荧光强度与对照组相比明显提高,1μmolL以上组细胞内GSH水平增高,5μmolL组GSSG水平增高。结论各浓度砷引起HaCaT细胞内ROS增多,低浓度时促进细胞增殖,高浓度则抑制细胞活力,砷诱导HaCaT细胞内的GSH增多,发挥解毒作用。

富马酸二甲酯对亚砷酸钠诱发小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨富马酸二甲酯(DMF)对亚砷酸钠(NaAsO2)诱发小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激损伤的保护作用及相关机制。方法:筛选DMF最适处理浓度,将MIN6细胞随机分为正常对照组、NaAsO2组、低剂量DMF预处理+NaAsO2组、高剂量DMF预处理+NaAsO2组。MTT法检测细胞活性;TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针法检测活性氧自由基(ROS)水平;免疫细胞荧光法观察细胞内核因子E2相关因子2(Nrf2)定位表达;免疫印迹检测Nrf2蛋白表达水平;Real-time RT-PCR检测Nrf2、血红素加氧酶1(Ho-1)、硫氧还蛋白1(Trx1)、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位(Gclc)、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶调节亚单位(Gclm)mRNA表达水平。结果:与NaAsO2组比较,DMF预处理可以显著提高MIN6细胞活性,减少细胞凋亡数量,降低细胞内ROS的水平。DMF预处理+NaAsO2组MIN6细胞内的Nrf2 mRNA和蛋白表达明显高于NaAsO2组,特别是细胞核内Nrf2表达显著增多,且呈显著的剂量依赖性。DMF预处理+NaAsO2组MIN6细胞Ho-1、Trx1、Gclc和Gclm mRNA表达亦出现明显增加。结论:DMF可能通过上调Nrf2/ARE信号通路,拮抗亚砷酸钠对胰岛MIN6细胞氧化应激损伤,发挥保护作用。

亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇信号轴的影响

背景:血管内皮细胞是砷毒作用的关键靶点,砷致内皮细胞损伤的分子机制有待进一步研究。目的:研究亚砷酸钠对人脐静脉内皮细胞的损伤及鞘氨醇激酶1/1-磷酸鞘氨醇(SPHK1/S1P)信号轴的影响。方法:分离培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,将人脐静脉内皮细胞暴露于含0,5,10,15,20,25μmol/L亚砷酸钠的培养液24 h,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量;Annexin V-FITC/PI双标记结合流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;ELISA检测细胞内1-磷酸鞘氨醇含量;实时荧光定量PCR、Western blot分别检测血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1、1-磷酸鞘氨醇受体1的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①与对照组(0μmol/L亚砷酸钠)相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:细胞存活率逐渐降低,且呈剂量-效应关系;细胞融合率逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,脱落漂浮的细胞逐渐增多;细胞内活性氧含量逐渐升高;细胞凋亡率逐渐升高;细胞内1-磷酸鞘氨醇含量逐渐升高;血管细胞黏附分子1、鞘氨醇激酶1 mRNA和蛋白的相对表达量逐渐升高,1-磷酸鞘氨醇受体1 mRNA和蛋白相对表达量逐渐降低。②结果提示,亚砷酸钠诱导的人脐静脉内皮细胞损伤可能与SPHK1/S1P信号轴激活、1-磷酸鞘氨醇受体1下调有关。SPHK1/S1P信号轴可能成为砷致心血管损伤的新靶点。

亚砷酸钠致Chang liver细胞氧化应激作用的研究

目的研究不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)对人肝细胞株Chang liver的氧化应激作用。方法采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测NaAsO2(0、0.1、1、5、10、20、30、50、80、100、200μmol/L)对Chang liver细胞活力的影响,利用2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,利用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果与对照组比较,0.1μmol/LNaAsO2组细胞活力显著增强(P<0.05);10～200μmol/LNaAsO2浓度范围内,细胞活力随NaAsO2浓度升高而下降(P<0.05)。在0～30μmol/LNaAsO2浓度范围内,随着NaAsO2浓度的增高,细胞内ROS水平升高(P<0.05),SOD活力降低(P<0.001),MDA含量升高(P<0.001)。结论氧化应激可能是NaAsO2对Chang liver细胞毒性作用的机制之一。

氟、砷对原代培养大鼠海马神经细胞氧化应激及凋亡影响的实验观察

目的本研究通过体外细胞实验,观察氟、砷单独及联合染毒对大鼠海马神经细胞氧化应激及细胞凋亡的影响。方法采用2因素3水平的析因设计,将体外培养的海马神经细胞分为9组,分别为对照(细胞培养液)组、低剂量砷(2μmol/L亚砷酸钠)染毒组、高剂量砷(10μmol/L亚砷酸钠)染毒组、低剂量氟(10μmol/L氟化钠)染毒组、高剂量氟(50μmol/L氟化钠)染毒组、低剂量砷(2μmol/L亚砷酸钠)+低剂量氟(10μmol/L氟化钠)联合染毒组、低剂量砷(2μmol/L亚砷酸钠)+高剂量氟(50μmol/L氟化钠)联合染毒组、高剂量砷(10μmol/L亚砷酸钠)+低剂量氟(10μmol/L氟化钠)联合染毒组及高剂量砷(10μmol/L亚砷酸钠)+高剂量氟(50μmol/L氟化钠)联合染毒组。采用MTT还原法检测细胞存活情况;采用微量酶标法测定细胞中谷胱苷肽(GSH)含量;采用硫代巴比妥法(TBA)测定谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;采用WST-I法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用化学比色法测定丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)活力;采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。结果与对照组比较,高剂量砷、高剂量氟、低剂量砷+高剂量氟、高剂量砷+低剂量氟以及高剂量砷+高剂量氟联合染毒组海马神经细胞MTT吸光度值明显降低(P<0.05);高剂量砷+低剂量氟联合组及高剂量砷+高剂量氟联合组细胞CAT活力明显降低(P<0.05);高剂量砷染毒组、高剂量氟染毒组、低剂量砷+高剂量氟联合组、高剂量砷+低剂量氟联合组及高剂量砷+高剂量氟联合组细胞GSH含量明显下降(P<0.05);高剂量氟染毒组、高剂量砷+低剂量氟联合组及高剂量砷+高剂量氟联合组细胞GSH-Px活力明显下降(P<0.05);高剂量砷染毒组、高剂量氟染毒组、低剂量砷+高剂量氟联合组、高剂量砷+低剂量氟联合组及高剂量砷+高剂量氟联合组细胞MDA含量明显升高(P<0.05);高剂量砷染毒组、高剂量氟染毒组、低剂量砷+高剂量氟联合组、高剂量砷+低剂量氟联合组及高剂量砷+高剂量氟联合组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论氟、砷可导致大鼠海马神经细胞氧化应激并引起细胞凋亡率升高,这可能是氟、砷对动物学习记忆能力产生影响的重要原因。

香烟烟气溶液和砷联合作用对淋巴细胞的影响

目的研究香烟烟气溶液和亚砷酸钠联合作用对大鼠淋巴细胞活力和氧化应激反应的影响,并探讨两者之间是否存在交互作用。方法香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用于大鼠淋巴细胞,用AlamarBlue还原法定量评价细胞活力变化,用细胞内还原型谷胱甘肽含量和丙二醛含量评价细胞内的氧化应激反应,并利用2×3析因设计研究两者的交互作用。结果染毒各组的AlamarBlue还原率以及细胞内还原型谷胱甘肽含量显著降低,细胞内丙二醛含量显著升高。析因设计分析结果表明,香烟烟气溶液和亚砷酸钠对AlamarBlue还原率的影响不存在交互作用,而对细胞内还原型谷胱甘肽含量和细胞内丙二醛含量的影响存在交互作用。结论在本研究中香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用均能够降低大鼠淋巴细胞活力,增强细胞内的氧化应激反应,且两者对细胞内的氧化应激反应的影响存在交互作用。

砷和香烟烟气溶液对氧化应激的协同作用

目的研究亚砷酸钠和香烟烟气溶液联合作用对大鼠淋巴细胞氧化应激的影响,并探讨两者对氧化应激的影响是否存在交互作用。方法大鼠淋巴细胞分为4组:亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组、两者联合作用组和对照组,染毒后用流式细胞术检测细胞内活性氧的含量,用微量荧光法检测细胞内丙二醛含量,用彗星实验检测细胞的DNA损伤,同时采用2×2析因设计研究两者的交互作用。结果亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组和两者联合作用组细胞内的活性氧含量、丙二醛含量、彗星尾长和细胞拖尾率均高于对照组。析因设计分析结果表明两者对细胞内活性氧含量、丙二醛含量及彗星尾长的影响存在交互作用。结论亚砷酸钠和香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞氧化应激的影响存在交互作用,交互作用方式为协同作用。

阻断β-catenin基因对亚砷酸钠诱导大鼠肺组织氧化应激的影响

目的探讨阻断β-catenin基因对亚砷酸钠致大鼠肺组织氧化应激的影响。方法将48只健康SPF(specific pathogen free)级SD大鼠按性别和体质量随机分为对照组(超纯水)、低剂量组(0.45 mg/kg)、中剂量组(2.25 mg/kg)、空白对照高剂量组(11.25 mg/kg)、转染β-catenin siRNA高剂量组(11.25 mg/kg)和转染阴性对照高剂量组(11.25 mg/kg),自由经口饮水染毒16周,β-catenin siRNA转染1周。HE染色法观察大鼠肺组织病理学;石墨炉原子吸收法测定大鼠血液、尿液和肺组织中砷水平;化学荧光法测定ROS含量;ELISA法测定SOD活性、GSH和MDA含量。结果低剂量组、中剂量组和空白对照高剂量组大鼠肺组织随着染砷剂量和染砷时间的增加而呈现不同程度的炎症细胞浸润,肺泡间隔增宽,肺泡融合;空白对照高剂量组大鼠肺组织病理损伤较严重,出现部分肺组织纤维化。低剂量组、中剂量组和空白对照高剂量组大鼠血砷、尿砷和肺组织砷水平随着染砷剂量增加和染砷时间延长呈上升趋势(P<0.05)。空白对照高剂量组大鼠肺组织中ROS荧光值较对照组、低剂量组和中剂量组增加(P<0.05);MDA含量较对照组增加(P<0.05)。空白对照高剂量组大鼠肺组织中SOD和GSH含量较对照组和低剂量组减少(P<0.05)。阻断β-catenin基因后,转染β-catenin siRNA高剂量组大鼠肺组织病理损伤较空白对照高剂量组和转染阴性对照高剂量组严重,出现大部分肺组织纤维化。转染β-catenin siRNA高剂量组和转染阴性对照高剂量组大鼠血砷、尿砷和肺组织水平较对照组、低剂量组和中剂量组增加明显(P<0.05)。转染β-catenin siRNA高剂量组和转染阴性对照高剂量组大鼠肺组织中ROS荧光值较对照组、低剂量组和中剂量组增加(P<0.05);MDA含量较对照组增加(P<0.05)。而转染β-catenin siRNA高剂量组和转染阴性对照高剂量组大鼠肺组织SOD活性和GSH含量较对照组和低剂量组减少(P<0.05)。大鼠肺组织砷含量和ROS荧光值呈显著正相关(r_s=0.655,P<0.001)。大鼠肺组织中ROS荧光值与SOD活性呈低度负相关(r_s=-0.441,P<0.002);与GSH含量呈显著负相关(r_s=-0.599,P<0.001);与MDA含量呈低度正相关(r_s=0.395,P<0.006)。结论长期砷暴露使砷在大鼠体内持续性蓄积,诱导大鼠肺组织氧化应激,导致大鼠肺组织损伤。阻断β-catenin基因,对大鼠肺组织氧化应激影响较小。

亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12损伤的作用机制

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12损伤作用的机制。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,设置6个NaAsO_(2)浓度[0(对照)、10、15、20、25及30μmol/L]组,分别用相应浓度的NaAsO_(2)处理AML12细胞24 h;采用化学比色法和油红O染色法检测各组AML12细胞内丙二醛(MDA)和脂质含量水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测各组小鼠AML12细胞内法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)mRNA和FXR、SHP、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果与对照组相比,10-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内MDA含量升高、但FXR和SHP mRNA及FXR蛋白相对表达量下降(P<0.05),2-33 pmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内脂滴含量增加(P<0.05),20-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内SHP蛋白相对表达量降低(P<0.05),25-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内BAX蛋白相对表达量增高(P<0.05)。结论NaAsO_(2)可致小鼠肝细胞AML12损伤,其机制可能与FXR-SHP信号通路的失调有关。

亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的机制研究

目的探究亚砷酸钠对胚胎p66Shc表达调控的分子机制。方法利用5μmol/L亚砷酸钠处理HEK293ET细胞,收集细胞样品,利用实时定量PCR(Q-PCR)检测p66Shc转录水平,Western Blot检测Sirt1的蛋白表达;利用Sirt1siRNA和对照siRNA分别转染细胞,随后5μmol/L亚砷酸钠处理细胞,收集细胞样品,Western Blot检测亚砷酸钠对Sirt1和p66Shc蛋白表达的影响。结果与对照组相比,5μmol/L亚砷酸钠处理组p66Shc转录水平显著升高(P<0.001),Sirt1蛋白水平显著降低(P<0.001)。Sirt1siRNA转染能够抑制细胞Sirt1的表达。亚砷酸钠处理后,Sirt1siRNA转染组Sirt1的表达与对照siRNA转染组相比显著降低(P<0.001),p66Shc的表达显著升高(P<0.001)。结论亚砷酸钠可能通过抑制Sirt1的表达上调p66Shc的表达。

亚砷酸钠对AML12肝细胞氧化应激、凋亡损伤及Hippo信号通路的影响

背景:肝脏作为砷毒作用的主要靶器官,成为砷毒性作用机制相关研究的关注焦点。目的:探究亚砷酸钠(NaAsO_(2))对AML12肝细胞氧化应激、凋亡的作用及Hippo信号通路中关键分子表达的影响。方法:AML12肝细胞分别暴露于0,10,15,20,25,30μmol/L亚砷酸钠24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞存活率,荧光探针染色结合流式细胞术检测细胞内活性氧表达水平,化学比色法检测细胞内半胱天冬氨酸蛋白酶3相对活性,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测Yes相关蛋白mRNA表达水平,Western blot检测磷酸化哺乳动物不育系20样激酶1/2、磷酸化Yes相关蛋白、Yes相关蛋白的蛋白表达水平。结果与结论:①与对照组相比,随着亚砷酸钠浓度的增加:AML12肝细胞存活率逐渐降低;AML12肝细胞内活性氧表达水平逐渐升高;AML12肝细胞内半胱天冬氨酸蛋白酶3相对活性及细胞凋亡率逐渐升高;AML12肝细胞Yes相关蛋白mRNA相对表达量无明显变化;AML12肝细胞磷酸化哺乳动物不育系20样激酶1/2和磷酸化Yes相关蛋白的蛋白相对表达量逐渐升高、Yes相关蛋白的蛋白相对表达量逐渐降低;②提示亚砷酸钠所致AML12肝细胞氧化应激和凋亡损伤可能与Hippo信号通路的激活有关。

亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及MST1、MST2蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、MST2蛋白表达的影响。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,分为对照组(不含NaAsO_(2))及实验组(10、15、20、25及30μmol/L NaAsO_(2)处理24 h),采用荧光探针染色法和化学比色法分别检测各组小鼠AML12细胞内活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化(SOD)活性水平,采用Western blot检测各组小鼠AML12细胞的MST1、MST2、磷酸化MST1/2(p-MST1/2)及半胱氨酸蛋白酶3剪接体(c-caspase 3)蛋白相对表达量。结果与对照组相比,随着NaAsO_(2)浓度的增加,各实验组小鼠AML12细胞内ROS含量逐渐升高(P<0.05),SOD活性逐渐降低(P<0.05);与对照组相比,各实验组小鼠AML12细胞内p-MST1/2蛋白相对表达量升高(P<0.05),20-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内为MST1蛋白相对表达量降低、c-caspase 3蛋白相对表达量升高(P<0.05),15-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内MST1蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论NaAsO_(2)可促进小鼠肝细胞AML12发生氧化应激、凋亡及p-MST1/2、MST1、MST2蛋白表达异常。

亚砷酸钠暴露14周诱导肝癌细胞LM3氧化损伤及恶性迁移的研究

目的·探究不同剂量的亚砷酸钠暴露对人肝癌细胞株LM3细胞的影响,分析亚砷酸钠促进肝癌细胞恶性迁移的分子机制。方法·建立细胞亚砷酸钠染毒模型,分别用含0、1、10μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基连续培养LM3细胞14周。暴露结束后,从细胞培养基中去除亚砷酸盐,用不含亚砷酸钠的培养基培养细胞1周使其恢复。以同一批次传代未经过亚砷酸钠处理的细胞作为对照组。分别用CCK-8增殖实验、Transwell迁移实验、DCFH-DA活性氧荧光探针实验验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞增殖、迁移和氧化应激的影响;用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞相关基因的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果·相比对照组,1μmol/L和10μmol/L亚砷酸钠染毒能显著增强LM3细胞内的活性氧水平(均P<0.05),并促进LM3细胞的恶性迁移(均P<0.05),且该作用呈剂量依赖性,但亚砷酸钠对LM3细胞的增殖并无显著影响。亚砷酸钠染毒可以上调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases 2,NOX2)、促分裂原活化蛋白激酶8 (mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)基因表达水平,上调NOX2、MAPK8蛋白的表达水平。结论·亚砷酸钠暴露能增强LM3细胞的迁移能力和氧化应激水平,也能上调VEGF、NOX2、MAPK8基因的表达,提示亚砷酸钠促进LM3细胞恶性迁移的机制可能与氧化损伤及这些基因的表达上调有关。

亚砷酸钠对HaCaT细胞DNA甲基转移酶的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

[背景]砷暴露可致人皮肤病变,砷所致的DNA甲基化改变是其主要的致病机制之一,但砷如何引起DNA甲基化改变目前尚未明确。[目的]本研究以永生化的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)为研究对象,检测亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对HaCaT细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)m RNA和蛋白表达水平的影响,并探讨砷所致氧化应激与其所致DNMTs mRNA和蛋白表达水平改变之间的关联。[方法]给予HaCaT细胞不同浓度的NaAsO2(0、0.625、1.25、2.50μmol·L^-1)处理,干预组给予10.0μmol·L^-1抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理4 h后加入2.50μmol·L^-1 NaAsO2,染毒时间为72 h。应用免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,生化法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞DNMT1、DNMT3a和DNMT3b mRNA水平,Western blotting法检测DNMTs蛋白水平。[结果]不同浓度NaAsO2处理HaCaT细胞72 h后,HaCaT细胞ROS含量、MDA水平随染毒浓度的增加而升高(F趋势=441.675,P<0.001;F趋势=22.430,P=0.012);1.25、2.50μmol·L^-1浓度组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05)。随染毒浓度的增加,DNMT1m RNA及蛋白表达水平升高(F趋势=30.280,P=0.001;F趋势=40.421,P<0.001),DNMT3a mRNA及蛋白表达水平降低(F趋势=226.283,P<0.001;F趋势=30.848,P=0.001),DNMT3b蛋白表达水平升高(F趋势=15.095,P=0.005);各染毒组DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。NAC处理后,与2.50μmol·L^-1 NaAsO2单独处理组相比,Ha Ca T细胞ROS含量、MDA水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),DNMT3a m RNA及蛋白水平无明显改变(P>0.05),DNMT3b蛋白水平降低(P<0.05),m RNA水平无明显改变(P>0.05)。[结论]NaAsO2可改变HaCaT细胞DNMTs mRNA及蛋白表达水平,这种变化可能与砷所致的氧化应激有关。

活性氧、丙二醛及超氧化物歧化酶在NaAsO_2致人角质形成细胞恶性转化过程中的动态变化

目的探讨氧化应激相关指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在砷致人角质形成细胞(human keratinocytes,Ha Ca T)恶性转化不同阶段的动态变化。方法以含1.0μmol/L Na As O2的DMEM高糖完全培养基连续培养Ha Ca T细胞35代后,用基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平变化、细胞生长动力学改变和软琼脂集落形成实验鉴定其是否发生恶性转化。分别收集0、1、7、14、21、28和35代细胞,采用流式细胞仪检测不同代数细胞内ROS活性,生化法检测细胞内MDA含量及SOD活性变化。结果 1.0μmol/L Na As O2处理Ha Ca T细胞28代开始MMP-9相对蛋白水平明显上升,35代后细胞生长速度明显增快,倍增时间明显缩短;软琼脂集落形成数为(107±11)个,较对照组(24±7)明显增多(P<0.01)。ROS水平在染毒0到14代间呈先上升后下降随后再上升趋势,14代以后ROS水平逐渐降低。MDA含量在染毒1代时达到峰值,随后呈缓慢下降趋势。SOD活性在染毒0到21代呈先上升后缓慢下降趋势,21代以后其活性再次升高,呈持续上升趋势,且较0代明显升高(P<0.05)。结论低剂量亚砷酸钠长期诱导Ha Ca T细胞发生恶性转化过程中伴随细胞内氧化-抗氧化平衡失调,染毒后期SOD活性持续增加而ROS水平持续降低。

姜黄素干预对无机砷暴露小鼠急性肝脏损伤的拮抗作用

目的观察姜黄素干预对无机砷暴露所致急性肝脏损伤的拮抗作用。方法实验小鼠自由饮用不同浓度(10 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)亚砷酸钠(NaAsO2)6周,再分别给予姜黄素灌胃干预(200 mg/kg和600 mg/kg,每周2次),分别测定小鼠血清ALT和AST活力,全血和肝脏GSH含量以及肝脏MDA含量。结果与单纯染毒组小鼠相比,姜黄素干预组血清ALT和AST活力显著下降,全血和肝脏GSH含量显著升高,且肝脏MDA含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素干预对无机砷暴露小鼠的急性肝脏毒性和氧化损伤具有一定的拮抗作用。

亚砷酸钠致SV-HUC-1细胞氧化应激作用的研究

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1的氧化应激作用。方法以不同浓度NaAsO(20、0.1、0.2、0.5、1、2、4、6、8、10、20μmol/L)对SV-HUC-1细胞进行染毒,采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活力,利用2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,分别应用DTNB比色法、硫代巴比妥酸比色法和黄嘌呤氧化法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果与空白对照组比较,全部染毒组细胞活力均下降(P<0.05);染毒24h后,全部染毒组ROS水平均显著升高(P<0.05);2、4μmol/LNaAsO2组细胞GSH含量显著升高(P<0.05);全部染毒组细胞MDA含量均无变化(P>0.05);全部染毒组细胞SOD活力均显著降低(P<0.05)。结论氧化应激可能是NaAsO2致SV-HUC-1细胞毒性作用的机制之一。

亚砷酸钠对人支气管上皮细胞的氧化损伤作用

目的探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响。方法体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50 000μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测定细胞活性;加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24 h,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞DNA链断裂情况。结果与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HBE细胞内ROS、MDA含量和Olive尾矩均显著升高,细胞存活率和SOD活力均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HBE细胞内MDA、ROS含量和Olive尾矩均呈明显的上升趋势(P<0.05),细胞存活率和SOD活力均呈明显的下降趋势(P<0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导HBE细胞氧化损伤增加,提示氧化应激可能是亚砷酸钠致HBE细胞毒作用机制之一。

亚砷酸钠致人支气管上皮细胞恶性转化过程中氧化应激指标变化

目的探讨在亚砷酸盐致人支气管上皮(HBE)细胞恶性转化过程中氧化应激指标的变化趋势,初步探讨其对细胞恶性转化的作用。方法用1μmol/L亚砷酸钠连续染毒HBE细胞。通过形态学观察、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及软琼脂克隆实验鉴定细胞恶性转化情况,分别于暴露1、8、15、22、29、36、43代,以流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果亚砷酸钠长期染毒HBE细胞至43代时,细胞生长速度明显加快,且呈浸润型生长,MMP-9分泌量升高,细胞集落数量增多。与正常对照(0代)比较,22代及以前HBE细胞内ROS、MDA及SOD的水平均呈先升高后下降的波浪形趋势;29代及以后,ROS、MDA水平逐渐下降,且以ROS表现更为明显,而SOD水平呈逐渐升高趋势。结论细胞内氧化-抗氧化平衡失调可能在低剂量砷化合物诱导HBE细胞恶性转化过程中发挥重要作用。

雄黄与亚砷酸钠亚急性暴露对小鼠砷代谢及氧化应激影响的比较

目的探讨经口染毒雄黄、亚砷酸钠后,小鼠体内砷代谢及氧化应激指标的变化,为评价雄黄的毒性提供实验数据。方法清洁级雌性昆明小鼠随机分为对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、0.5 g/kg雄黄组和0.1 g/kg亚砷酸钠组,各组均灌胃染毒3 d,用氢化物发生-超低温捕集-原子吸收分光光度法分别测定尿液和肝组织中无机砷(iAs)、一甲基胂(MMA)和二甲基胂(DMA)。用试剂盒法测定全血中GSH和肝脏T-AOC水平。结果雄黄组小鼠尿液和肝脏中各形态砷和总砷含量高于对照组,但低于亚砷酸钠组;一甲基化率(FMR)和二甲基化率(SMR)高于亚砷酸钠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。雄黄组全血GSH和肝脏T-AOC水平均高于亚砷酸钠组(P<0.05),其全血GSH和肝脏T-AOC水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与亚砷酸钠相比,雄黄中的砷在小鼠体内代谢较慢,对氧化应激指标影响较小。