真鲷精子的超低温保存研究

对真鲷精子超低温保存技术进行了初步探讨 ,在液氮中保存真鲷(Pagrosomusmajor)精子时发生冷冻伤害的温域为 -30～ -60℃ ,适宜的降温速率为20℃/min ;使用抗冻剂DM SO的适宜浓度为20% ;采用低盐度或高 pH值的溶液激活冻精的效果不如自然海水。真鲷冻精的复苏率和存活率最高可达到50.73%和62.5% ;以20℃/min和20%DMSO处理真鲷精子 ,保存在液氮中46d后冻精复苏率和存活率为50.63 %和61.02%。

黑鲷精子的超低温保存研究

对黑鲷精子的超低温保存技术进行了初步探讨 ,黑鲷(Sparusmacrocephalus)精子经过超低温保存后复苏率、存活率最高可以达到61.37 %和61.4 %。保存黑鲷精子时发生冷冻伤害的温度范围是 -20～ -60℃ ,适宜的降温速率为20℃/min ;使用抗冻剂DMSO的适宜浓度为20 % ;样品体积对保存效果有相关性 ;利用自然海水激活冻精效果好于低盐度或高 pH值的溶液 ;使用20 %DMSO和20℃/min降温速率处理 ,在液氮中保存黑鲷精子66d后解冻 ,其复苏率和存活率分别为59.81%和58.45%。

精子来源与数量对单精子卵胞浆内注射术妊娠结局的影响

目的:分析不同精子来源和数量对单精子卵胞浆内注射术(ICSI)妊娠结局的影响。方法:2000年1月至2003年6月在本中心进行ICSI治疗而妊娠的271例,据精子来源与数量分为精液正常组(39例)、少弱精组(144例)与手术取精组(88例)。比较精液正常组、少弱精组、手术取精组的临床妊娠率、流产率、分娩率、妊娠并发症、分娩孕周、新生儿出生体重、畸形、围生儿死亡率等组间差异。结果:精液正常组、少弱精组与手术取精组患者的临床妊娠率、流产率、分娩率、双胎率、妊娠期高血压疾病发生率、前置胎盘发生率、早产率、分娩孕周、新生儿出生体重、先天性畸形发生率(4.5%、6.3%、4.0%)、围生儿死亡率差异均无显著性(P>0.05)。结论:精液正常组、少弱精组与手术取精组ICSI治疗后临床妊娠率、流产率、妊娠期并发症、新生儿出生体重、先天性畸形发生率、围生儿死亡率相似,不同精子来源与数量不影响ICSI治疗后的妊娠和围生儿结局。

重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的 :在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。方法 :体外采集已生育健康男子精液 ,采用非连续密度梯度法分离精子 ,将获能的精子悬液分成阴性对照组 (C组 ,2 0 0 μL 精子悬液加 1μL DMSO)、阳性对照组 (A组 ,2 0 0 μL精子悬液加 A2 3187至终浓度为 10 μmol· L- 1 )和 ZP3组 (2 0 0 μL 精子悬液加 ZP3至终浓度为 10 m g· L- 1 ) ,考马斯亮蓝染色法检测重组人 ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果 :C组、A组和 ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为 (5 .0 0± 1.70 ) %、 (4 6 .10± 7.4 9) %和 (13.2 0± 2 .70 ) % ,各组间比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。

高畸形率水牛精子与正常水牛精子差异表达蛋白的分离和鉴定

旨在分析高畸形率和正常水牛精子的差异表达蛋白。运用双向凝胶电泳以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定出高畸形率和正常的水牛精子的差异表达蛋白,并对部分蛋白进行生物信息学分析。结果显示,高畸形率和正常水牛精子之间存在16个表达差异明显的蛋白点,与正常水牛精子相比,5个蛋白斑点表达量上调,6个蛋白斑点下调,3个蛋白斑点缺失,2个蛋白斑点在畸形率高的水牛精子特有。质谱鉴定16个差异蛋白,成功鉴定出6个差异蛋白斑点,对应4种蛋白:左旋天冬酰胺酶、热应激蛋白β-9、半乳糖激酶、β-微管蛋白-2C。研究表明,高畸形率和正常水牛精子蛋白质表达存在一定的差异。

精子趋化性与嗅觉受体基因表达关系研究进展

趋化性作为评价精子健康的一项新的指标,已经逐渐得到认可。20世纪60年代,Miller首次在水生无脊椎动物(海胆、珊瑚虫等)中证实了精子趋化性的存在。研究显示,一些嗅觉受体(OR)基因,如hOR17-4在人鼻子和睾丸中同时存在,并且这种表达与精子的趋化性有关。OR基因的活化可导致胞内Ga2+浓度的升高,进而引起精子的超激活运动,帮助其完成受精。目前,对精子趋化性与嗅觉受体基因的关系认识还处在初级阶段,有待进一步的研究。嗅觉受体基因在精子寻找卵子的导向中起一定的作用,或者是作为精子选择的一种方法——只有表达OR基因的精子,才有与卵子结合并完成受精的潜力。

水牛精子蛋白质组双向电泳体系的建立和优化

建立和优化一种适合水牛精子蛋白质组学研究的双向电泳技术。以水牛精子为研究对象,比较两种不同配方的裂解液,以及不同上样量对其2-DE图谱质量的影响。结果显示,以7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、1%DTT、0.5%Cocktail of protease inhibitors为裂解液,24 cm胶条上样量200μg时,可获得较好的精子总蛋白质2-DE图谱。运用ImageMaster 2-Dplatinum分析软件检测出约500个蛋白质点,蛋白质大部分分布在等电点5-7之间,分子量范围约40-90 kD。

子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响

目的探讨子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响。方法卵泡液取自２０例进行体外授精胚胎移殖的不孕症患者，其中１０例为子宫内膜异位症，１０例为单纯炎症性输卵管不通。应用半透明带配对研究、培养液ＥＢＳＳ／ＢＳＡ做为对照，观察子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响。结果经子宫内膜异位症患者卵泡液与非子宫内膜异位症患者卵泡液处理后的精子与透明带结合的数目均明显低于经培养液处理后的精子与透明带结合的数目（９１±２１与２３９±３５，Ｐ＜０．００１；１０９±２２与２１１±４２，Ｐ＜０．００５），经子宫内膜异位症患者卵泡液处理的精子结合半透明带指数明显低于经非子宫内膜异位症患者卵泡液处理后的精子结合半透明带指数（３６±４与５４±４，Ｐ＜０．００５）。结论子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力具有较强的抑制作用，子宫内膜异位症患者卵泡液对配子相互作用的影响可能是其不孕的原因之一。

^60Co—γ射线辐照乌珠穆沁羊,萨力斯克羊精液提高品质的探讨

本研究利用(60)Co—γ射线,五种不同剂量(250R、500R、10000R、100000R和300000R)分别辐照乌珠穆沁公羊和萨力斯克细毛公羊精液,并在辐照后0,2.5,5.0,7.5和10小时分别测定精子的存活率,精子顶体畸型率和精清中GOT酶的活性。测定结果是,(1)两个品种五种剂量辐照后10小时内的精子存活率实验组比对照组平均高4.72%(乌珠穆沁羊、下同)4.79%(萨力斯克羊、下同);7.83%,7.12%;0.84%,2.60%;-0.002%,1.37%;-16%,-%。(2)10000R、100000R和300000R辐照组精子顶体畸型率较对照组高1.49%,1.98%;2.73%,2.19%;3.06%,-%。(3)萨力斯克细毛羊精液经100000R辐照后,精清中GOT酶活性比对照组提高了11.78%。500R组降低了10.06%。结果表明:低剂量(250R、500R)对绵羊精子有刺激作用,特别是500R对精子存活率的影响与鱼、鸡一样的刺激效应。10000R以上的γ射线对精子顶体有损伤作用。低剂量对受精率以及胚胎发育是否有影响有待进一步探讨。