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题名一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因
被引量:2
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作者
刘美芹
沈昕
卢存福
尹伟伦
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机构
北京林业大学生物科学与技术学院
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出处
《北京林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期67-72,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(30371143
30671476)
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文摘
该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因.
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关键词
固相扣除杂交
聚合酶链式反应
低温诱导基因
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Keywords
solid subtractive hybridization,polymerase chain reaction(pcr),cold-inducible genes
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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