SKA3促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法通过RT-qPCR和蛋白质印迹技术检测子宫内膜上皮细胞HEECs以及子宫内膜癌细胞KLE、JEC、Ishikawa细胞中SKA3 mRNA水平和蛋白表达,选取表达量最高的Ishikawa细胞用于后续研究。将Ishikawa细胞分为3组:对照组:正常培养Ishikawa细胞;si-SKA3组:根据脂质体2000说明书,将50 nmol/L siRNA-SKA3转染至Ishikawa细胞;NC组:根据脂质体2000说明书,将50 nmol/L siRNA-NC转染至Ishikawa细胞。通过CCK8和克隆形成实验检测3组细胞增殖情况,Transwell和划痕实验检测3组细胞侵袭和迁移情况,蛋白质印迹技术检测3组细胞CyclinD1、MMP-2、AKT、p-AKT蛋白表达。结果与子宫内膜上皮细胞HEECs比,各子宫内膜癌细胞系中SKA3 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。干扰SKA3表达后,Ishikawa细胞增殖能力、侵袭能力降低,划痕宽度变大,CyclinD1和MMP-2蛋白表达量均下降(P<0.05)。与对照组和NC组比,si-SKA3组细胞AKT蛋白表达无明显变化(P>0.05),p-AKT蛋白表达下降(P<0.05)。结论干扰SKA3能够抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖、迁移和侵袭,其机制可能与SKA3抑制PI3K/AKT信号通路有关。

circ-SKA3通过miR-1303调控TLR4轴在动脉粥样硬化中的作用

[目的]探究环状RNA纺锤体与动粒相关蛋白3(circ-SKA3)通过miR-1303调控Toll样受体4(TLR4)轴在动脉粥样硬化(As)中的作用。[方法]收集2019年4月—2022年4月收治的30例As患者经颈动脉内膜剥脱术切除的颈动脉斑块及病变血管组织、对应斑块旁正常组织与静脉血,另收集30例健康对照者静脉血。微阵列分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、荧光原位杂交(FISH)实验检测circ-SKA3在As患者斑块组织和对照样本、血浆外泌体、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、As模型小鼠主动脉组织中的表达和定位。通过生物信息学、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀等方法验证circ-SKA3、miR-1303、TLR4之间的相互关系。通过CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验、血管形成实验检测HUVEC增殖、迁移、血管形成能力,蛋白质印迹法检测TLR4轴相关蛋白表达。油红O染色、HE染色、Masson染色观察As模型小鼠主动脉组织病变情况,免疫组织化学、免疫荧光检测As模型小鼠主动脉组织TLR4的表达情况。[结果]As患者斑块组织、血浆外泌体、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉组织中circ-SKA3、TLR4的表达水平上调(P<0.05),miR-1303的表达水平下调(P<0.05)。功能分析表明,circ-SKA3在体外实验中促进HUVEC损伤,在体内实验中促进As进展。机制分析表明,circ-SKA3可通过海绵吸附miR-1303促进TLR4表达,抑制circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可抑制As病变形成。[结论]circ-SKA3在As患者颈动脉斑块、血浆外泌体、ox-LDL处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉中的表达显著增高,circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可促进体内外As模型发展。

AEG-1和SKA3在甲状腺微小乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨星形细胞上调基因-1(AEG-1)和纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)的表达与甲状腺微小乳头状癌(PTMC)临床病理特征和预后的关系。方法收集2015年5月至2016年8月经病理学检查确诊的92例PTMC患者的癌组织及对应癌旁组织石蜡标本。采用免疫组化SP法检测组织标本中AEG-1和SKA3的表达,并分析其表达与PTMC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析AEG-1、SKA3表达与患者无复发生存时间(RFS)的关系,采用Cox比例风险模型分析影响PTMC患者RFS的因素。结果AEG-1在癌旁组织和PTMC组织中的阳性表达率分别为17.4%(16/92)和72.8%(67/92),差异有统计学意义(P=0.000);SKA3在癌旁组织中的阳性表达率为15.2%(14/92),在PTMC组织中为66.3%(61/92),差异有统计学意义(P=0.000)。AEG-1蛋白表达与临床分期、淋巴结转移和腺外侵犯有关(P<0.05);SKA3蛋白表达与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,PTMC组织中AEG-1和SKA3蛋白表达呈正相关(r=0.489,P=0.025)。Kaplan-Meier生存分析显示,AEG-1阳性表达者的1、3、5年无复发生存率分别为98.5%、92.5%、83.6%,低于AEG-1阴性表达者的100.0%、96.0%和92.0%,两组比较差异有统计学意义(P=0.046)。SKA3阳性表达者的1、3、5年无复发生存率为98.4%、90.2%、80.3%,低于SKA3阴性表达者的100.0%、96.8%、96.8%,两组比较差异有统计学意义(P=0.032)。Cox多因素分析结果显示,临床分期、淋巴结转移、AEG-1和SKA3表达是影响PTMC患者RFS的独立因素(P<0.05)。结论PTMC组织中AEG-1、SKA3表达水平升高,AEG-1表达与临床分期、淋巴结转移和腺外侵犯有关,SKA3表达与临床分期和淋巴结转移有关,二者均为PTMC患者预后不良的影响因素。

SKA3在食管鳞状细胞癌中表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达意义及其与临床病理参数的相关性。方法采用免疫组织化学染色法检测SKA3蛋白在75例食管鳞状细胞癌组织和20例正常食管组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。应用癌症基因组图谱和基因芯片公共数据库分析SKA3 mRNA在203例食管鳞状细胞癌和102例正常对照中的表达。GEPIA在线工具分析SKA3与细胞周期调控基因的关系。Linkedomics及DAVID在线网站数据评价SKA3基因的共表达基因及其富集通路。结果在食管鳞状细胞癌组织中,SKA3 mRNA和蛋白的表达水平均高于正常食管上皮组织(P<0.05)。SKA3高表达与食管鳞状细胞癌患者肿瘤分化程度、临床分期及肿瘤神经侵犯密切相关(P<0.05)。SKA3与细胞周期调控基因CCND1、CDK1及CDK4的表达水平呈正相关(P<0.001)。结论在mRNA和蛋白水平上,SKA3在食管鳞状细胞癌中均高表达。SKA3高表达可能与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关,其可能通过调控细胞周期进程而促进食管鳞状细胞癌的进展。

纺锤体与着丝粒相关蛋白3在结肠癌中的表达及临床意义

目的探讨癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白3(SKA3)在结肠癌中的表达及临床意义。方法在GEO数据库中选取GSE28000、GSE44076、GSE21815三个基因芯片作为目的基因芯片,分成肿瘤组和正常组两组,在三个基因芯片中筛选差异基因,查阅相关资料选取SKA3为想要的目的基因。取锦州医科大学附属第一医院手术后病理证实的结肠癌标本,分为癌组织和正常组织两组。应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定SKA3在正常组织和癌组织中的蛋白表达情况并分析SKA3在二者组织中的表达差异,对检测结果进行统计学分析。结果50对结肠癌组织和正常组织中,癌组织的SKA蛋白表达明显增强,明显高于正常组织的SKA3表达量且SKA3的高表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无关,与肿瘤的分期分级、淋巴结转移有关。结论SKA3的高表达可能与结肠的发生发展有关。

NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中的表达及对非小细胞肺癌的影响

目的探究NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中表达对非小细胞肺癌的影响机制。方法使用Western blot检测检测人癌和癌周巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量;使用慢病毒感染M2巨噬细胞,构建骨髓诱导M2与人非小细胞肺癌细胞株Lewis共培养体外模拟NSCLC肿瘤微环境,使用Western blot检测M2巨噬细胞中NUSAP1、p-PI3K以及MMP-9的相对蛋白表达量。使用细胞划痕实验检测非小细胞肺癌细胞的迁移能力。结果人体样本Western blot检测结果显示非小细胞肺癌组织中NUSAP1,PI3K与MMP-9的相对蛋白表达量显著高于癌周组织(P<0.05);体外实验通过小鼠巨噬细胞与Lewis共培养以模拟体内肿瘤环境,Western blot检测慢病转染敲低NUSAP1后p-PI3K与MMP-9均表达降低(P<0.05),上调NUSAP1后p-PI3K与MMP-9表达均升高(P<0.05)。MMP-9过表达(OV-MMP-9)抵消了由于敲低NUSAP1所造成的MMP-9表达水平降低,同时shRNA-NUSAP1+ovMMP-9组侵袭率明显高于shRNA-NUSAP1+OVNC组(P<0.05)。shRNANUSAP1(NUSAP1敲低)组比shNUSAP1组的迁移宽度明显增加,说明迁移能力受限;在敲低NUSAP1的基础尚过表达MMP-9(OV-MMP-9)后迁移能力明显变强,迁移宽度显著变小(P<0.05)。结论NUSAP1在肿瘤相关巨噬细胞中通过促进PI3K通路的激活及MMP-9的表达从而促进非小细胞肺癌细胞的迁移。

纺锤体动粒相关复合体-1(SKA1)促进葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的分子机制研究

目的研究纺锤体动粒相关复合体-1(SKA1)促进葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞增殖的分子机制。方法利用SKA1敲减及空载体慢病毒感染MUM-2B细胞分别作为SKA1敲减组和对照组,再以MTT法、流式细胞术及Caspase-3/7法检测各组细胞增殖、凋亡表型的变化;利用基因表达谱芯片筛选差异基因,KEGG富集分析探寻SKA1促进UM发生发展的潜在信号通路,再以Western blot检测信号通路中关键蛋白的表达变化;利用TCGA数据库UM样本RNA测序及随访数据,分析SKA1表达与预后的关系。结果与对照组相比,SKA1敲减组细胞培养3 d、4 d、5 d的光密度均显著降低(均为P<0.01),而凋亡细胞比例及Caspase-3/7活性均显著增加(均为P<0.01)。KEGG富集分析显示,差异基因富集于P53信号通路。Western blot检测结果证实,SKA1敲减后,P53通路中胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP3)的表达显著下降(P<0.05)。SKA1高表达患者总生存率下降(P=0.021,HR=2.55,95%CI0.92~7.05)。结论SKA1通过P53/IGFBP3信号通路促进UM细胞增殖,而且SKA1高表达是影响UM患者预后的危险因素。