期刊文献+
共找到19篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
牙颌面骨畸形机制研究的现状与发展
1
作者 江凌勇 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期663-675,共13页
牙颌面骨畸形发病率高、病因复杂、症状严重、诊疗困难,缺乏早期干预策略,其主要原因在于相关机制研究较少、不够深入。这类疾病主要表现为骨性畸形、牙列不齐等骨与牙的形态结构、位置关系及口颌功能异常,其中颌面骨与牙-牙周复合体是... 牙颌面骨畸形发病率高、病因复杂、症状严重、诊疗困难,缺乏早期干预策略,其主要原因在于相关机制研究较少、不够深入。这类疾病主要表现为骨性畸形、牙列不齐等骨与牙的形态结构、位置关系及口颌功能异常,其中颌面骨与牙-牙周复合体是两大核心结构,分别决定了颜面美观与咬合功能。颌面骨畸形精准防治需从病因角度研究发育与致病机制,而牙列不齐等牙-牙周复合体畸形矫治则需从临床正畸应力角度研究稳态与应激改建机制,两方面机制研究均可为牙颌面骨畸形防治策略发展提供重要理论基础。既往相关研究常以突变基因与差异因子表达谱的描述为主。近年来,Cre-LoxP等条件性基因编辑技术的发展,使研究者得以在体内直观地评价单一细胞谱系中致病基因的功能,助力牙颌面骨畸形研究从表型层面向分子机制层面推进。该文梳理了国内外学者近年的研究以及笔者所在课题组的研究成果,提出牙颌面骨畸形机制研究“一体两翼”模式,即牙颌面骨畸形为“一体”,颌面骨发育与畸形致病机制为“一翼”,牙-牙周复合体稳态与应激改建机制为“另一翼”;该模式的提出旨在系统性研究疾病的发生发展,探索临床干预新思路。近年的相关研究运用前沿技术从“两翼”出发探究“一体”的机制:一方面,牙颌面骨的胚胎发育来源复杂,组成型条件性模式动物成为研究关键细胞中关键因子功能的重要新策略;另一方面,牙-牙周复合体的成体改建最为频繁,诱导型条件性模式动物为模型时程精准控制提供了技术支持。随着单细胞测序与谱系示踪技术的开发,组织特异性干细胞因其原位、特化的特征渐受青睐,越来越多的研究者开始关注其特征功能,这一发展趋势十分契合“一体两翼”的研究模式,有望加快牙颌面骨畸形的理论基础建设与应用转化。该文就牙颌面骨畸形机制“一体两翼”的研究模式进行述评。 展开更多
关键词 牙颌面骨畸形 牙颌面骨发育 骨稳态 基因编辑 组织特异性干细胞
下载PDF
人类基因编辑技术对运气平等主义的挑战及应对
2
作者 王灵芝 《医学与哲学》 北大核心 2024年第13期39-43,共5页
运气平等主义区分选择和运气,强调具体责任原则,认为个体选择导致的不利处境不应该得到社会补偿。人类基因编辑技术的高速发展使得自由主义优生得以可能,父母可以自主设计下一代的基因构成,并为此承担责任。然而,由于个体选择的是定义... 运气平等主义区分选择和运气,强调具体责任原则,认为个体选择导致的不利处境不应该得到社会补偿。人类基因编辑技术的高速发展使得自由主义优生得以可能,父母可以自主设计下一代的基因构成,并为此承担责任。然而,由于个体选择的是定义人类自然本性的生物素质,具体责任原则在人类基因编辑技术实践中引发新的挑战:打破分配正义预设;难以厘清责任归属;破坏责任承担自由意志;加剧社会不平等。为了使人类基因编辑技术更好地促进社会正义,需要重申平等对待原则,加强责任伦理,以及完善社会保障机制。 展开更多
关键词 人类基因编辑技术 运气平等主义 具体责任原则 分配正义
下载PDF
乳酸菌基因组编辑技术研究进展 被引量:1
3
作者 李泳靓 赖凤羲 +4 位作者 艾连中 熊智强 夏永军 王光强 宋馨 《工业微生物》 CAS 2023年第3期66-73,共8页
乳酸菌是一类重要的工业微生物,具有多种益生功能。目前关于其代谢功能改造、蛋白功能鉴定和挖掘优良功能基因等的研究主要依赖于传统的同源重组技术,但该技术效率低下,耗时且操作繁琐,严重制约了乳酸菌在基因水平的改造。因此建立稳定... 乳酸菌是一类重要的工业微生物,具有多种益生功能。目前关于其代谢功能改造、蛋白功能鉴定和挖掘优良功能基因等的研究主要依赖于传统的同源重组技术,但该技术效率低下,耗时且操作繁琐,严重制约了乳酸菌在基因水平的改造。因此建立稳定、高效的乳酸菌基因编辑方法,借助基因编辑技术挖掘功能基因、解析代谢途径、改良工业菌株等是十分有必要的。文章综述了乳酸菌基因编辑技术及其原理,并对这些技术在乳酸菌基因组上的应用现状和亟待解决的问题进行了分析总结,展望了乳酸菌基因组编辑技术的未来发展趋势,以期为乳酸菌功能基因鉴定及遗传改良提供参考。 展开更多
关键词 乳酸菌 基因编辑 同源重组 CRISPR 位点特异性重组
下载PDF
CHO细胞多基因工程改造策略的建立及应用
4
作者 程静雯 曹磊 +4 位作者 张艳敏 叶倩 陈敏 谭文松 赵亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期283-291,共9页
近年来,中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞工程改造主要通过敲入或敲除基因来改变细胞某个单一功能,而敲入和敲除的基因往往无法在单次实验操作中同时发挥相应的功能,限制了多基因同步改造的应用。该研究选取细胞凋亡通路... 近年来,中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞工程改造主要通过敲入或敲除基因来改变细胞某个单一功能,而敲入和敲除的基因往往无法在单次实验操作中同时发挥相应的功能,限制了多基因同步改造的应用。该研究选取细胞凋亡通路中抗凋亡蛋白即B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)基因为敲入基因、蛋白岩藻糖基化通路中岩藻糖合成关键酶即岩藻糖转移酶8(fucosyltransferase 8, FUT8)基因为敲除基因作为模型,利用CRISPR/Cas9技术建立定点同步敲入敲除基因编辑策略。利用该策略获得的单克隆细胞株Bcl-2蛋白过表达且FUT8蛋白酶功能缺失。经传代培养发现,由建立的定点同步敲入敲除基因编辑策略获得的细胞株在60 d内所编辑的基因表达稳定。相较于原野生型细胞,该细胞株表现出对血清剥夺的耐受度更高以及对死亡的抵抗能力更强。由此说明基于定点同步敲入敲除基因编辑策略具备一定可行性,可用于重组蛋白生产的CHO工程细胞株的构建。 展开更多
关键词 中国仓鼠卵巢细胞 CRISPR/Cas9 基因编辑 定点同步 细胞株构建
下载PDF
光控超小型CRISPR/Cas经AAV载体递送实现对人基因组的高效编辑 被引量:1
5
作者 林钰莹 魏劲松 +1 位作者 林鑫华 赵冰 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期198-207,216,共11页
CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异... CRISRP/Cas系统是目前广为使用的基因编辑工具,而腺相关病毒(AAV)也是目前最安全有效的基因治疗递送载体。为了实现AAV载体介导的CRISRP/Cas基因编辑,各种可装载于AAV载体的基因编辑工具也先后被报道。尽管如此,AAV载体介导的时空特异性基因编辑仍较难实现。为此我们结合光遗传学,将蓝光诱导表达系统、超小型CRISPR/Un1Cas12f1基因编辑系统以及AAV载体递送系统进行有机整合,开发出光控诱导表达的超小型基因编辑系统(AAV-PA-Cas12f1),并将其通过AAV递送至人源细胞HEK293T中。在无光条件下其表达背景极低,而经过蓝光诱导实现了对人基因组的高效基因编辑:以Intergene2为例,利用PCR产物-TA克隆结合单克隆测序分析得到该系统的实际编辑效率高达56%,编辑类型为碱基缺失或兼具碱基缺失与插入。此工具的开发为实现体内精准基因编辑奠定了基础,为解析更多生物学机制及探索疾病治疗策略提供了技术平台。 展开更多
关键词 腺相关病毒 Un1Cas12f1 光控蛋白 时空特异性基因编辑 精准基因治疗
下载PDF
基于特异性引物高效构建TALE文库
6
作者 蔡思杰 张书衍 +2 位作者 王晓微 郭显阳 詹硕 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第6期943-950,共8页
人工构建的转录激活因子样效应物(TALE)已广泛应用于基因转录调控和基因组编辑领域,针对TALE构建过程非常复杂,研发了一种构建TALE文库的新方法。首先,基于金门酶切连接方法,设计3种用于识别碱基G的TALE骨架质粒;其次,使用4种特异性引... 人工构建的转录激活因子样效应物(TALE)已广泛应用于基因转录调控和基因组编辑领域,针对TALE构建过程非常复杂,研发了一种构建TALE文库的新方法。首先,基于金门酶切连接方法,设计3种用于识别碱基G的TALE骨架质粒;其次,使用4种特异性引物扩增3种骨架质粒得到质粒突变体;最后,使用金门酶切连接方法连接3种质粒突变体,成功构建最终的TALE文库。基因测序结果表明该文库包含所有可能确定TALE-DNA结合特异性的核苷酸组。由于TALE的高靶向性和多功能性,该TALE文库将广泛用于生命科学领域。 展开更多
关键词 TALE文库 基因转录调控 基因组编辑 特异性引物 金门酶切连接方法
下载PDF
利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎 被引量:1
7
作者 李昊 陈胜男 +3 位作者 李松美 朴善花 安铁洙 王春生 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期271-277,共7页
目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26sg... 目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况。结果体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础。 展开更多
关键词 Rosa26 Cas9 基因编辑 肌肉特异 基因打靶
下载PDF
家蚕安全转基因技术研究现状与展望 被引量:3
8
作者 龙定沛 郝占章 +1 位作者 向仲怀 赵爱春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期363-373,共11页
转基因技术是实现基因功能研究和生物遗传改良的重要工具。转基因生物安全问题主要包括转基因操作技术安全与转基因产品安全这两个方面。近年来业内对转基因生物的安全性研究主要集中于转基因农作物、水生动物和家禽、家畜等大型动物在... 转基因技术是实现基因功能研究和生物遗传改良的重要工具。转基因生物安全问题主要包括转基因操作技术安全与转基因产品安全这两个方面。近年来业内对转基因生物的安全性研究主要集中于转基因农作物、水生动物和家禽、家畜等大型动物在医药、农业和食品工业等领域的安全评估,而对于具有重要科研与经济价值的农业昆虫安全转基因技术研究的报道则较为有限,而且农业部至今未有转基因昆虫安全性评估的先例。家蚕(Bombyx mori)是重要的鳞翅目模式昆虫和农业经济昆虫,家蚕安全转基因技术的深入研究对于促进基础遗传学发展和推动蚕丝产业发展均具有重要价值和意义。自2000年第一例转基因家蚕建立以来,转基因技术已广泛应用于家蚕基因功能鉴定的基础研究和品种改良的应用研究领域,但转基因家蚕的安全性问题却成了限制转基因家蚕实用化应用的主要瓶颈。因此,开展家蚕安全转基因技术体系研究对促进转基因家蚕安全性评估和产业化具有重要意义。本文系统地概述了基于条件基因打靶的家蚕安全转基因技术体系的建立与研究现状,讨论了家蚕安全转基因技术的发展趋势和应用前景,以期为转基因动物特别是农业转基因昆虫的安全转基因技术建立和完善提供参考。 展开更多
关键词 家蚕 生物安全 安全转基因技术 位点特异性重组 标记基因删除 基因定点修饰
下载PDF
CRISPR/Cas9系统及其在作物育种中的应用 被引量:8
9
作者 黄娟 邓国富 +3 位作者 高利军 高菊 卿冬进 朱昌兰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期14-21,共8页
基因编辑是一项对目的基因进行修饰的新技术,由成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其关联蛋白(CRISPR associated,Cas)组成的系统(CRISPR/Cas)为新一代基因编辑技术,其中... 基因编辑是一项对目的基因进行修饰的新技术,由成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及其关联蛋白(CRISPR associated,Cas)组成的系统(CRISPR/Cas)为新一代基因编辑技术,其中Cas9蛋白与CRSPR结合形成的编辑系统CRISPR/Cas9因其简单易操作的特性已广泛应用于植物基因组编辑,发展潜力巨大。文章论述了CRISPR/Cas9系统的作用原理、发展历程及在植物基因组中的定点编辑效应,并分析CRISPR/Cas9在水稻、小麦、玉米等作物育种中的应用现状,发现其在改良水稻产量和质量相关性状、小麦白粉病抗性及玉米乙烯敏感等性状上效果明显。在今后的研究中,应针对不同作物的育种目标,深入了解目标基因的功能作用来设计相应的操作方案,并提高该系统对作物目的基因改良的效率,加强其安全性等,以促进基因编辑在作物育种中的应用,加快育种进程。 展开更多
关键词 作物育种 基因编辑 CRISPR/Cas9系统 定点修饰
下载PDF
一种基因编辑位点特异性PCR方法的开发和应用
10
作者 张洪文 赵圣博 +7 位作者 闫晓红 李俊 翟杉杉 肖芳 高鸿飞 李允静 吴刚 武玉花 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期77-89,共13页
为了对基因组编辑产品进行精准定性和定量检测,以水稻SP1基因的编辑植株为材料,在编辑位点上下游设计通用引物,在编辑位点处设计基因编辑位点特异性TaqMan探针,建立了编辑位点特异性PCR方法。利用该方法可准确鉴定特异基因组编辑产品,... 为了对基因组编辑产品进行精准定性和定量检测,以水稻SP1基因的编辑植株为材料,在编辑位点上下游设计通用引物,在编辑位点处设计基因编辑位点特异性TaqMan探针,建立了编辑位点特异性PCR方法。利用该方法可准确鉴定特异基因组编辑产品,检测灵敏度达到5~10拷贝,可在实时荧光PCR(qPCR)和微滴数字PCR(ddPCR)平台上对基因组编辑产品进行定量检测。由于数字PCR的微反应单元可消除野生型DNA对通用引物的竞争性消耗,与qPCR的定量结果相比,ddPCR定量结果具有更高的定量准确性。 展开更多
关键词 基因组编辑作物 基因编辑位点特异性PCR 身份鉴定 定量检测
下载PDF
基因编辑研究进展与展望 被引量:5
11
作者 谭磊 陈明月 沈彬 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1689-1694,共6页
CRISPR-Cas9技术的发展极大地推动了基因编辑技术的进步,基于该技术开发的碱基编辑器和先导编辑器赋予了CRISPR-Cas9系统更加强大的基因编辑能力,加速了CRISPR-Cas9技术应用于临床基因治疗。虽然目前对该系统做了诸多优化和改进,但在特... CRISPR-Cas9技术的发展极大地推动了基因编辑技术的进步,基于该技术开发的碱基编辑器和先导编辑器赋予了CRISPR-Cas9系统更加强大的基因编辑能力,加速了CRISPR-Cas9技术应用于临床基因治疗。虽然目前对该系统做了诸多优化和改进,但在特异性、安全性以及在体转导等方面仍存在改进和优化的空间。本文针对这三方面的研究进展进行简要介绍和展望。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9 基因编辑 碱基编辑器 特异性 安全性
下载PDF
基因重组技术在猪伪狂犬病毒基因工程疫苗中的研究进展 被引量:2
12
作者 柯海意 王帅 +5 位作者 徐民生 蔡汝健 勾红潮 臧莹安 李春玲 简运华 《广东农业科学》 CAS 2021年第5期124-131,共8页
猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PR... 猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PRV关键毒力基因进行改造,敲除毒力基因或插入免疫增强基因,是降低PRV毒力或提高病毒免疫保护效果的有效方法之一,也是研制安全高效PRV基因工程疫苗的重要手段。从基因同源重组、Cre/lox P位点特异性重组、细菌人工染色体和CRISPR基因编辑等不同基因重组技术应用方面对猪PRV基因工程疫苗的研制进行综述,为PRV重组疫苗的进一步深入研究提供参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 基因工程疫苗 基因编辑 同源重组 位点特异 CRISPR
下载PDF
Site-directed RNA editing(SDRE):Off-target effects and their countermeasures
13
作者 Shaoshuai Mao Yajing Liu +2 位作者 Shisheng Huang Xingxu Huang Tian Chi 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期531-535,共5页
Site-directed RNA editing(SDRE)is invaluable to basic research and clinical applications and has emerged as a new frontier in genome editing.The past few years have witnessed a surge of interest in SDRE,with SDRE tool... Site-directed RNA editing(SDRE)is invaluable to basic research and clinical applications and has emerged as a new frontier in genome editing.The past few years have witnessed a surge of interest in SDRE,with SDRE tools emerging at a breathtaking pace.However,off-target effects of SDRE remain a tough problem,which constitutes a major hurdle to their clinical applications.Here we discuss the diverse strategies for combating off-target editing,drawing lessons from the published studies as well as our ongoing research.Overall,SDRE is still at its infancy,with significant challenges and exciting opportunities ahead. 展开更多
关键词 gene editing RNA editing Cas13 Off-target specificITY
原文传递
CRISPR-Cas13a系统在基因编辑和分子诊断领域中的研究进展 被引量:3
14
作者 陈佳灵 黄颖而 +5 位作者 邓昊 吴鸿峰 张婧 赵奕君 罗佳豪 郝文波 《检验医学》 CAS 2022年第1期97-100,共4页
成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统是一个强大的基因编辑工具。相对于Cas9,Cas13a可靶向多基因转录产物,从而调控基因功能表达,填补了Cas9仅限于DNA水平的编辑及脱靶效应等缺陷。不仅如此,利用Cas13a靶向... 成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统是一个强大的基因编辑工具。相对于Cas9,Cas13a可靶向多基因转录产物,从而调控基因功能表达,填补了Cas9仅限于DNA水平的编辑及脱靶效应等缺陷。不仅如此,利用Cas13a靶向RNA的特性,该系统被成功地改造成下一代核酸诊断工具。文章概述了CRISPR-Cas13系统在基因编辑及分子诊断领域的最新研究进展,并对该系统的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 成簇的规律间隔的短回文重复序列 成簇的规律间隔的短回文重复序列相关蛋白13a 附带切割 基因编辑 特异性高灵敏度酶报告系统
下载PDF
miRNA的生物形成及调控基因表达机制 被引量:13
15
作者 郑永霞 焦炳华 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期821-826,共6页
微RNA(microRNA,miRNA)通过调节靶基因的表达水平影响细胞分化、增殖、凋亡等特性,在生物的生长发育和疾病发生发展中发挥重要的作用。将miRNA用于基因功能研究,药物靶点验证,基因治疗等领域有非常好的前景。揭示miRNA的生成和加工过程... 微RNA(microRNA,miRNA)通过调节靶基因的表达水平影响细胞分化、增殖、凋亡等特性,在生物的生长发育和疾病发生发展中发挥重要的作用。将miRNA用于基因功能研究,药物靶点验证,基因治疗等领域有非常好的前景。揭示miRNA的生成和加工过程以及miRNA调节靶基因基因表达水平的作用机制对于阐述miRNA在生理病理过程中的作用有重要意义。因此,本文对miRNA的发生,成熟以及作用机制的研究进展作综述。 展开更多
关键词 MIRNA 基因簇 组织特异性 RNA编辑
原文传递
CRISPR-CAS系统介导的新一代基因靶向修饰技术及其在工业微生物中的应用 被引量:6
16
作者 程妙文 罗玮 杜瑶 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1621-1633,共13页
Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)是一种广泛存在于细菌和古细菌基因组中含有间隔重复序列的基因结构,可由RNA介导为细菌提供一种特异性免疫保护机制,抵御外来病毒、噬菌体... Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)是一种广泛存在于细菌和古细菌基因组中含有间隔重复序列的基因结构,可由RNA介导为细菌提供一种特异性免疫保护机制,抵御外来病毒、噬菌体的二次侵染。通过对CRISPR/CAS系统Ⅱ进行改造,该系统成为了继锌指核酸酶(ZFNs)和TALE核酸酶(TALENs)以来的另一种能够对基因组进行高效定点修饰的技术,具有灵活、高效、廉价且易于操作等优点。目前CRISPR/Cas技术已经应用于微生物、哺乳动物细胞、果蝇和水稻等多种生物体中,在基因修饰方面也取得了一定的成果。本文从CRISPR/Cas系统的结构、分类、基因组编辑的分子机制,以及在工业微生物中的应用和存在问题、前景等方面进行了综述。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas系统 特异性免疫 定点修饰 基因编辑 工业微生物
原文传递
调控CRISPR-Cas9系统用于基因编辑的研究进展 被引量:3
17
作者 公少华 李娜 唐波 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2020年第7期634-641,共8页
基于操作简便、成本低、快捷高效的优势,规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶(CRISPR-Cas9)系统在基因编辑的基础研究和临床医学方面起到了极为重要的推动作用.在时空维度上调控CRISPR-Cas9发挥功能,对于减少CRISPR-Cas9系统的脱... 基于操作简便、成本低、快捷高效的优势,规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶(CRISPR-Cas9)系统在基因编辑的基础研究和临床医学方面起到了极为重要的推动作用.在时空维度上调控CRISPR-Cas9发挥功能,对于减少CRISPR-Cas9系统的脱靶效应,提高基因编辑的特异性具有重要意义.本综述介绍了近年来利用化学分子以及光调控CRISPR-Cas9系统发挥功能,进而调控基因编辑的研究进展,并探讨了CRISPR-Cas9调控的前景和面临的挑战. 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9 基因编辑 特异性 脱靶效应 调控
原文传递
重组酶介导的定点整合及在构建重组CHO细胞中的应用
18
作者 孙瑾瑜 刘光 +2 位作者 李晨 王颖 刘国庆 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期52-60,共9页
中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)是生产治疗性重组蛋白最常用的细胞。随机整合(random integration,RI)工艺是目前构建重组CHO细胞株的主要策略,由于CHO细胞基因组缺乏稳定性,为得到产量高、品质好且适应特定工艺的... 中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)是生产治疗性重组蛋白最常用的细胞。随机整合(random integration,RI)工艺是目前构建重组CHO细胞株的主要策略,由于CHO细胞基因组缺乏稳定性,为得到产量高、品质好且适应特定工艺的细胞株,通常需要1~2轮高通量筛选,不仅工作量大、耗时长且批次稳定性差。定点整合(site-specific integration,SSI)基因编辑技术将外源基因整合至细胞基因组的特定位点,经一轮筛选得到稳定、高产且适应特定生产工艺的细胞株,从而缩短细胞株构建周期。近年来,不断有将定点整合策略应用于构建重组CHO细胞株的报道。基因编辑技术的发展是实现细胞外源基因定点整合工艺的基础,常用的基因编辑技术包括核酸酶技术、转座子技术和重组酶技术。比较这三种基因编辑技术在构建流程、整合效率和专利等方面的不同特点,重点讨论重组酶介导的定点整合及其在CHO细胞株构建中的应用。 展开更多
关键词 基因编辑 定点整合 重组酶 CHO 重组酶介导盒式交换
原文传递
基于CRISPR/Cas9基因编辑技术的EGFP基因定点整合表达
19
作者 郗永义 吴晓洁 +4 位作者 林艳丽 钟荣斌 周艳荣 陈红星 王友亮 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第19期3601-3606,3617,共7页
目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,实现EGFP基因在CHO细胞ACTB基因座位置定点整合和表达,建立基于CRISPR/Cas9技术的外源基因定点整合和表达技术。方法:根据CHO细胞β-actin(ACTB)基因起始密码子区基因序列,设计相应CRISPR/Cas9系统,... 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,实现EGFP基因在CHO细胞ACTB基因座位置定点整合和表达,建立基于CRISPR/Cas9技术的外源基因定点整合和表达技术。方法:根据CHO细胞β-actin(ACTB)基因起始密码子区基因序列,设计相应CRISPR/Cas9系统,同时构建含有ACTB同源臂和EGFP基因的同源供体载体(donor vector),通过脂质体转染法同时转染CRISPR/Cas9和供体载体,流式分选EGFP阳性细胞,分析基因编辑技术在EGFP基因定点整合和表达方面的可行性。结果:构建了能有效切割CHO细胞ACTB基因的CRISPR/Cas9系统,筛选到EGFP定点整合至ACTB基因座并有效表达的细胞,ACTB基因缺失后由于γ-actin代偿性表达增强,ACTB缺失细胞形态和生长未受影响。结论:单纯依靠基因编辑技术可以实现1 kb以内的基因同源置换,但效率较低,如实现更大片段的外源基因置换,需借助其它实验技术。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 同源置换 定点整合
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部