MTT肿瘤药敏试验中培养基的选择

目的考察RPMI1640双琼脂培养基(R)对肿瘤细胞培养的选择性,选择适合的MTT法培养基。方法用R和肿瘤细胞选择性培养基(completeassaymedium,CAM)分别进行乳腺、肠、胃癌的MTT药敏试验。结果所试的3个癌种、20个药品总体来说在两种培养基中抑制率无统计学差异(P>0.05),单个药敏在乳腺癌中长春新碱、长春地辛和吡柔比星的CAM培养抑制率大于R培养(P<0.05),在肠、胃癌中无统计学差异。结论R培养肿瘤细胞的选择性和CAM相当,但鉴于R抑制成纤维细胞能力相对比CAM弱,R可能更适合含纤维细胞较少的癌种。

甘蓝型油菜小孢子培养子叶形胚发育成苗研究

甘蓝型油菜小孢子细胞诱导胚状体以子叶胚和非子叶胚如球形胚、心型胚和类似于胚的结构形态存在。子叶胚在成苗培养基上能够快速生长成植株,但是非子叶胚难以一次成苗,容易褐化死亡,因此减少非子叶状胚、培育高质量子叶胚是提高油菜小孢子再生成植株效率的关键步骤。为了提高甘蓝型油菜小孢子培养过程中诱导子叶胚的数目,对3个甘蓝型油菜品系分离得到的小孢子细胞在25℃下暗培养2周,之后转移到固液双层培养基上培养。通过对摇床的振荡周期、培养温度、固液双层培养基中活性炭的浓度以及6-BA不同梯度的处理,分析诱导子叶胚和非子叶胚发生的数目。结果显示,3个品系小孢子细胞在固液双层培养基上诱导得到的子叶胚数目显著高于液体培养基上诱导发生的数目。小孢子细胞在固液双层培养基上振荡培养1周所得子叶胚数目显著增加。降低小孢子培养温度至23℃,出胚总数和对照差异不显著,但子叶胚的数目显著增加。在固液双层培养基中的下层固体培养基中加入0.1%活性炭和0.25 mg/L 6-BA能够有效提高子叶胚的数目。此外,相比前人只用液体培养基培养的方法,本试验建立了两步培养方法(先液体培养后固-液双层培养)能有效获得子叶胚,从而快速生成植株,提高了甘蓝型油菜小孢子培养技术创制育种资源的效率。