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栓菌420漆酶C基因的克隆、高效表达及重组酶的染料脱色潜能
被引量:
12
1
作者
李剑凤
洪宇植
肖亚中
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期54-58,共5页
根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物,从新型漆酶合成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因组DNA扩增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,应用长距离反向PCR技术获得其两端侧翼序列。克隆得到的lacC序列长3640bp,包括长2263bp的...
根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物,从新型漆酶合成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因组DNA扩增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,应用长距离反向PCR技术获得其两端侧翼序列。克隆得到的lacC序列长3640bp,包括长2263bp的开放读码框及5′和3′-非编码区。lacC cDNA序列长1560bp,编码一519aa的多肽。推导的LacC蛋白序列内部存在有10个潜在的N-糖基化位点和4个铜原子结合区。将不含自身信号序列的lacC cDNA以pPIC9载体为媒介克隆到表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115细胞。重组菌在含有0.3mmol/LCuSO4和0.8%丙氨酸的BMM培养基中20℃培养9d,重组漆酶(rLacC)产量达到1.62×104U/L。用发酵粗酶液对终浓度50mg/L的染料进行脱色实验,结果表明,6U/L的rLacC对测试的三甲基类和偶氮类染料具有良好的脱色作用,小分子介体ABTS和HBT能够提高rLacC对染料的脱色效率和脱色速度。
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关键词
TRAMETES
sp.420
真菌漆酶
异源表达
染料脱色
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职称材料
栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达
被引量:
2
2
作者
李剑凤
洪宇植
肖亚中
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2007年第3期25-28,共4页
根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametessp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5′-和3′-非编码序列。lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560...
根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametessp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5′-和3′-非编码序列。lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560bp,编码495aa成熟多肽和24aa信号肽。lacB与其它不同来源的真菌漆酶基因具有较高的同源性,而与植物、细菌、昆虫的漆酶基因同源性低于25%。将不含信号序列的lacBcDNA通过质粒pPIC9克隆到表达载体pPIC9K上,电击转化毕赤酵母GS115细胞,经BMM-ABTS平板筛选得到漆酶分泌阳性转化子。
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关键词
栓菌
420
毕赤酵母
漆酶
基因克隆
异源表达
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职称材料
栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质
被引量:
9
3
作者
周宏敏
洪宇植
+3 位作者
肖亚中
CUI Teng-Jiao
WANG Xiao-Tang
蒲春蕾
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期1055-1059,共5页
栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量...
栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×10^5u/L、7、38×10^4u/L[以2,2'-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸(ABTS)为底物]。在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×10^5u/L,同时其生产周期降至7.5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3~10的范围内均稳定。然而,rLacDx对底物ABTS的比活力(1761u/mg)高于rLacDe(1122u/mg),其表观Km值(427μmol/L)低于rLacDe(604μmol/L)。
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关键词
异源表达
高密度发酵
漆酶
毕赤酵母
栓菌
420
下载PDF
职称材料
题名
栓菌420漆酶C基因的克隆、高效表达及重组酶的染料脱色潜能
被引量:
12
1
作者
李剑凤
洪宇植
肖亚中
机构
安徽大学生命科学学院和现代实验技术中心
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期54-58,共5页
基金
国家自然科学基金(30670069
30470056)
+2 种基金
安徽省优秀青年基金(04043048
05023057)
安徽大学211工程学术创新团队基金(02203109)~~
文摘
根据漆酶铜结合保守区氨基酸序列设计简并引物,从新型漆酶合成菌株栓菌420(Trametes sp.420)基因组DNA扩增得到一新的漆酶同工酶基因(lacC)片段,应用长距离反向PCR技术获得其两端侧翼序列。克隆得到的lacC序列长3640bp,包括长2263bp的开放读码框及5′和3′-非编码区。lacC cDNA序列长1560bp,编码一519aa的多肽。推导的LacC蛋白序列内部存在有10个潜在的N-糖基化位点和4个铜原子结合区。将不含自身信号序列的lacC cDNA以pPIC9载体为媒介克隆到表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115细胞。重组菌在含有0.3mmol/LCuSO4和0.8%丙氨酸的BMM培养基中20℃培养9d,重组漆酶(rLacC)产量达到1.62×104U/L。用发酵粗酶液对终浓度50mg/L的染料进行脱色实验,结果表明,6U/L的rLacC对测试的三甲基类和偶氮类染料具有良好的脱色作用,小分子介体ABTS和HBT能够提高rLacC对染料的脱色效率和脱色速度。
关键词
TRAMETES
sp.420
真菌漆酶
异源表达
染料脱色
Keywords
Trametes
sp
.
420
Fungal laccase
Heterologous expression
Dye decolorization
分类号
X703 [环境科学与工程—环境工程]
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职称材料
题名
栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达
被引量:
2
2
作者
李剑凤
洪宇植
肖亚中
机构
安徽大学生命科学学院&现代实验技术中心
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2007年第3期25-28,共4页
基金
国家自然科学基金(30370045
30470056
+3 种基金
30670069)
安徽省优秀青年基金(04043048)
安徽省教育厅自然基金重点(2006kj049A)
安徽大学211工程学术创新团队基金(02203109)
文摘
根据铜结合区的保守氨基酸序列设计简并引物,扩增栓菌420(Trametessp.420)基因组,结合长距离反向PCR(LD-IPCR)技术,克隆得到新型漆酶同工酶B基因(lacB),包括结构基因(2255bp)及5′-和3′-非编码序列。lacB含12个内含子,其cDNA序列长1560bp,编码495aa成熟多肽和24aa信号肽。lacB与其它不同来源的真菌漆酶基因具有较高的同源性,而与植物、细菌、昆虫的漆酶基因同源性低于25%。将不含信号序列的lacBcDNA通过质粒pPIC9克隆到表达载体pPIC9K上,电击转化毕赤酵母GS115细胞,经BMM-ABTS平板筛选得到漆酶分泌阳性转化子。
关键词
栓菌
420
毕赤酵母
漆酶
基因克隆
异源表达
Keywords
Trametes
sp.420
Pichia pastoris
laccase
gene cloning
heterologous expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质
被引量:
9
3
作者
周宏敏
洪宇植
肖亚中
CUI Teng-Jiao
WANG Xiao-Tang
蒲春蕾
机构
安徽大学生命科学学院&现代实验技术中心
佛罗里达国际大学化学与生物化学系
中国科学技术大学生命科学学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期1055-1059,共5页
基金
国家自然科学基金(Nos30370045
30470056和30670069)
+3 种基金
安徽省优秀青年基金(No04043048)
安徽省教育厅自然基金重点(No2006KJ049A)
国家863高技术研究与发展计划项目(No2007AA09Z421)
安徽大学211创新团队计划(No02203109)资助~~
文摘
栓菌420(Trametes sp.420)漆酶基因lacD以两种方式在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)进行异源表达,产生两种重组漆酶:rLacDx(具有天然N-末端)和rLacDe(N-末端带有8个额外的氨基酸残基)。摇瓶发酵18d,rLacDx和rLacDe的产量分别为1.21×10^5u/L、7、38×10^4u/L[以2,2'-连氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸(ABTS)为底物]。在高密度发酵条件下,rLacDx的产量增加到2.39×10^5u/L,同时其生产周期降至7.5d。两种重组酶对愈创木酚底物的氧化特性相似,且在50℃和pH3~10的范围内均稳定。然而,rLacDx对底物ABTS的比活力(1761u/mg)高于rLacDe(1122u/mg),其表观Km值(427μmol/L)低于rLacDe(604μmol/L)。
关键词
异源表达
高密度发酵
漆酶
毕赤酵母
栓菌
420
Keywords
heterologous expression, high-density fermentation, laccase, Pichia pastoris, Trametes
sp
.
420
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
栓菌420漆酶C基因的克隆、高效表达及重组酶的染料脱色潜能
李剑凤
洪宇植
肖亚中
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
12
下载PDF
职称材料
2
栓菌420漆酶同工酶B基因克隆及异源表达
李剑凤
洪宇植
肖亚中
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2007
2
下载PDF
职称材料
3
栓菌漆酶在毕赤酵母中高效表达及重组酶的性质
周宏敏
洪宇植
肖亚中
CUI Teng-Jiao
WANG Xiao-Tang
蒲春蕾
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
9
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职称材料
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