乳头状甲状腺癌组织中SPCS 2基因表达水平及其意义

目的探讨信号肽酶复合体亚基2(SPCS 2)基因在乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的表达水平及其意义。方法利用UALCAN及HPA数据分析平台评估PTC组织和正常组织中SPCS 2基因表达水平。在Gepia数据库预测SPCS 2基因表达水平对PTC患者无病生存时间的影响。Cox回归模型分析影响PTC患者预后的独立危险因素。并对该基因进行KEGG、GO和GSEA分析,确定参与PTC的重要信号通路。结果PTC患者肿瘤组织中SPCS 2基因表达水平均显著低于正常组织(Z=-43.219,P<0.001)。与SPCS 2低表达的PTC患者相比,SPCS 2基因高表达组PTC患者无病生存时间更长(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,PTC患者肿瘤组织中SPCS 2低表达是导致PTC患者预后不良的独立危险因素(HR=0.573,P<0.05)。富集分析预测显示,线粒体氧化磷酸化通路富集在SPCS2高表达组。结论PTC患者肿瘤组织中SPCS 2基因表达水平下调,SPCS 2基因可能参与线粒体氧化磷酸化信号通路的调控,该基因可能是评估PTC患者预后的重要生物标志物。

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响

目的探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法采用体外培养人肺癌SPC-A-1细胞,实验随机分为正常对照组、花边莲处理组(浓度分别为12.5,25和50 m l/L)和顺铂(DDp25mg/L)组,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达水平,二步法免疫组化检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化。结果与正常对照组相比,花边莲各浓度组caspase-3 mRNA和蛋白表达显著上升(P<0.01),survivin mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论花边莲提取液诱导SPC-A-1细胞凋亡的分子机理可能与上调caspase-3基因表达和下调survivin基因表达有关。

白英水提物对肺癌SPC-A-1细胞的凋亡及bcl-xl、bid表达的影响

目的观察白英水提物(extracts of solanun lyratum thumb,ESL)对肺癌SPC-A-1细胞凋亡及基因bcl-xl、bid表达的影响。方法常规法制备ESL,实验分为正常对照组、白英处理组。白英处理组加入ESL,终质量浓度分别为12.5、25.0和50.0 mg.mL-1;正常对照组的培养细胞不加药物处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡、半定量RT-PCR和免疫组织化学法分析细胞中bcl-xl、bid基因表达。结果与正常对照组比较,白英处理组SPC-A-1细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多(P<0.05);bcl-xl mRNA和Bcl-xl蛋白表达降低、bid mR-NA和Bid蛋白表达升高(P<0.05),并随ESL质量浓度的增加而加强。结论 ESL能诱导人肺癌SPC-A-1细胞上调bcl-xl基因表达,下调bid基因表达,且作用有一定的量效关系,这可能是白英诱导细胞凋亡的重要作用机制。

p16基因转染对肺癌细胞SPC-A1的抑制作用

目的 探讨抑癌基因p16对肺癌细胞SPC A1的抑制作用。方法 以Escort脂质体介导p16基因转染肺癌SPC A1细胞 ,MTS法测定OD值 ,计算细胞生长抑制率 ,描绘p16基因转染后SPC A1细胞增殖曲线。结果 p16基因转染对SPC A1细胞具有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,细胞抑制率为 2 3 18% ,细胞增殖曲线较SPC A1细胞明显降低。紫杉醇对SPC A1细胞亦有明显抑制作用 ,抑制率为对 3 7 12 %。结论 p16基因转染对肺癌SPC

RNA干扰人pttg表达对肺癌SPC-A-1细胞表型的影响

目的研究RNA干扰人pttg表达对肺癌SPC-A-1细胞恶性表型的影响。方法构建针对人pttg的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染SPC-A-1细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量PCR和Western blot检测转染后PTTG mRNA及蛋白的表达水平;人工计数法检测阳性克隆株SPC-A-1细胞染色体倍性的变化;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法观察抑制人pttg表达后SPC-A-1细胞增殖能力的改变;TUNEL法检测细胞凋亡的变化情况。结果成功构建针对人pttg基因的RNA干扰真核表达载体(命名为Si-hPTTG),转染后筛选获得人pttg下调表达的SPC-A-1细胞株;Si-hPTTG转染使SPC-A-1细胞PTTG mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒组均显著下调;Si-hPTTG转染后SPC-A-1细胞染色体众数和平均数增加,3H掺入量显著降低,细胞凋亡明显增加。结论人pttg下调表达可增加SPC-A-1细胞染色体众数和平均数,伴有减轻染色体结构畸变的趋势;显著抑制SPC-A-1细胞增殖,增加细胞凋亡。人pttg可能是肺癌治疗的新靶点。

AzaC预处理增加TCDD对特殊细胞P450基因的诱导

利用RT-PCR检测不同物质诱导细胞的CYP基因 mRNA的表达水平.在HepG2细胞,TCDD能诱导CYP1A1、CYP1B1及CYP1A2基因表达,CYP1A1、CYP1B1基因比CYP1A2基因更容易被诱导,用AzaC处理后CYP1B1基因表达无改变;在A549细胞和SPC-A1细胞,Azac预处理后增加了TCDD对CYP1家族的诱导.也就是AzaC增加了CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1基因表达水平.

肿瘤相关新基因pp4519在肺癌中的表达差异及初步功能研究

目的 探讨肿瘤相关新基因 pp4 5 19在肺癌细胞系、人肺癌及癌旁组织中表达差异及其初步生物学功能。 方法 合成肿瘤相关新基因pp4 5 19特异性多肽 ,免疫家兔制备兔源性多克隆抗体 ;从体外细胞集落形成试验 ,生长曲线 ,裸鼠体内成瘤试验 ,半定量RT PCR ,蛋白印迹 ,免疫细胞化学及免疫组化检测 pp4 5 19基因的表达差异 ,以及转染肺癌细胞系的细胞凋亡检测等方法研究 pp4 5 19基因对体内外细胞生长和生物学功能的影响。 结果 SPC A1肺癌细胞系的体外集落形成试验表明 ,pp4 5 19基因转染组集落形成数明显少于空载体组 (P <0 .0 5 ) ;转染 pp4 5 19基因的肺癌细胞系的裸鼠体内成瘤试验结果表明该基因对SPC A1细胞系的成瘤有明显抑制作用 (P <0 .0 1) ;瞬时转染细胞的流式细胞凋亡检测结果表明该基因具有促进SPC A1细胞凋亡的作用 ;半定量RT PCR ,蛋白印迹检测结果表明肺癌及癌旁组织中pp4 5 19mRNA和蛋白表达无明显差异(P >0 .0 5 ) ,但免疫组化结果显示PP4 5 19在人肺癌癌旁组织中的表达略高于肺癌。结论 pp4 5

猪源耐大观霉素金黄色葡萄球菌中spd阳性新型质粒的鉴定

从重庆养猪场采集猪鼻腔拭子,采用含256 mg/L大观霉素的金黄色葡萄球菌显色培养基和BP培养基,结合生化试验、PCR和16S rRNA测序分离鉴定耐大观霉素金黄色葡萄球菌;提取分离株质粒,测定序列后分析其遗传背景;将提取的质粒电转化到金黄色葡萄球菌RN4220中,检测分离株及金黄色葡萄球菌RN4220的耐药性。结果显示,从106份鼻腔拭子中分离得到7株耐大观霉素金黄色葡萄球菌,仅1株金黄色葡萄球菌CQRC1携带大观霉素耐药基因spd,且该基因位于大小为5653 bp的新型质粒pCQRC1上。电转化pCQRC1质粒可提高金黄色葡萄球菌RN4220对大观霉素MIC值64倍以上。质粒pCQRC1测序分析发现其仅编码Rec、Rep、Spd和Pre/Mob 4个蛋白。质粒pCQRC1的出现可能会促进大观霉素耐药性的快速传播,这为大观霉素耐药性的风险评估提供了数据支持。

RNA干扰沉默Livin基因对裸鼠移植瘤生长的影响

目的 利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术沉默凋亡抑制蛋白基因Livin基因在人肺腺癌细胞株SPC-A-1中的表达,探讨Livin基因表达沉默对SPC-A-1裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以慢病毒为载体,将携带针对Livin基因短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）及无关序列片段的shRNA转染SPC-A-1细胞,转染成功后将转染Livin shRNA的SPC-A-1细胞（实验组）、转染无关序列的SPC-A-1细胞（阴性对照组）及未转染任何序列的SPC-A-1细胞（空白对照组）分别接种于BALB/C裸鼠右腋皮下,复制SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间、成瘤率、瘤体体积及重量,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率;RT-PCR、免疫组织化学法分别检测Livin mRNA及蛋白的表达情况,原位末端转移酶标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测移植瘤组织凋亡情况.结果 与空白对照组、阴性对照组比较,实验组裸鼠移植瘤成瘤时间晚,瘤体生长缓慢（F=70.509,P＜0.01）,体积抑瘤率达（59.5±3.4）%;瘤体重量明显减轻（F=12.821,P＜0.01）,瘤重抑瘤率达（71.1±5.6）%.实验组Livinα mRNA表达水平为（37.2±1.6）%,Livinβ mRNA表达水平为（29.4±1.1）%,明显低于空白对照组[（63.3±3.8）%,（53.2±3.4）%]及阴性对照组[（66.1±2.6）%,（52.3±3.1）%],差异有统计学意义（Fα=45.309,Fβ=30.076,均P＜0.01）.实验组Livin蛋白表达水平为（15.3±2.8）%,明显低于空白组的（51.3±2.1）%和阴性对照组的（52.5±2.5）%（F=78.92,P＜0.01）.实验组瘤组织细胞凋亡明显增多,凋亡率为（35.4±3.2）%,明显高于空白对照组的（5.4±1.3）%和阴性对照组的（8.6±1.5）%,差异有统计学意义（F=14.509,P＜0.01）.结论 沉默SPC-A-1细胞中Livin基因表达可有效抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,Livin基因有望成为肺癌治疗的靶点之一.