鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBVBeaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT-PCR,成功地扩增出IBVH株S1基因。扩增产物经BstYⅠ、HaeⅢ和PstⅠ酶切分析,结果表明,IBVH株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBVH株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM-T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97.27%。将IBVH株S1基因亚克隆到pPICZ-A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS-PAGE实验证实了IBVH株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测,证实了表达产物的抗原特异性。

IBV青岛腺胃分离株(SD/97/02)S1蛋白基因的序列测定和分析

参考Genbank上发表的IBVS1纤突蛋白基因序列 ,设计了一对引物 ,对鸡传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株 (SD/ 97/ 0 2 )RNA进行RT PCR扩增。将PCR产物克隆入pMD18 T载体中进行序列测定和分析。序列分析表明 ,该毒株的S1基因的G +C %含量较少 ,为 37.0 % ,存在HindIII,BamHI,BgIII,SacI和SalI位点 ,无EcoRI位点 ,与其他毒株的同源性在 87.0 2 % 94 .2 1%之间 ,在第 15 4～ 4 2 9nt处为高度的变异区 ;将基因序列翻译成氨基酸后 ,假定的S1蛋白由 5 4 0个氨基酸组成 ,等电点 8.2 4 ,在蛋白质内部存在 18个Cys,在S1与S2蛋白之间的剪切位点为HRRRR ,这与大多数IBV毒株 (RRF/SRR)不一样 ,有三个区域的氨基酸序列高度保守 ;16 9～ 181aa,2 30～ 2 5 0aa ,4 85～ 5 0 6aa ;与其他毒株进行抗原性比较后发现 ,在该毒株的 32 0～ 32 6aa及 390～ 4 0 1aa处的抗原表位消失 ,而在 32 5～345aa、379～ 389aa处则出现了很强的抗原表位 ;第 4 38～ 4 4 4aa处 ,其他IBV毒株 (除ZJ971株外 )原来存在的强抗原位点在本毒株中消失 ;在 5 3～ 6

IBV青岛腺胃分离株S1纤突蛋白基因的克隆与鉴定

参考Genebank发表的传染性支气管炎病毒 (IBV)S1纤突蛋白基因序列 ,自行设计合成了 1对引物 ,对IBV青岛腺胃分离株 (SD/97/0 2 )RNA进行RT PCR扩增。产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,呈现 1条 16 5 7bp的条带 ,将其克隆入pMD18 T载体中 ,并进行序列测定 ,证实为S1基因。将此重组质粒命名为pMDQXS1。