复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的工艺优化

为研究蛋膜蛋白的利用,采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶进行单一酶解筛选实验,然后进行复合酶解实验。采用二次正交旋转组合设计,以水解度、氮收率为指标,研究酶制剂种类、加酶方式、复合酶比例、总加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备多肽工艺的影响。综合考虑水解度和氮收率因素,最终确定复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的最佳工艺条件为:总加酶量16000U/g,并以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活力配比为8:2先后加入;酶解时间为碱性蛋白酶2h、木瓜蛋白酶1h;pH值为碱性蛋白酶9.0、木瓜蛋白酶5.5;酶解温度为50℃。该条件下制备的蛋膜蛋白酶解产物水解度和氮收率分别为46.12%、85.56%。

电纺制备PLGA/可溶性蛋壳膜蛋白纤维膜及其性能研究

目的评价静电纺丝法制备的PLGA/可溶性蛋壳膜蛋白(soluble eggshell membrane protein,SEP)纤维膜的理化性能和生物相容性。方法利用静电纺丝技术制备PLGA∶SEP=90∶10、70∶30、50∶50的PLGA/SEP纳米纤维膜(实验组)及PLGA纤维膜(对照组)。扫描电镜观察其表面形貌,测量纤维直径。检测接触角、拉伸强度。傅里叶红外光谱分析混合物构象,扫描电镜和MTT法研究成纤维细胞在纤维膜表面生长、增殖情况,评价PLGA/SEP纤维膜的细胞相容性。结果两组纤维膜直径均一,呈相互连通的多孔网状结构。随着PLGA含量的增加,纤维直径、接触角、拉伸强度增大;红外光谱分析表明PLGA与SEP的特征峰均出现在复合膜的红外谱图中;SEM观察PLGA/SEP纤维膜组细胞粘附数目较PLGA纤维膜组多,生长旺盛,并且已有细胞向纤维内部生长;MTT结果也证明成纤维细胞在PLGA/SEP纤维膜上增殖情况优于PLGA纤维膜。结论电纺制备的PLGA/SEP纤维膜既有良好生物相容性又具备一定力学强度,可作为一种具有发展潜力的引导组织再生(guided tissueregeneration,GTR)膜。

静电纺丝技术在禽蛋蛋白质中的应用研究进展

禽蛋是蛋白质的天然宝库,其中多种蛋白质具有抑菌、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等生物活性。蛋白质具有良好的生物相容性和可降解性,当其尺度到纳米级后,会导致其纳米材料具有许多理想的性能。静电纺丝是一种简单有效的制备纳米纤维的方法,因此经过静电纺丝将其制成纳米纤维,不但能提高比表面积和多孔率,更能发挥其重要的功能性质。本文对禽蛋中主要蛋白质如卵白蛋白、溶菌酶、卵黄高磷蛋白、可溶性蛋壳膜蛋白等的静电纺丝技术应用做一综述,为活性蛋白质电纺技术的后续研究提供参考。

可溶性鸡蛋壳膜蛋白-聚丁二酸丁二醇酯共同静电纺丝负载凝血酶制备新型止血敷料的可行性研究

目的探讨以可溶性鸡蛋壳膜蛋白(soluble eggshell membrane protein,SEP)和聚丁二酸丁二醇酯(poly butylene succinate,PBS)共同静电纺丝负载凝血酶制备新型止血敷料的可行性和有效性。方法以PBS/SEP制备新型止血敷料,通过大鼠肝脏创伤模型止血实验、髂动脉出血、肝脏止血材料植入和犬腹主动脉切开缝合后吻合口渗血模型止血实验评估其止血性能及生物安全性;选用人胚纤维母细胞,通过四唑盐比色法试验对其细胞体外毒性进行评价。结果PBS/SEP在大鼠肝脏创伤模型的止血时间和髂动脉出血实验的效果优于对照组,但犬腹主动脉渗血模型的止血时间略长,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞毒性检测发现,不同浓度PBS/SEP浸提液在不同时间段的细胞毒性分级均为0~1级。体内实验提示,植入大鼠肝脏后可能部分影响肝功能,对机体肾功能无损害,且不引起机体全身免疫和炎症反应。结论PBS/SEP共同静电纺丝负载凝血酶止血材料是一种有效的止血材料,生物相容性良好,有良好的临床应用前景。

可溶性鸡蛋壳膜蛋白在聚乙烯表面固定的研究

采用等离子体预处理的技术 ,将具有良好生物相容性的可溶性鸡蛋壳膜蛋白 (SEP)固定在聚合物PE膜表面 ,通过接触角测定、全反射衰减式傅立叶红外光谱 (ATR FTIR)和光电子能谱 (XPS)证明固定方法的可靠性 ,并进一步通过纳米二氧化硅辅助的方法提高了可溶性鸡蛋壳膜蛋白在聚合物表面的固定量。同时 ,采用SEP的良溶剂对SEP固定后的PE膜表面进行长时间洗涤的结果表明 ,SEP均可以被牢固地固定在PE膜的表面 ,完全可以耐受在使用过程中生体组织液的侵蚀 。

静电纺聚乳酸-乙醇酸·蛋壳膜蛋白纤维膜体外降解性能的研究

目的:观察静电纺聚乳酸-乙醇酸.蛋壳膜蛋白(PLGA.SEP)混合纤维膜在体外降解过程中结构、性能的变化。方法:采用静电纺丝技术制备PLGA.SEP混合纤维膜和PLGA纤维膜(对照)。将两种纤维膜浸泡在37℃,pH=7.4的模拟体液(simulated body fluid solution,SBF)中进行降解实验,并分别于降解后2、4、6周检测两种电纺纤维膜降解前后的质量、断裂强度、表面形貌和热分解温度。结果:两种电纺纤维膜的质量、断裂强度均随降解时间的延长而逐渐降低,在降解前2周,下降速度较快,从2周到6周速度减慢;在降解2、4、6周各时间点PLGA.SEP纤维膜的失重率、断裂强度降低率均高于PLGA纤维膜,两者有显著性差异(P<0.05)。两种纤维膜均在降解6周时,纤维吸水发生溶胀,纤维之间粘连,孔径变小,但是结构仍完整,没有出现纤维断裂现象。PLGA.SEP和PLGA电纺纤维膜降解前后均有一个吸热峰,并且随着降解时间的延长,热分解温度逐渐降低,其中PLGA纤维膜在降解各时间点的热分解温度均高于PLGA.SEP纤维膜。结论:PLGA.SEP纤维膜在SBF中降解6周时结构仍完整并保持一定力学强度,可作为一种具有发展潜力的可吸收性引导组织再生(guided tissue regeneration,GTR)膜。

京尼平交联改性可溶性蛋壳膜蛋白冻干支架的制备及检测

目的:评价京尼平交联改性前后可溶性蛋壳膜蛋白(soluble eggshell membrane protein,SEP)冻干组织工程支架的理化性能和生物相容性。方法:冷冻干燥法制备SEP的冻干支架,浸泡于京尼平溶液中交联改性。通过扫描电镜观察其表面形貌。测量其孔隙率、抗拉强度以及降解率,采用溶血实验、亚急性全身毒性实验和细胞毒性实验初步评价其生物相容性。结果:京尼平交联改性前后的SEP冻干支架孔径分别为(280±71)μm和(263±89)μm,孔隙率分别为(90.4±7.6)%和(87.9±9.7)%;交联改性显著提高了SEP冻干支架的拉伸强度和弹性模量,降低了支架的失重率(P<0.01);交联前后的材料均无溶血现象;亚急性短期全身毒性实验中组织切片均未见病理变化;细胞毒性检测均为0级。结论:京尼平交联改性在提高SEP冻干支架的力学强度和抗降解能力的同时,仍可保持支架材料良好的生物相容性。