骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位预测及初步鉴定

目的鉴定骨髓瘤抗原Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法采用超基序和量化基序法预测Sp17的HLA-A*0201限制性CTL表位;用T2细胞亲和力实验和稳定性实验对该表位进行初步鉴定。结果超基序和量化基序法预测得出Sp17抗原的4个CTL表位(LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)、KEKEEVAAV(111-119)),亲和力实验结果表明LLEGLTREI(19-27)I、LREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有较高亲和力,而KEKEEVAAV(111-119)肽亲和力较低;稳定性实验表明ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)与HLA-A*0201分子结合稳定性较好。结论ILREQPDNI(27-35)、SLLEKREKT(45-53)有可能是骨髓瘤抗原Sp17 HLA-A*0201限制性CTL表位。

基于骨髓瘤抗原sp17的伪病毒肿瘤疫苗的制备和鉴定

目的:探讨制备、鉴定基于sp17的伪病毒肿瘤疫苗,为肿瘤的生物治疗策略提供新的方法。方法:在特定的条件下将肿瘤抗原多肽和DNA制备成模拟病毒样结构的颗粒,并以电镜、DNA阻滞试验、DNaseⅠ保护试验和免疫印迹(Western blot)对该疫苗进行制备鉴定。结果:在一定浓度的氯化钠溶液中,电荷比为2的制备条件下,该疫苗能形成均匀的颗粒样结构,并可有效介导瘤苗所携带基因的表达。结论:该研究成功制备了基于sp17的伪病毒肿瘤疫苗,为新型的肿瘤疫苗的设计提供了新的思路。

小鼠精子蛋白Sp17的克隆、表达及其免疫原性研究

目的获得鼠精子蛋白Sp17基因,构建重组表达载体并实现其在大肠杆菌中的高效表达,为制备免疫性避孕疫苗奠定基础。方法提取BALB/c小鼠睾丸组织总RNA,通过RT-PCR扩增Sp17基因全长cDNA序列,并将其克隆至pMD 18-T质粒载体中,再经HindⅢ/XhoⅠ双酶切将Sp17基因片段亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot对表达产物进行初步鉴定,并检测重组蛋白Sp17免疫小鼠后血清特异抗体滴度。结果获得了小鼠Sp17的全长cDNA,成功构建了重组原核表达载体pET/Sp17,在IPTG的诱导下实现了目的蛋白在大肠杆菌中的高效表达,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体。结论小鼠精子蛋白Sp17基因序列已被克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效、正确的表达,重组蛋白Sp17能够诱导产生特异性免疫反应,具有一定程度的免疫原性。

人精子蛋白SP17基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :获得人精子蛋白SP17基因 (hSP17) ,构建重组表达载体并在大肠杆菌中表达。方法 :获取人睾丸组织 ,提取总RNA ,通过RT -PCR获得hSP17的全长cDNA ;将该cDNA克隆入TA载体 ,并亚克隆进融合蛋白型重组表达载体pGEX - 3b ;转化大肠杆菌DH5α并诱导表达之。结果 :获得了全长hSP17的cDNA ,构建了重组表达子hSP17/pGEX - 3b ,获得了预期大小的融合蛋白hSP17-GST的表达。结论 :通过构建重组表达质粒hSP17/pGEX并转化大肠杆菌 ,获得了融合蛋白hSP17-GST的高效表达。

曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)精子表面蛋白17(Sp17)基因克隆以及组织表达特异性分析

精子表面蛋白17(Sp17)是参与受精过程的关键分子。本研究采用RT-PCR以及RACE技术克隆得到了曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)Sp17简称Sj-Sp17 c DNA的全长序列,序列全长1463bp,5′和3′非编码区分别为92bp和222bp,预测的开放阅读框(ORF)全长1149bp。编码的蛋白理论分子量为42.0548k Da,等电点4.66,是一种亲水性蛋白,不存在跨膜区以及信号肽序列,含有丰富的螺旋结构(54%)。同源氨基酸序列比对发现,与其他软体动物的相似性最高仅为44%,表明Sp17在进化中并不保守。基于Sp17氨基酸序列构建的系统进化分析表明,曼氏无针乌贼和加州双斑蛸(Octopus bimaculoides)进化关系最近。组织特异性分析发现Sp17在曼氏无针乌贼的生殖系统中均有较高的表达量,其中在精巢和储精囊中有显著表达。Sp17基因的成功克隆以及组织表达特异性分析对于深入研究其细胞定位以及生物学功能具有重要意义。

小鼠精子Sp17与IL-5融合蛋白的免疫性避孕效应和安全性研究

目的:研究小鼠精子抗原Sp17与佐剂IL-5融合蛋白避孕疫苗的避孕效应及毒性作用。方法:重组蛋白疫苗Sp17-IL-5经鼻内免疫途径免疫小鼠后,观察其妊娠率、每胎产仔数,对免疫后小鼠的重要脏器进行病理学检查,并对免疫后小鼠及其子代的骨髓有核红细胞的微核及精子进行检测。结果:蛋白疫苗Sp17-IL-5鼻内免疫雌性Balb/c小鼠可明显降低受孕率和每胎产仔数,免疫后小鼠的重要脏器病理学检查未见明显异常改变,免疫后小鼠及其子代的骨髓有核红细胞微核率及精子畸形率均无明显变化。结论:重组蛋白疫苗Sp17-IL-5有较明确的抗生育作用,对免疫后小鼠及其子代未产生明显的毒副作用。

不明原因不孕女性血浆中顶体蛋白酶抗体(AcrAb)及精子蛋白17抗体(Sp17Ab)的水平

目的:探讨抗精子蛋白17抗体(Sp17Ab)、抗顶体蛋白酶抗体(AcrAb)在不孕症发病中的作用。方法:采用ELISA方法对12例不明原因不孕患者(A组)、20例其它原因引起不孕的患者(B组)及25例正常的育龄妇女(C组)血浆中AcrAb、Sp17Ab进行检测。结果:①AcrAb、Sp17Ab水平A组(3.28±1.08μg/L,7.89±2.22μg/L)明显高于B组(1.50±0.44μg/L,3.58±0.93μg/L)及C组(1.50±0.48μg/L,3.54±0.63μg/L),差异均具有统计学意义(P<0.01);B组、C组间无统计学差异(P>0.05);②女性血浆中AcrAb与Sp17Ab水平无相关性(r=0.565,P>0.05)。结论:不孕患者血浆中AcrAb、Sp17Ab水平变化与不明原因不孕患者发病有关。

人精子蛋白17放射诱导表达细胞模型的构建

目的:构建pEgr-Sp17重组质粒,并检测其在人卵巢癌细胞系HO8910中的辐射诱导表达,探索Egr-1基因调控序列辐射诱导下游基因表达的功能,建立放射诱导表达人精子蛋白Sp17的细胞模型。方法:用双酶切、粘端连接的方法构建含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr-1和人Sp17基因的pEgr-Sp17重组质粒,利用脂质体介导其转染人HO8910细胞,用免疫细胞化学方法检测X线照射后被转染细胞中Sp17的表达。在确证Sp17能瞬时表达后,继续用含G418的RPMI1640培养基培养细胞,筛选稳定表达Sp17的细胞株。结果:测序结果和酶切鉴定均证实pEgr-Sp17重组质粒构建正确;免疫细胞化学试验表明pEgr-Sp17重组质粒转染的人HO8910细胞表达Sp17蛋白。结论:X线可诱导pEgr-Sp17重组质粒在人HO8910细胞中表达Sp17蛋白,构建了Sp17蛋白放射诱导表达的卵巢癌细胞模型。

血清精子蛋白17检测的双抗夹心ELISA法及在卵巢癌诊断中的应用

目的:建立双抗夹心ELISA法检测血清中精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17)水平。方法:以重组Sp17蛋白为免疫原制备兔抗Sp17抗体,建立Sp17双抗夹心ELISA检测方法,鉴定其最小检出限、精确度、回收率,并检测42例正常人及28例卵巢癌患者血清Sp17水平。结果:该双抗夹心ELISA法敏感度高、特异性强、重复性好。卵巢癌患者与正常人血清Sp17含量有显著差别(P<0.01),正常人血清中存在少量Sp17蛋白,而卵巢癌患者血清中Sp17含量明显升高者占39.3%。结论:卵巢癌患者血清中Sp17含量明显升高。测定血清Sp17水平的ELISA方法学确立为阐明Sp17在卵巢癌患者中的免疫生物学意义提供了实验手段。

潮间带污泥产絮凝细菌W17分离与絮凝性质分析

对采自天津潮间带的污泥进行富集培养,从混合菌群中筛选高效产絮凝细菌。经过5次平板分离,获得一株对高岭土悬浊液具有较高絮凝活性的产絮凝细菌W17。根据形态观察和16S r RNA基因序列分析,该菌株鉴定为Enterococcus sp.W17（Genebank号KP198609）。在不同碳源（葡萄糖、果糖、木糖、乳糖、纤维素和淀粉）、起始p H值（5.0~10.0）和盐度（4‰~70‰）等培养条件下,分别测定菌株W17生长和产絮凝性质。结果表明,菌株W17能够利用多种碳源进行生长和产絮凝,其中葡萄糖是菌株W17生长和产絮凝的最适碳源。在起始p H值5.0~10.0范围内,菌株W17产絮凝的最适起始p H值是6.0,絮凝率可达到（91±5.83）%。菌株W17在设定盐度范围内,都能够生长并具有产絮凝性质,该菌株表现出较强的耐盐性。在淡水和海水培养条件下,菌株W17的产絮凝率分别是（94±5.50）%和（87±5.67）%。产絮凝菌株W17有望应该用于废水特别是高盐废水的处理。

抗精子蛋白17单克隆抗体对人卵巢癌细胞SKOV-3的抑制作用

目的观察抗精子蛋白17单克隆抗体(anti-Sperm protein 17 monoclonal antibody,anti-Sp17mAb)对卵巢癌细胞系SKOV-3的体外抗肿瘤活性和机制。方法采用MTT法观察抗anti-Sp17 mAb对肿瘤细胞SKOV-3的细胞毒作用;以外周血单个核细胞PBMCs为效应细胞,SKOV-3为靶细胞,在效靶比分别为80∶1、40∶1和20∶1的条件下,观察anti-Sp17 mAb的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用;以SKOV-3为靶细胞,加入浓度为2.5%、5%、10%和20%的健康人新鲜血清作为补体,观察单抗的补体依赖性细胞毒性。结果 anti-Sp17 mAb对SKOV-3无明显细胞毒作用;与对照组相比,单抗对SKOV-3的ADCC作用呈剂量依赖关系,在效靶比为80∶1,孵育24 h后,细胞生长抑制率约为22%;补体的加入也可显著提高单抗对SKOV-3细胞生长的抑制率,在血清浓度为5%,单抗浓度为10μg/ml时抑制率达到了40%。结论 anti-Sp17 mAb对表达Sp17蛋白的卵巢癌细胞株SKOV-3具有明显的ADCC和CDC效应。

精子鞭毛蛋白以及精子表面蛋白17的研究进展

精子鞭毛蛋白(Spef)以及精子表面蛋白17(Sp17)均是与精子结构的形成及功能相关的蛋白。大量研究表明它们在动物的生殖过程中发挥着非常重要的作用。本文对采用基因克隆、表达定位、基因敲除等手段对其基因结构、蛋白结构以及生物学功能研究进行了综述,将为进一步揭示精子相关蛋白的生理功能及作用机理提供重要的理论基础和借鉴。

精子蛋白17的研究进展

精子蛋白17（sperm protein17，Sp17）是一种高度保守的睾丸组织特异性蛋白，与在卵细胞透明带上的乙酰肝素糖基进行结合，参与顶体反应，促进受精过程。近年来，SD17作为-癌瘤-睾丸（CT）抗原，其作为肿瘤疫苗的前景被广泛研究和关注。本文就Sp17的特性、肿瘤表达与肿瘤疫苗、肿瘤转移研究的新进展进行了综述。

海藻内生真菌Aspergillus sp.Jcma1F17化合物研究

通过硅胶和半制备液相方法从真菌Aspergillus sp.Jcma1F17发酵液中共分离得到6个化合物,经过质谱及核磁共振波谱鉴定,化合物分别为cis-4-hydroxymellein(1)、trans-4-hydroxymellein(2)、(R)-mellein(3)、penicillic acid(4)、aspyrone(5)和asperlactone(6)。化合物3对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制作用,IC50为57.5μg/m L,其他化合物IC50均大于100μg/m L。

《扁鹊心书》中命关穴的考证与探析

《扁鹊心书》载命关穴能"治三十六种脾病",且"能保固不死",然而考查历代针灸医籍发现,此穴名称及该应用仅见于《扁鹊心书》一书,故对"命关"一穴进行考证分析,并整理研究《扁鹊心书》中有关命关穴的内容,结合其他文献及现代研究应用,明确了命关穴即食窦穴、其证治颇广,尤效于脾胃病证,在水肿、情志病及危急重症的治疗上也能发挥作用。