酿酒酵母Sfi1p的结构及生物学功能

纺锤体极体(spindle pole body,SPB)是酵母细胞的微管组织中心,它在细胞分裂及细胞遗传稳定性的维持过程中起着极其重要的作用,是细胞生物学领域热门的研究方向.Sfi1p是酿酒酵母SPB的必需蛋白并且横跨整个半桥,该蛋白与SPB的复制有关,它的缺失或突变会导致SPB复制失败,在哺乳动物的中心体也存在酵母Sfi1p的同源蛋白.本文系统的介绍了酵母Sfi1p及其在人类中心体中的同源蛋白hSfi1p的结构特征,并且阐明了Sfi1p在SPB复制与分离、核配及生孢等细胞周期过程中的作用.对Sfi1p的功能研究,将有助于解决SPB研究过程中重要的科学问题,同时为中心体中Sfi1p同源蛋白的功能研究提供良好的借鉴.

SPC_(25)在胶质瘤患者中的表达及其对胶质瘤细胞增殖的作用

目的观察纺锤体极成分25(spindle pole body component 25,SPC_(25))在胶质瘤患者中的表达情况,探讨其对胶质瘤细胞增殖的作用。方法采用生物信息学分析不同级别胶质瘤患者SPC_(25)在The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中的表达水平和预后;收集胶质瘤组织90例和对照脑组织10例,分别采用Western blot、荧光定量PCR和免疫组化检测SPC_(25)的表达水平。通过小干扰RNA(siRNA)沉默SPC_(25),采用MTS实验和集落形成实验观察其对胶质瘤细胞U87增殖的影响。结果TCGA胶质瘤数据库分析结果显示,SPC_(25)在胶质瘤组织中的平均表达水平高于正常脑组织,差异具有统计学意义(P<0.001);SPC_(25)高表达的胶质瘤患者平均生存时间(13.6个月)低于SPC_(25)低表达患者(14.8个月),差异具有统计学意义(P=0.03)。90例胶质瘤组织中SPC_(25)蛋白和mRNA表达水平均高于10例对照脑组织,SPC_(25)高表达胶质瘤患者平均生存时间(22.4个月)低于低表达患者(29.5个月),差异有统计学意义(P=0.029)。MTS和集落形成实验结果显示,U87-siRNA-SPC_(25)细胞的吸光度值和集落形成率均低于U87-siRNA-NC细胞,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论有丝分裂调控相关基因SPC_(25)在胶质瘤中存在高表达现象,可促进胶质瘤细胞的生长,导致胶质瘤患者的不良预后结局,SPC_(25)可能为胶质瘤治疗研究的潜在靶点。

纺锤极体成分25通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路调控卵巢上皮癌细胞增殖与凋亡的研究

目的 研究纺锤极体成分25(SPC25)对卵巢上皮癌(OEC)细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 将A2780s细胞分为未处理组、对照shRNA组和sh-SPC25干扰组。未处理组细胞常规培养;对照shRNA组细胞培养液加入Control shRNA慢病毒上清液0.5 mL;sh-SPC25干扰组培养液加入sh-SPC25慢病毒上清液0.5 mL。以蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白,以细胞计数-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,以Caspase-Glo 3/7试剂盒及Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。为进一步验证SPC25的下游调控通路,用PI3K/AKT信号通路激动药胰岛素样生长因子1(IGF-1)100 ng·mL^(-1)处理sh-SPC25干扰组A2780s细胞,记为sh-SPC25+IGF-1组按上述方法检测细胞活性和凋亡的变化。结果 未处理组、对照shRNA组和sh-SPC25干扰组的细胞增殖率分别为(100.16±0.01)%、(102.40±1.55)%和(53.49±3.65)%,Caspase 3/7活性分别为2.11±0.18、1.96±0.09和5.47±0.45,细胞凋亡率分别为(2.33±0.59)%、(3.80±0.10)%和(44.87±1.29)%,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.99±0.03、1.11±0.02和0.46±0.07。sh-SPC25干扰组的上述指标与未处理组、对照shRNA组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照shRNA组、sh-SPC25干扰组和sh-SPC25+IGF-1组的细胞增殖率分别为(103.02±1.10)%、(52.03±8.55)%和(81.43±2.62)%,Caspase 3/7活性分别为1.96±0.36、5.54±0.49和3.51±0.38,细胞凋亡率分别为(2.67±0.31)%、(47.67±1.17)%和(18.87±0.38)%。sh-SPC25+IGF-1组的上述指标与对照shRNA组、sh-SPC25干扰组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 沉默SPC25可降低OEC细胞的活性,促进其凋亡,作用机制可能与沉默SPC25导致PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT表达降低有关。SPC25可作为OEC诊断和预后预测的潜在生物标志物,可作为OEC的候选治疗靶点。