高粱MATE基因的克隆及在酵母中的重金属耐受性分析

从高粱Zn缺乏处理的深度测序数据中,得到一个差异表达显著的基因Sb04g031980,序列分析表明,该基因编码一个MATE家族转运蛋白,故命名为SbMATE。为揭示该基因在高粱Zn响应中的功能,将SbMATE基因置于酵母表达启动子之下,构建酵母表达载体,并将其转入重金属敏感型酵母突变体。酵母中亚细胞定位分析表明,SbMATE定位于酵母细胞的液泡中。酵母重金属耐受性实验表明,SbMATE在酵母中的过量表达提高了酵母细胞对Zn2+毒害的耐受性,表明SbMATE在植物细胞对Zn2+吸收和耐性中发挥了重要作用。

老化时间和温度对高丹草种子发芽率的影响

本试验以2份发芽率不同的高丹草种子(Lot1和Lot2)为对象,研究比较不同的老化温度(39℃、41℃、43℃和45℃)和老化时间(24h、36h、48h、60h、72h、84h和96h)对高丹草种子发芽率的影响,筛选高丹草种子进行人工加速老化测定的适宜条件。结果表明,在老化温度处理中,随着老化温度的升高,Lot1和Lot2发芽率显著下降(P<0.05),43℃老化效果最明显,Lot1发芽率由65%降至25%,Lot2发芽率由46%降至16%;在老化时间处理中,随着老化时间的延长,Lot1和Lot2发芽率显著下降(P<0.05),老化60h后种子发芽率降幅最大;老化温度与老化时间是促进种子老化的关键因素。

高粱抗虫基因CYP71E1表达载体的Gateway技术构建

[目的】探讨高梁HCN途径关键酶CYP71EI基因对玉米幼苗抗螟虫的影响，为培育抗玉米螟新品种奠定基础。[方法】以高梁自交系BTx623幼苗总RNA为模板，反转录成cDNA，利用聚合酶链式反应（PCR）扩增出1854bp的CYP71E1基因全长。利用基于位点特异性重组的Gateway技术，通过TOPO克隆将该基因克隆到入门克隆（vCRw8／GW／TOP00），在LR克隆酶作用下将入门克隆重组到表达载体（pMDC141）中。【结果】成功构建pMDC141-CYP71E1表达载体并将构建好的表达载体导人农杆菌EHA105，PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致。【结论】Gateway克隆技术与传统的克隆方法相比具有阳性克隆率高、快速、灵活等优点。