嵌合蛋白sTNFR II-IgG Fc的克隆、表达与活性分析

肿瘤坏死因子是一种重要的炎性细胞因子 ,目前已知许多免疫疾病与之相关 ,为了抑制TNF的生物学活性 ,将可溶性TNFRII(sTNFRII)和人IgGFc分子通过柔性短肽相连 ,构建成一个嵌合蛋白 ,在大肠杆菌中进行表达 ,并获得了纯化蛋白。实验证明该嵌合蛋白能够自发形成聚合体 ,识别并结合TNF蛋白 ,同单体sTNFRII相比 ,对TNF的中和活性得到了较大的提高。

比较研究TPS、CEA、CYFRA21-1和STNFR四种肿瘤活性标志物在肺癌中的诊断价值

背景与目的近年来,肿瘤标志物的研究不断取得新的进展。其中,组织多肽特异性抗原(TPS)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFR)是近几年逐步应用于临床的新的肿瘤标志物。本研究旨在比较四种肿瘤标志物TPS、癌胚抗原(CEA)、CYFRA21-1和STNFR对肺癌的临床诊断价值。方法用ELISA法对72例肺癌患者的血清TPS、CEA、CYFRA21-1和STNFR水平进行检测,并与54例肺部良性疾病患者及32例正常健康人比较。结果四种肿瘤标志物在肺癌组的水平均明显高于良性疾病组(P<0.005)和正常对照组(P<0.001)。在对肺癌的诊断中,相对而言,STNFR的敏感性(81.9%)最高,CYFRA21-1的特异性(91.5%)最高,TPS的诊断符合率(83.5%)最高。结论TPS、CYFRA21-1和STNFR均是用于肺癌诊断的较好的肿瘤标志物,优于传统标志物CEA,其中又以CYFRA21-1的综合临床应用价值最好。

肺癌患者血清sTNFR、CEA和NSE的检测及其临床意义

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)在肺癌患者血清中的表达水平及联合检测sTN-FR、癌胚抗原(CEA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)对肺癌的临床应用价值。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)72例肺癌患者、54例肺部良性疾病及32例健康正常人的血清sTNFR、CEA及NSE浓度进行检测。结果肺癌组血清sTNFR、CEA及NSE水平均明显高于良性疾病组(P<0.005)和正常对照组(P<0.001)。3种肿瘤标志物的阳性率和浓度均随着临床分期的进展而升高。sTNFR在肺癌早期也有高水平表达。联合检测3种肿瘤标志物的阳性率比单独检测1种或检测其中任意2种都要高。结论肺癌患者血清sTNFR阳性检出率较高,sTNFR是诊断肺癌的一项敏感性强的肿瘤标志物。联合检测这3种肿瘤标志物可以提高对肺癌的诊断率。

介入治疗对胰腺癌患者血清sTNFR-Ⅰ和IAP的影响

目的 探讨胰腺癌患者介入治疗前后血清可溶性肿瘤坏死因子受体 Ⅰ (sTNFR Ⅰ )和免疫抑制酸性蛋白 (IAP)水平的变化及其临床意义。方法 分别用双抗体夹心酶联免疫法 (ELISA)和单向免疫扩散法测定 5 5例中晚期胰腺癌患者行动脉栓塞化疗前后血清sTNFR Ⅰ和IAP的改变 ,并与健康对照组比较分析。结果 胰腺癌组介入治疗前sTNFR Ⅰ和IAP均增高 ,与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 1) ;行化疗栓塞术后 ,患者血清sTNFR Ⅰ和IAP均降低 ,治疗前后差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;应用免疫调节剂组较未用组血清sTNFR Ⅰ和IAP均下降更显著 (P <0 .0 5 )。结论 检测胰腺癌患者血清sTNFR Ⅰ和IAP的水平 ,有助于了解患者的免疫状况 ,介入治疗能改善机体免疫功能 。

肺癌患者血清IL-12、IL-18、STNFRS水平及其与临床病理生理特征的关系

目的:通过检测肺癌患者血清IL-12、IL-18、STNFR水平,探讨其与肺癌临床和病理生理特征的关系。方法:通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测72例肺癌患者,50例肺良性疾病患者及50例正常对照者血清IL-12、IL-18及STNFR水平。结果:肺癌患者IL-12水平显著低于肺良性疾病患者(P<0.01)和正常对照者(P<0.05),肺良性疾病IL-12水平显著高于正常对照者(P<0.05);肺癌患者IL-18、STNFR水平明显高于肺良性疾病患者(P<0.01)和正常对照者(P<0.01),肺良性疾病患者IL-18、STNFR水平与正常对照者之间无显著性差异(P>0.05);肺癌患者中,Ⅲ-Ⅳ期和低分化的肺癌患者血清IL-12水平低于Ⅰ、Ⅱ和中、高分化肺癌患者(P<0.05);肺癌患者血清IL-18水平与在身体状况差(PS≥2)、Ⅲ-Ⅳ期及组织学分级密切相关(P<0.05);身体状况(PS≥2)、Ⅲ-Ⅳ期肺癌患者血清STNFR水平显著高于身体状况(PS<2)、Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者(P<0.05)。结论:检测肺癌患者血清中IL-12、IL-18及STNFR水平对预测肺癌生物学行为可能有一定的临床价值。

精氨酸对胰腺癌介入治疗患者血清sTNFR-1与T淋巴细胞rDNA转录活性的影响

目的探讨精氨酸增强的胃肠外营养对胰腺癌患者介入治疗术后血清可溶性肿瘤坏死因子受体1(sTNFR-1)和T淋巴细胞rDNA转录活性水平的影响及其临床意义。方法分别用酶联免疫法(ELISA)和核仁形成区相关蛋白银染技术测定50例中晚期胰腺癌患者(胰腺癌组)行动脉栓塞化疗术治疗前后血清sTNFR-1和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的改变,并与健康对照组比较分析。结果胰腺癌组介入治疗前sTNFR-1增高,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性降低,与对照组比较差异有极显著性(P<0.01);行化疗栓塞术后,患者血清sTNFR-1降低,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性增高,治疗前后差异有显著性(P<0.05);应用精氨酸治疗组较未用组血清sTNFR-1下降和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性升高更显著(P<0.05)。结论检测胰腺癌患者血清sTNFR-1和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的水平,有助于了解患者的免疫状况,介入治疗辅以合理的免疫营养素能增强患者的免疫功能。

乳腺癌患者化疗前后血清leptin、TNF-α和STNFR检测的临床意义

目的:探讨乳腺癌患者化疗前后血清瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFR)水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析和ELISA对33例肺癌患者进行了化疗前后血清leptin、TNF-α和STNFR测定,并与35名正常健康人作比较。结果:在化疗前,乳腺癌患者血清leptin、TNF-α和STNFR水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),经化疗后3个月与正常人组比较仍有差异(P<0.05)。结论:检测乳腺癌患者血清leptin、TNF-α和STNFR水平的变化对了解病情、观察疗效和预后均有重要的临床价值。

原发性肝癌肝动脉化疗栓塞术前后血清IL-12和sTNFR-Ⅰ水平的改变

目的 研究原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞术前后血清IL -12和sTNFR -Ⅰ水平的变化及其临床意义。方法 采用双抗体夹心酶联免疫法 (ELISA) ,检测 60例中晚期肝癌患者肝动脉化疗栓塞术前后血清IL -12和sTNFR -Ⅰ水平的改变 ,并与健康对照组比较。结果 肝癌组治疗前IL -12水平降低 ,sTNFR -Ⅰ水平升高 ,与对照组比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;肝动脉化疗栓塞术后 ,患者血清IL -12水平升高 ,sTNFR -Ⅰ水平降低 ,治疗前后比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1) ;应用免疫调节剂组较未应用组血清IL -12水平升高和sTNFR -Ⅰ水平下降更显著。结论 检测原发性肝癌患者血清IL -12和sTNFR -Ⅰ的水平 ,有助于了解患者的免疫状况 ,肝动脉化疗栓塞术能改善患者机体免疫功能 。

肺癌患者化疗前后血清IL-2、TNF-α和STNFR检测的临床意义

目的:探讨了肺癌患者化疗前后IL-2、TNF-α和STNFR水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对36例肺癌患者进行化疗前后血清IL-2、TNF-α和STNFR的检测并与35名正常健康人作比较。结果:肺癌患者化疗前血清IL-2水平非常显著的低于正常人组(P<0.01),而TNF-α、STNFR水平明显高于正常人组(P<0.01),化疗后6个月在未复发的25例中明显下降,接近于正常人组,而复发组5例又回升至化疗前水平(P<0.05)。结论:检测肺癌患者血清中IL-2、TNF-α和STNFR含量的变化可作为诊断和疗效观察的参考。

战场仿真训练对学员血清sTNFR-1和T细胞rDNA的影响

目的观察虚拟现代战争模拟教室对参加海训学员血清可溶性肿瘤坏死因子受体-1(sTNFR-1)和T淋巴细胞rDNA转录活性的影响。方法使用高科技的音像设备如PD3+投影仪、环形屏幕、高保真音响、动感座椅等,现代高科技三维动画技术制作形象逼真影片,建成虚拟现代战场环境的学员训练教室。选择海训学员82名,随机分为实验组40名、对照组42名,实验组进行虚拟现代战场环境的体验训练,分别采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)和核仁形成区相关蛋白银染技术对两组学员海训前后血清sTNFR-1水平和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性进行对比检测。结果虚拟现代战场环境给参训人员以身临战场所接受的听觉、视觉、触觉的刺激与训练。海训后实验组学员血清sTNFR-1和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性均无明显性变化(P>0.05);而对照组学员血清sTNFR-1明显增高(P<0.05),外周血T淋巴细胞rDNA转录活性则明显降低(P<0.05)。结论虚拟现代战争环境训练可提高军校学员在军事应激条件下的适应能力和机体免疫功能。

Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞

TNF-α是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子,参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子活性,已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染人气道平滑肌细胞,利用RT-PCR、免疫组化方法,流式细胞仪,ELISA检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的转录和表达。实验结果证明成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体,感染性滴度达3×1010TCID50/mL,200moi转染气道平滑肌细胞阳性率达99.32%,转染后气道平滑肌细胞在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。转染上清稀释64倍后仍对TNF有拮抗活性。为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。

血清可溶性肿瘤坏死因子受体P55、金属硫蛋白1E对雌激素受体阳性乳腺癌根治术病人临床转归的影响

目的探讨血清可溶性肿瘤坏死因子受体P55(sTNFR-P55)、金属硫蛋白1E(MT1E)对雌激素受体(ER)阳性乳腺癌根治术病人临床转归的影响。方法2017年2月~2018年3月在本院治疗的ER阳性乳腺癌根治术病人146例,依据术后临床转归情况分为复发转移组和未复发转移组,比较两组病人的临床资料、血清sTNFR-P55、MT1E水平。采用多因素Logistic回归分析影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素。制作受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)分析血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的预测价值。结果截止随访结束,146例ER阳性乳腺癌根治术病人共有32例发生复发转移。复发转移组肿瘤直径、肿瘤坏死因子-α、糖类抗原125(CA125)、细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)、肿瘤分期为Ⅲ期占比、血清sTNFR-P55、MT1E水平均高于未复发转移组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,CYFRA21-1(OR=2.768,95%CI 1.107~6.920)、CEA(OR=2.751,95%CI 1.101~6.879)、肿瘤分期为Ⅲ期(OR=3.611,95%CI 1.444~9.029)、sTNFR-P55(OR=3.343,95%CI 1.337~8.361)及MT1E(OR=3.267,95%CI 1.307~8.169)均为影响ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清sTNFR-P55、MT1E及两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测的灵敏度分别为78.12%(95%CI 59.56~90.06)、75.00%(95%CI 56.25~87.87)、71.88%(95%CI 53.02~85.60),特异度分别为63.16%(95%CI 53.56~71.85)、75.44%(95%CI 66.32~82.80)、96.49%(95%CI 90.73~98.87),AUC分别为0.723(95%CI 0.642~0.793)、0.760(95%CI 0.682~0.827)、0.880(95%CI 0.816~0.928)。结论血清sTNFR-P55、MT1E与ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归有关,且血清sTNFR-P55、MT1E两者联合对ER阳性乳腺癌根治术病人临床转归预测效能较高。

川崎病急性期患儿血清Cav-1、sTNFRⅡ/Ⅰ比值与冠状动脉损伤的关系

目的探讨川崎病急性期患儿血清陷窝蛋白-1(Cav-1)、可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)II/I比值与冠状动脉损伤(CALs)的关系。方法选取我院2016年1月至2019年12月收治的136例川崎病急性期患儿,根据是否合并CALs分为CALs组(n=45)和NCALs组(n=91)。比较两组患儿的基础资料、经体表面积(BSA)校正的冠脉内径和血清Cav-1、sTNFR II、sTNFR I及sTNFR II/I比值。采用Spearman相关性分析CALs组血清Cav-1、sTNFR II/I比值与冠脉内径校正值的相关性,多因素Logistic回归分析川崎病急性期患儿合并CALs的影响因素。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Cav-1、sTNFR II/I比值对川崎病急性期患儿合并CALs的预测价值。结果CALs组患儿的血清Cav-1、sTNFR II、sTNFR I、sTNFR II/I比值均显著高于NCALs组(Z值分别是2.968、4.056、4.308、2.697,P<0.05)。CALs组患儿的LMCA-Z_(校正)、LAD-Z_(校正)、RCA-Z_(校正)值均明显大于NCALs组(Z/t值分别是2.257、1.977、2.552,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,发热持续时间≥10d、IVIG治疗延迟、ESR≥45mm/h、CRP≥40mg/L、Cav-1≥45ng/mL、sTNFR II/I比值≥4是川崎病急性期患儿合并CALs的危险因素(OR值分别是1.174、2.285、1.617、1.423、1.472、2.124,P<0.05)。ROC曲线分析显示,与单项指标相比,Cav-1联合sTNFR II/I比值对川崎病急性期患儿合并CALs的预测价值最大(AUC=0.852),其灵敏度和特异度均较高。结论川崎病急性期合并CALs患儿的血清Cav-1、sTNFR II/I比值升高,且二者均为CALs发生的影响因素,可作为川崎病急性期合并CALs的辅助预测指标。

大肠癌患者可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ的检测

目的：进一步了解大肠癌患者的异常免疫状态，探讨ｓＴＮＦＲⅠ检测的临床意义。方法：用双单抗夹心酶联免疫吸附法检测ｓＴＮＦＲⅠ含量。结果：大肠癌Ｃ期、Ｄ期病人的血ｓＴＮＦＲⅠ浓度显著高于正常对照，为１３０１９０±１３７９２０ｕ／Ｌ、２０７４００±１３７３９０ｕ／Ｌ比５１６４０±２６６７０ｕ／Ｌ。ｓＴＮＦＲⅠ升高程度及异常发生率与肿瘤分期、血ＣＥＡ的异常率有关，而与肿瘤的分化程度无关。结论：ｓＴＮＦＲⅠ的检测对协助大肠癌的早期诊断、病人复发随访及预后判断具有实用价值。

癌症患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ的测定及分析

采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测了177例癌症（其中食管瘤2例、胃癌12例、肠癌47例、肝癌71例、胆管癌1例、胰腺癌4例、肺癌26例、乳腺癌9例、卵巢癌2例、子宫癌2例、鼻咽癌1例）患言血清可溶性肿瘤坏死因子受体I（sTNFRI）水平。结果显示病人血清中sTNFRI浓度（12904±45．58U／ml）显著高于正常对照组（51．64±26.67U／ml）．P＜0．05，而在各种癌症患者中，肝癌病人的sTNFRI水平为最高（223.07±177．16U／ml）。其结果对了解肿瘤病人的异常免疫状态以及sTNFRI检测的临床价值具有重要意义。

喉癌患者血清可溶性白细胞介素2受体和肿瘤坏死因子的检测及意义

采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法，对正常人、声带息肉病人及喉鳞状细胞癌病人的血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ—２Ｒ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）水平进行检测。结果表明，喉癌患者血清ＳＩＬ－２Ｒ水平和ＴＮＦ活性均明显高于正常人及声带息肉病人，差异非常显著（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．００１）。且血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与喉癌的病理分化程度、临床分型、分期及手术前后具有明显的相关趋势，ＴＮＦ则不明显。提示：动态观察血清ｓＩＬ－２Ｒ及ＴＮＦ的变化，可作为分析体内抗肿瘤效应、评价疗效及监测预后的参考指标。

食道癌患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体1测定及临床意义

目的 探讨食管癌患者的异常免疫状态下血清sTNFR1检测的临床意义。材料和方法 用双单抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测40例食管癌患者和30例正常人血清sTNFR1水平。结果 食管癌病人血清sTNFR1浓度[（129.45±42.54）U/ml]显著高于正常人[（51.64±26.67 U/ml），P<0.05]，且其升高程度与病变食管长度、病情轻重及有无恶液质有关。结论 sTNFR1的检测对食道癌的早期诊断和预后具有实用价值。

原发性肝癌患者血清中TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R的测定及其临床意义

目的探讨原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)患者血清中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)水平及其临床意义。方法采用ELISA法测定血清中TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R的含量;观察患者治疗前后细胞因子变化及其预后的关系,并设正常对照组。结果PHC患者血清中TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R含量明显高于对照组(P<0.01);临床Ⅲ期患者血清TNF-a和sIL-2R含量明显高于Ⅰ期(P<0.01);肿瘤根治术后血清中TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R含量较术前明显降低(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.01)。随着肝脏损伤程度的加重,血清中的TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R含量随之增加。PHC患者在治疗前血清中sIL-2R和TNF-α水平明显地高于对照组(P<0.01),经治疗后与对照组比较仍有显著性差异(P<0.05)。结论提示检测PHC患者血清中TNF-a、IL-6、IL-8和sIL-2R含量,对了解PHC患者体内免疫状态、临床诊断和预后判断有重要意义。

胃癌患者血清TNF-α、IL-6、IL-8和sIL-2R的检测及意义

目的 探讨血清TNF -α、IL - 6、IL - 8和sIL - 2R水平与胃癌的关系。方法 用ELISA法测定血清TNF -α、IL - 6、IL - 8和sIL - 2R含量。结果 胃癌患者血清TNF -α、IL - 6、IL - 8和sIL - 2R含量明显高于正常对照组 (P均 <0 .0 5 ) ,临床Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者血清TNF -α和sIL - 2R含量明显高于Ⅰ、Ⅱ期 (P均 <0 .0 5 ) ,肿瘤根治术后血清TNF -α、IL - 6、IL - 8和sIL - 2R含量较术前明显降低 (P均 <0 .0 5 ) ,但仍高于正常对照组 (P均 <0 .0 5 )。结论 检测血清TNF -α、IL - 6、IL - 8和sIL - 2R含量 ,对了解胃癌患者体内免疫状态。

食管癌患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体水平及临床意义

目的 探讨食管癌患者的血清可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNF RI、sTNF RII)水平及其临床意义。方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测 5 6例食管癌患者和 2 0例正常人血清sTNF RI、sTNF RII及癌胚抗原(CEA)水平。结果 食管癌患者的血清sTNF RI显著高于健康对照组 (P <0 0 0 1) ,而sTNF RII则明显低于健康对照组 (P <0 0 5 ) ,sTNF RII与sTNF RI的比值明显低于健康对照组 (P <0 0 0 1)。血清sTNF RII变化的敏感性明显高于血清CEA。结论 血清sTNF RI和sTNF RII水平检测在食管癌的辅助诊断具有一定的临床应用价值。