Immunohistochemical study on distribution of endocrine cells in gastrointestinal tract of flower fish (Pseudophoxinus antalyae)

AIM： To detect distribution and relative frequency of endocrine cells in gastrointestinal tract of flower fish （Pseudophoxinus antalyae）. METHODS： The intestinal tract of flower fish was divided into four portions from proximal to distal; the enlarged area after oesophagus and anterior, middle and posterior intestine. Immunohistochemical method using the peroxidase anti-peroxidase complex was employed. All antisera between four portions of flower fish were compared using ANOVA. RESULTS： Eleven types of gut endocrine cells were determined; they were immunoreactive for calcitonin gene related peptide, substance P, vasoactive intestinal peptide, bombesin, somatostatin-14, secretin, TrkA, TrkB, TrkC, neurotensin, neuropeptide Y, which were found in almost all portions of the gastrointestinal tract. CONCLUSION： The regional frequency of immunoreactive distribution and relative cells in the flower fish, Pseudophoxinus antalyae, are essentially similar to those of other fish.

卡氏棘阿米巴肌动蛋白1的免疫学特性和细胞黏附功能

目的:探讨卡氏棘阿米巴(Ac)肌动蛋白1 (Actin 1)(Ac-Actin 1)的免疫学特性,初步阐明Ac-Actin 1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用。方法:以Ac滋养体cDNA为模板,构建原核表达载体pET 22b (+)-Ac-Actin 1,转化大肠埃希菌感受态细胞BL21 (DE3);1 mmol·L^(-1)异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导表达重组Ac-Actin 1蛋白(rAc-Actin 1),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对rAc-Actin 1进行可溶性分析,通过亲和层析方法纯化带有His标签的rAc-Actin 1。3只新西兰白兔随机分为对照组(1只)和实验组(2只);实验组兔以rAc-Actin 1为免疫原皮下注射400μg,对照组兔注入等量生理盐水,制备抗rAc-Actin 1多克隆兔血清;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体效价并测定IgG亚型,Western blotting法检测抗rAc-Actin 1多克隆兔血清与rAc-Actin 1的免疫反应性,间接免疫荧光实验(IFA)检测Ac-Actin 1在Ac滋养体中的定位。以正常滋养体为对照,抗rAc-Actin 1多克隆兔血清阻断Ac滋养体后与Vero细胞共孵育,显微镜观察Ac-Actin 1对Vero细胞的黏附作用。结果:SDSPAGE和BCA蛋白浓度检测,获得高浓度rAc-Actin 1 (1.7 g·L^(-1))蛋白。ELISA法检测,制备的兔抗rAc-Actin1特异性多克隆抗体效价为1∶6 400, IgG1和IgG2a浓度分别为116.76 g·L^(-1)和1 136.15 mg·L^(-1)。Western blotting法检测,兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体可与rAc-Actin 1发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。IFA检测,rAc-Actin 1主要定位于Ac滋养体的细胞膜上。显微镜观察,与对照组比较,随着抗体与虫体孵育时间的延长,实验组Ac滋养体对Vero细胞的黏附率明显降低(P<0.01),抗rAc-Actin 1特异性多克隆抗体可有效阻断Ac滋养体与Vero细胞的黏附。结论:rAc-Actin 1具有良好的免疫原性和免疫反应性,参与Ac虫体与宿主细胞的黏附作用。

无斑肥螈消化道五羟色胺免疫活性细胞的分布与形态学观察

用S P免疫组织化学的方法对无斑肥螈消化道五 羟色胺 (5 HTIR)免疫活性细胞的分布及形态进行了观察。结果表明 ,5 HTIR细胞从食道到直肠的消化道各段均有分布。其中 ,幽门部密度最高 ,十二指肠次之 ,直肠最低。 5 HTIR细胞形态多样 ,有圆形、梭形、纺锤形或烧瓶形 ,梭形、纺锤形或烧瓶形细胞有较长的胞突 ,有时胞突可见明显分叉。同时讨论了 5 HTIR细胞的分布特点、形态与功能的关系。

黑眶蟾蜍和黑斑蛙消化道5-羟色胺免疫活性细胞的免疫组织化学

对黑眶蟾蜍(Bufomelanostictus)和黑斑蛙(Rananigromaculata)消化道5-羟色胺免疫活性细胞的形态、分布进行了免疫组织化学定位。5-羟色胺免疫活性细胞在黑眶蟾蜍和黑斑蛙消化道各段中均有分布,分布密度均呈升-降-升-降的波浪式分布特点,二者在幽门部和回肠都有个分布的高峰值。黑眶蟾蜍回肠最高,空肠、幽门部次之,十二指肠、直肠最低;黑斑蛙幽门部最高,回肠、空肠次之,食道、贲门部、直肠最低。5-羟色胺免疫活性细胞位于胃的胃腺上皮、食道及肠的粘膜上皮,有圆形、椭圆形、梭形、楔形等,有的有胞突。文中讨论了5-羟色胺免疫活性细胞分布型的原因及形态与功能的关系。

枕纹锦蛇消化道5-羟色胺免疫活性内分泌细胞的分布与形态学观察

采用ABC免疫组织化学法 ,应用 5 -羟色胺 ( 5 HT)特异性抗血清 ,对枕纹锦蛇 (Elaphedione)消化道内含有的 5 HT内分泌细胞进行了免疫组织化学的定位研究和形态学观察。结果显示 ,5 HT细胞在消化道各部位的分布密度呈倒“V”形 ,以十二指肠最高 ,胃贲门部最低。其形态多样 ,上段 (食管、胃 )多为圆形和椭圆形 ,主要分布于上皮基部和腺泡上皮之间 ;中段 (十二指肠、空肠、回肠 )以细长锥体形、梭形、圆形为主 ,主要分布于上皮基部和上皮细胞之间 ;下段 (直肠 )为圆形 ,分布于上皮基部。锥体形细胞常有一个长突起伸入到固有膜或肠腔 ,行使内或外分泌功能 ;梭形细胞有两个细长突起 ,一个指向固有膜 ,另一个指向肠腔 ,表明这种细胞可能具有内、外分泌的双重功能。

抗原激活系统血液免疫反应实验研究

目的:用系统免疫学研究体系探讨在系统血液免疫反应中不同抗原物质激活红细胞调控白细胞免疫反应的实验观察。方法:将卡介苗(1 mg/ml)、瘤苗(S180 5×106ml-1)或酵母菌(5×108ml-1)0.2 ml,以生理盐水(代替抗原物质)0.2 ml为各自对照组加入枸橼酸抗凝全血细胞或白细胞0.2 ml和血浆(或生理盐水0.3 ml)中,37℃水浴1小时,用免疫酶联法测定IL-8和IL-6,用流式细胞仪测定Fy6和CD35分子平均荧光强度。结果:各种抗原物质加入血细胞和血浆组其IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于血细胞和生理盐水组(-0.33±0.05)(P<0.01)。前组IL-6激活率(1.01±0.37)也高于后组,其IL-6激活值为(-0.25±1.06)。各种抗原加入全血细胞和血浆组的IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于各种抗原加入白细胞和血浆组IL-8激活率(0±0.20)(P<0.01)。在各种抗原加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(28.85和25.35)低于生理盐水加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(45.80),各种抗原加入全血细胞和血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(860.4±115.63)明显高于各种抗原加入白细胞血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(565.07±96.35)(P<0.01)。在无血浆组,红细胞对白细胞分泌的IL-8和IL-6有吸附作用。结论:在本实验体系中,各种抗原可激活红细胞调控系统血液免疫反应中的各种白细胞被活化所分泌的IL-8和IL-6含量。在体外抗原可快速激活系统血液免疫反应。红细胞调控各种白细胞释放IL-8和IL-6的机制是复杂的,如红细胞对IL-8和IL-6激活率与血浆和CD35分子量表达密切相关,红细胞IL-8和IL-6吸附率与Fy6和gp130表达密切相关。红细胞与血浆在系统血液免疫反应调控中扮演着重要的角色。

8种有胃真骨鱼消化道降钙素免疫活性细胞的定位及形态学研究

应用过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫细胞化学技术对鳜、大口黑鲈、尼罗非鲫、短盖巨脂鲤、鲇、黄颡鱼、黄鳝和乌鳢等8种有胃真骨鱼消化道粘膜中降钙素免疫活性内分泌细胞进行了免疫细胞化学定位及形态学比较．结果表明，在尼罗非鲫、鳜和大口黑鲈消化道的任何部位均未见到阳性反应。另外5种鱼消化道的不同部位可不同程度地见到阳性细胞，其中黄颡鱼的整个消化道均有降钙素免疫活性的阳性反应；黄鳝和乌鳢的肠道中则无阳性反应，但在它们的胃以及黄鳝的食道中见到阳性细胞；鲇除食道中没有发现阳性细胞外，消化道各段中均有阳性细胞的存在；短盖巨脂鲤则仅在食道中发现阳性细胞。降钙素免疫活性细胞在肠道中的形态大多为长校形，胞体膨大，胞核是空油状，有两个相对的胞突分别伸向肠腔和基膜；胃中的降钙素细胞在位于胃上皮细胞之间时形状多为较短的梭形，而位于胃腺中时其形状较前者更加粗、短，胞突短小，常常呈不规则形状沿胃腺管边缘分布。

胚胎及新生大鼠胃肠道IAPP免疫反应细胞的个体发生

用免疫组织化学ＰＡＰ法研究了胚胎及新生大鼠胃肠道ＩＡＰＰ免疫反应（ＩＡＰＰ－ＩＲ）细胞的个体发生。结果表明，胚胎１４及１５ｄ，大鼠胃肠道未见ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞。胚胎１７ｄ，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞很少，分散在未分化完全的肠上皮细胞间。胚胎１９ｄ，在胃和小肠可见到ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞，以十二指肠较多。胚胎２１ｄ及新生大鼠，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞分布于胃肠道各段，仍以十二指肠多见。它们主要位于上皮细胞间，偶见于小肠绒毛中轴的结缔组织中，并可见细胞的免疫反应强弱不等。本研究结果证明，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞从胚胎１７ｄ起开始存在于大鼠胃肠道。

绍兴家鸭腺胃生长抑素免疫反应细胞的年龄变化

用ＡＢＣ免疫组织化学方法，标记０—２２周龄期绍鸭腺胃生长抑素免疫反应细胞（Ｄ细胞）。观察细胞形态、分布，计数腺胃内Ｄ细胞数目及其与体重、胃重的关系。结果表明；１．腺胃内Ｄ细胞形态多为圆形、卵圆形，单个散在分布。主要位于腺胃腺叶的内侧区和中间区。２．腺胃内Ｄ细胞数随周龄增加而渐增多，至１８周龄达顶峰，２２周龄开始减少。此变化规律用二次曲线方程Ｙ＝０．１０２＋４．４５２Ｘ—０．１４２Ｘ～２反映， Ｒ～２＝０．９５（Ｐ＜０．０１）。３．Ｄ细胞数与体重在６周龄后开始出现负相关，至１８周龄达显著负相关，ｒ＝－０．８２９（Ｐ＜０．０５）。Ｄ细胞数与胃重在各周龄期均未见明显相关。

鲢、鳙、银鲫和团头鲂肠道内分泌细胞中3种肽激素的免疫组化研究

应用ＡＢＣ免疫组化技术，用抑胃多肽、５－羟色胺和内啡肽３种哺乳动物抗血清对鲢、鳙、银鲫和团头鲂的肠粘膜中内分泌细胞进行了检测。结果４种鱼的肠粘膜中均有抑胃多肽免疫反应内分泌细胞存在，但未发现５－羟色胺和内啡肽的免疫反应。抑胃多肽免疫反应内分泌细胞主要分布在前肠前段，并单个地散布在肠褶顶部上皮细胞与杯状细胞之间，多呈长梭形。本文比较了不同食性鱼类和其他动物肠道抑胃多肽免疫反应内分泌细胞的分布规律，讨论了用５－羟色胺和内啡肽免疫染色的结果。

大鼠胃肠道5-羟色胺免疫活性内分泌细胞的分布及形态学观察

本文用肠卷石蜡切片的免疫组织化学反应(硫酸镍铵加强的PAP法)对5只大鼠胃肠道的5-羟色胺(5-HT)免疫活性内分泌细胞的分布及形态进行了研究。结果表明,大鼠胃肠道5-HT免疫活性内分泌细胞在胃幽门部、十二指肠和结肠的密度最高,在空肠、回肠、盲肠和直肠密度中等,在胃体部密度最低。5-HT免疫活性内分泌细胞的形状多样。有的细胞有几个突起穿行于其它上皮细胞之间;有的细胞的基底部有突起,突起的末端含有5-HT阳性物质;有时还见突起穿过基膜进入固有层内。多数细胞的5-HT阳性物质释放到腺腔面和肠腔面,说明EC细胞有内、外两种分泌方式释放5-HT。

银屑病患者体外系统血液固有免疫反应中CD4^+ CD25^+ T细胞及CD4^+ CD25^(high) T细胞的变化与意义

目的用体外系统血液固有免疫反应体系研究银屑病患者外周血CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞的变化,并探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法将灭活大肠杆菌悬液(3×108/mL)0.2mL作为免疫原激活剂加入枸橼酸抗凝的全血细胞悬液0.2mL和血浆0.3mL中,37℃水浴1h,用流式细胞仪测定CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞的比例。结果在加入大肠杆菌的银屑病全血细胞组(银屑病实验组)CD4+ CD25highT细胞比例(1.88%)明显高于银屑病对照组(1.41%)(P﹤0.01),CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞的比例(16.86%,1.88%)明显低于加入大肠杆菌的健康实验组(24.26%,2.81%)(P﹤0.01);银屑病对照组CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞的比例(15.97%,1.41%)较健康对照组明显降低(21.75%,2.17%)(P﹤0.01);健康实验组CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞的比例群(24.26%,2.81%)均明显高于健康对照组(21.75%,2.17%),(P﹤0.05)。结论银屑病患者CD4+ CD25+T细胞及CD4+ CD25highT细胞比例降低,外来抗原刺激后比例升高,但与健康正常人存在差异。这可能与其复杂的系统免疫学发病机制相关。

GnRH免疫活性细胞和神经在大鼠胃肠胰系统分布的初步研究

本研究用免疫金银法。对促性腺激素释放激素(GnRH)免疫活性细胞和神经在大鼠胃肠胰系统的分布,进行了研究。在胃、小肠、大肠和胰腺有GnRH免疫反应阳性的上皮细胞,这些细胞的顶端到达腺腔面或器官腔面,属于开放型的内分泌细胞。在胃和小肠的肌间神经丛、粘膜下神经丛和浆膜下,有GnRH免疫活性神经细胞。在小肠的粘膜下层和固有层,有GnRH免疫活性神经纤维。这些结果提示,GnRH对消化生理可能有重要的意义。

几种激素在鳜胃肠道内分泌细胞中存在的免疫细胞化学证据

用链酶亲和素－生物素过氧化物酶（Ｓｔｒｅｐｔ Ａｖｉｄｉｎ－Ｂｉｏｔｉｎ－Ｃｏｍｐｌｅｘ，ＳＡＢＣ）免疫细胞化学方法，使用４种兔抗消化道激素血清对鳜胃肠道中的内分泌细胞进行鉴别和定位。结果在獗鱼胃的贲门、幽门及肠道中均发现不同程度地存在着生长抑素和五羟色胺免疫活性内分泌细胞。在鳜的贲门上皮和贲门腺之间，幽门上皮和幽门腺之间均分布有生长抑素免疫活性阳性细胞，在贲门腺和幽门腺处的分布较密。五羟色胺细胞则在胃底和肠上皮中较为丰富，此外肠道的肌间神经丛中神经元内也有丰富的分布。这些含五羟色胺的肽能神经元具有典型的 ＡＰＵＤ（Ａｍｉｎｅ Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｔｉｏｎ）细胞特征，提示鱼类的胃肠道同哺乳动物的胃肠道一样富含肽能神经元；为神经－内分泌系统的研究提供有力的形态学依据。另外两种抗血清－高血糖素和胃泌素的免疫细胞化学染色在鳜的胃肠道的各部位均未发现阳性反应。

四种鲤科鱼肠道中高血糖素免疫活性内分泌细胞的研究

应用过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)免疫组织化学技术,用4种哺乳动物中培育出的抗血清对草鱼、青鱼、鲤和翘嘴红鲌4种鲤科鱼的肠内分泌细胞进行免疫、组织化学的鉴别和定位.证实了高血糖素免疫活性内分泌细胞在草鱼整个肠道中均呈阳性反应;在鲤、青鱼前肠中仅有少量阳性反应;在翘嘴红鲌肠道中未见阳性反应。胃蛋白酶原(Pepsinogen)、凝乳酶(Prochymosin)和神经特异烯醇酶(Neuron specific enolase)3种抗血清在4种鱼的肠道中均未发现阳性反应.本文重点描述草鱼高血糖素免疫活性内分泌细胞在肠道各段的分布,密度及其形态学特征,还就其可能的生理功能与草食性哺乳动物胃肠道中该类内分泌细胞进行比较和讨论。

大鼠生后发育期间胃肠道IAPP免疫反应细胞的分布

用免疫组织化学ＰＡＰ法显示正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠生后发育期间胃肠道ＩＡＰＰ免疫反应（ＩＡＰＰ－ＩＲ）细胞，观察其形态和分布。结果表明，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞随生后发育而发生变化。生后１ｄ，ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞即可见于胃肠道各段。１８ｄ时在目体部较多，４５ｄ及成年时小肠各段较多。ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞位于上皮细胞间及固有膜结缔组织中。本实验结果提示，大鼠胃肠道各段ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞在个体生后继续发生变化。本文对上述结果可能的生物学意义进行了讨论。

肿瘤相关抗原基因HCA519在昆虫细胞中的表达和纯化

为进行肿瘤细胞免疫应答的研究及制备肿瘤诊断用抗体 ,利用昆虫细胞表达系统表达了肿瘤相关性抗原HCA5 19的重组蛋白 ,并进行了纯化 .所表达的重组蛋白分子量约 10 0kD ,含 75 5个氨基酸残基 ,在HCA5 19cDNA3′端接入FLAG序列 ,则在重组蛋白C端接入 1个 8肽的FLAG尾 .利用其特异性抗体可以有效地纯化重组蛋白 .该FLAGTAG不影响整个重组蛋白的免疫反应性 .纯化的重组蛋白与天然蛋白具有相同或相似的免疫反应性 .它可与识别天然蛋白的血清抗体发生同样的阳性反应 .HCA5 19的足量提供 ,可以免疫动物 ,制备抗体 ;可作为抗原 ,分析其诱导肿瘤病人CTL的特异应答 。

人、大鼠、豚鼠、猪、狗和牛胰腺生长抑素免疫反应细胞形态和分布的比较研究

用免疫组织化学ＡＢＣ法，观察了人、大鼠、豚鼠、猪、狗和牛胰腺体部生长抑素样免疫反应（ＳＳＬＩ）细胞的形态和分布。结果显示：ＳＳＬＩ细胞在人和豚鼠胰腺散在分布于整个胰岛，细胞较大，呈卵圆形、圆形或梨形，常可见较长的胞质突起。在豚鼠外分泌部的腺泡，偶见散在的圆形或卵圆形ＳＳＬＩ细胞镶嵌于腺泡细胞间。在大鼠、猪和牛，ＳＳＬＩ细胞集中分布于胰岛的周边部，较少看到胞质突起。在狗胰腺，ＳＳＬＩ细胞集中分布在胰岛中央，周边部很少见到，细胞较小；除胞质外，胞核也含有ＳＳＬＩ阳性物质。在细胞数量上，以豚鼠和狗的单位胰腺组织面积内细胞最多，牛次之，人、大鼠和猪则较少。在ＳＳＬＩ细胞所占胰岛面积的百分比上，狗胰腺的ＳＳＬＩ细胞最高，为３３％左右。豚鼠次之，为１８％；人和牛分别为１１％和９％，大鼠和猪都在５％左右。哺乳动物胰腺ＳＳＬＩ细胞形态、分布及数量上的差别，说明ＳＳ在不同种属动物胰腺中的作用方式、作用强度和范围有所不同。

鲤、青鱼肠粘膜内分泌细胞的免疫组织化学鉴别和定位

使用过氧化物酶——抗过氧化物酶(PAP)的免疫组织化学染色技术,用10种哺乳动物激素培育出的抗血清对鲤、青鱼肠道粘膜中内分泌细胞的鉴別表明,它们的肠道粘膜上皮中存在有胃泌素、P物质、牛胰多肽、亮氨酸脑啡肽、胰高血糖素样免疫反应物、抑胃多肽等6种免疫活性內分泌细胞;而五羟色胺、胆囊收缩素和神经降压素没有免疫活性反应。在鲤的肠粘膜中存在生长抑素免疫活性内分泌细胞;青鱼中则未见到这种细胞。两种鱼的各种免疫活性內分泌细胞多数在前肠的分布密度较大;但青鱼肠粘膜中P物质和亮氨酸脑啡肽两种免疫活性内分泌细胞却在直肠中分布最多;胰高血糖素样免疫活性内分泌细胞在中肠分布最多。P物质和胃泌素免疫活性內分泌细胞大多数分布于肠褶顶部;其他各种免疫活性內分泌细胞则主要分布于肠褶的中、底部。本文比较了鲤、青鱼的肠内分泌细胞在各肠段中的分布密度,并对其形态学及分布特点进行描述和讨论。