一种新型纤溶酶SPFE-Ⅲ的分离纯化和纤溶机理研究

本实验室从亚洲传统发酵食品——虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的芽孢杆菌(Bacillus sp.nov.SK006),发酵液经乙醇沉淀、离子交换色谱(DEAE-Sepharose CL6B)、凝胶过滤色谱(Superdex75)后分离纯化出一种电泳纯的纤溶酶SPFE-Ⅲ,分子量约为42.6kDa,酶活为7.1U/mg(以plasmin为标准)。SPFE-Ⅲ对纤维蛋白原的降解过程为最先降解α链,其次是γ链,而对β链的降解最缓慢;利用加热纤维蛋白平板法研究纤溶酶SPFE-Ⅲ,结果发现该酶对纤维蛋白有直接降解作用,而对纤维蛋白溶解酶原的敏感性较低。

纤溶酶SPFE-Ⅱ的纤溶机制和酶反应动力学研究

研究芽孢杆菌(Bacillus sp. nov.)SK006发酵产生的纤溶酶SPFE-Ⅱ的溶栓机理及酶促反应动力学参数。研究结果表明,SPFE-Ⅱ对纤维蛋白原的降解过程为先降解α链,之后是β链,而对γ链的降解最缓慢,这与人血纤溶酶对纤维蛋白的降解过程相同;SPFE-Ⅱ对纤维蛋白有直接降解作用,同时可激活纤溶酶原,从而间接降解纤维蛋白;SPFE-Ⅱ具有较强的酰胺水解活性,最适底物为N-Succ-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA;采用Hanes-Woolf法求得作用最佳底物的特征常数:Km=0.51 mmol/L;kcat=154.25 s-1;kcat/Km=3.02×105 L/mol.s。