New spinosin derivatives from the seeds of Ziziphus mauritiana

Three new acylated flavonoid C-glycosides,6'''-(-)-phaseoylspinosin(1),6'''-(3'''',4'''',5''''-trimethoxyl)-(E)-cinnamoylspinosin(2),and 6'''-(4''''-O-β-D-gluco-pyranosyl)-benzoylspinosin(3),were isolated from the seeds of Ziziphus mauritiana(Rhamnaceae).A further 19 known compounds including eight spinosin analogues(4-11)were also isolated.Their structures were elucidated by means of spectroscopic analysis and chemical method.Among spinosin derivatives 1,2,4,7,8,and triterpenoid saponin 14,jujuboside A(14)displayed moderate acetylcholinesterase(AchE)inhibitory activity with an inhibition value of 46.2%at a concentration of 1μM.

酸枣仁主要成分Spinosin催眠作用及其机制研究

目的：探讨酸枣仁主要成分Spinosin的催眠作用以及对戊巴比妥钠诱导的大鼠睡眠时相的影响，进而研究其作用机制。方法：采用戊巴比妥钠诱导的小鼠翻正反射实验和大鼠脑电（EEG）分析技术。结果：Spinosin能够显著缩短催眠剂量戊巴比妥钠（45mg／kg，i．p．）诱导的小鼠睡眠潜伏期，延长睡眠时间，同时可以显著增加阈下剂量（28mg／kg，i．p．）戊巴比妥钠实验中的小鼠入睡率。

Spinosin protects Neuro-2a/APP695 cells from oxidative stress damage by inactivating p38

OBJECTIVE:To explore the protective mechanism of spinosin(SPI)on Alzheimer's disease(AD)model cells,Neuro-2a/APP695(N2a/APP695),against H_(2)O_(2)-induced oxidative stress damage,to reflect the influence of oxidative stress on the development of AD,and to provide a valuable basis for the research and development of therapeutic drug for AD.METHODS:N2a/APP695 cells were exposed to H2O2 and then treated with spinosin.Firstly,the secretion level of amyloidβ(Aβ)1-42 and the production of malondialdehyde(MDA)and lactate dehydrogenase(LDH)were detected by enzyme linked immunosorbent assay kits.Secondly,the oligomerization degree of Aβ1-42 was performed by Thioflavin T staining.Thirdly,the expression levels of p-Tau(Ser199/202/396),synaptophysin(SYP),postsynaptic density protein 95(PSD95),and mitogen-activated protein kinase(MAPK)family-related proteins were detected by Western blot analysis.In addition,FITC-labeled phalloidin was used in cytoskeleton staining to reflect synaptic function.RESULTS:This study showed that H2O2 stimulated N2a/APP695 cells to produce excessive MDA and LDH and secrete a large amount of Aβ,promoted the aggregation of Aβ,induced Tau protein hyperphosphorylation,and led to synaptic dysfunction.Spinosin reversed these changes caused by H2O2 by inactivating p38,which was verified by treatment with the p38 inhibitor BIRB796.CONCLUSION:Spinosin protects N2a/APP695 cells from oxidative stress damage caused by H2O2 through inactivating p38.

正交设计优选枣仁安神酒的回流提取工艺

目的筛选回流法制备枣仁安神酒的最佳提取工艺。方法以芒果苷、阿魏酸、甘草苷、斯皮诺素、甘草酸铵5种指标性成分的含量和总固体含量为指标,通过单因素及正交实验考察酒的度数、加酒量及回流时间对提取工艺的影响,从而优选出制备枣仁安神酒的最佳提取工艺。结果确定枣仁安神酒的最佳回流提取工艺为加10倍量的60度白酒,回流提取70 min。3批验证实验结果表明该工艺条件稳定、合理、可靠。结论经筛选出的最佳工艺制备的枣仁安神酒有效成分提取率高、稳定性好,为该制剂的深入开发提供了实验基础。

HPCE法测定酸枣仁中斯皮诺素的含量

建立了一种以硼酸钠溶液为背景电解质,高效毛细管电泳法(HPCE)测定酸枣仁中斯皮诺素含量的方法。考察了缓冲溶液浓度,pH值,分离电压对分离条件的影响,确定了30 mmol/L、pH=9的硼酸钠溶液为缓冲液,分离电压为15 kV的最优测定条件。检测波长为254 nm,进样时间为20 s,在5~200μg/mL范围内具有良好的线性关系,检出限为0.75 mg/L。对16个品系的酸枣仁中斯皮诺素含量进行了测定,结果表明此方法准确可靠,精准度高,稳定性好,可用来测定酸枣仁中的斯皮诺素含量。

Integrated Data Reveal the Flavonoid Biosynthesis Metabolic Pathway in Semen Ziziphi Spinosae Using Transcriptomic and Metabolomic

The extract from Semen Ziziphi Spinosae(SZS)contains many secondary metabolites(flavonoids,alkaloids,and terpenoids),widely reported for their high medicinal value.In order to know the number and type of flavonoids and the regulating mechanism of flavonoid biosynthesis during the growth and development of SZS,we identified and analyzed the flavonoid metabolites and genes in SZS using metabolomic and transcriptomic.A total of 13,232 differentially expressed genes and 83 flavonoid metabolites were identified at three different growth and development stages(T1,T2,and T3)of SZS.The main flavonoid metabolic components of SZS were catechin,L-epicatechin,(–)-epigallocatechin,(+)-gallocatechin,spinosin and its derivatives.A total of 53 unigenes encoding 15 enzymes were identified as candidate genes involved in flavonoid biosynthesis in SZS.Among,PAL,C4H,4CL,CHS,CHI,FLS,FNS,ANS,ANR,LAR,and UFGT genes were all downregulated in T3 than in T1.The expression levels of these genes influence the accumulation of flavonoids in SZS.Our results should provide valuable information for flavonoid metabolites and candidate genes involved in flavonoid biosynthesis on SZS .

HPLC法测定酸枣仁不同炮制品中两种黄酮碳苷的含量

目的 :用高效液相色谱法测定酸枣仁中 2种黄酮碳苷成分spinosin (1)及 6 ferulosylspinosin(2 )。 方法 :采用AllspereODS 2色谱柱 ,流动相采用梯度洗脱 ,A相为乙腈 水 冰乙酸 (2 0∶78∶2 ) ,B相为甲醇 ,流速为 1mL·min-1,检测波长为 335nm ,内标校正因子法定量。结果 :2种黄酮碳苷在 0 .0 1～ 0 .0 7mg·mL-1呈良好线性关系 ,平均回收率分别为 98.8% ,97.6 % ,RSD分别为 1.6 % ,1.2 %。结论 :方法准确 ,快速 ,重现性好 ,可用于酸枣仁药材不同产地及各种炮制品的品质评价。

酸枣仁汤不同配伍情况下棘苷的RP-HPLC测定

目的:采用反相高效液相色谱法测定酸枣仁汤不同配伍情况下各组方中棘苷的含量。方法:Hypersil-C_(18)柱(4.6mm×200 mm,5μm),以乙腈-水(17:83)为流动相,流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长为334nm,柱温为室温。结果:酸枣仁汤中棘苷的回收率为95.8％,RSD为2.5％(n=6)。结论:酸枣仁与汤中其它药味配伍后,酸枣仁中棘苷的含量发生一定变化,其它药味的存在不同程度地影响棘苷的溶出。

RP-HPLC双波长法同时测定酸枣仁汤中5种成分的含量

目的建立RP-HPLC双波长同时测定酸枣仁汤中5种成分含量的方法。方法色谱柱:Kro-masil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-体积分数为1%的冰乙酸水溶液(梯度洗脱),检测波长:λ1=275 nm和λ2=340 nm,流速:1.0 mL.min-1,柱温:30℃。结果芒果苷、斯皮诺素、甘草苷、阿魏酸和洋川芎内酯I质量浓度分别在12.54～200.64、11.14～178.24、19.12～305.92、6.04～96.64、8.60～137.60 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率为95.1%～103.4%。结论该方法可作为酸枣仁汤的含量测定方法,为其质量控制提供参考依据。

酸枣仁醇提物中4个活性成分的测定

目的建立HPLC-ELSD法同时检测酸枣仁醇提物中4个活性成分的方法。方法色谱柱为Agilent TC-C18BDS(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,ELSD漂移管温度为110.5℃,气体流量为3.1 mL/min。结果 4个活性成分斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸均达到基线分离,其进样量分别在0.110～1.10、0.042～2.12、0.020～1.01、0.078～7.84μg范围内与峰面积分值呈良好线性关系,平均回收率分别为99.98%、97.80%、97.24%、95.04%(RSD≤4.3%)。结论本法灵敏度高、重现性好,可用于酸枣仁醇提物的质量控制。

酸枣仁黄酮HPLC指纹图谱建立及2种成分测定

目的建立酸枣仁Ziziphi spinosae Semen黄酮HPLC指纹图谱,并测定其中2种成分的含有量。方法以斯皮诺素为参照峰,建立10批样品的HPLC指纹图谱。酸枣仁黄酮甲醇提取物的分析采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%醋酸,梯度洗脱;体积流量1 m L/min;柱温30℃;检测波长280 nm。结果 HPLC指纹图谱中有10个共有峰,并鉴定出其中8个(维采宁-Ⅱ、牡荆素葡萄糖苷、异斯皮诺素、斯皮诺素、6'''-pyridyloylspinosin、6'''-对羟基苯甲酰斯皮诺素、6'''-阿魏酰斯皮诺素、6'''-对香豆酰斯皮诺素)。斯皮诺素和6'''-阿魏酰斯皮诺素分别在15.00~40.00μg和5.00~14.00μg范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为100.5%(1.6%)和100.4%(1.6%)。结论该方法准确、简单、可靠,可用于酸枣仁黄酮的质量控制。

大鼠一次性灌服酸枣仁提取物后棘苷的药代动力学研究(英文)

目的 用反相高效液相色谱法 ,以磺胺甲唑为内标 ,对一次性ig酸枣仁提取物后的大鼠血浆中棘苷进行药代动力学研究。方法 血浆样品经乙腈沉淀蛋白后 ,于 50℃氮气流下吹干 ,残渣用流动相溶解后进行分析。色谱条件为色谱柱 :HypersilC1 8柱 ,2 0 0mm× 4 6mmID ,5μm ;流动相 :乙腈 水 冰醋酸 (1 5∶85∶1 ) ;流速 :0 7mL·min-1 ;检测波长 :334nm ;柱温 :35℃。结果 血浆中棘苷在 1 8 1～ 90 3 5μg·L-1 成良好线性关系 (r2 ≥ 0 995)。平均回收率为94 5 % ,日内、日间精密度RSD均小于 9 0 %。该法定量限为 1 8 1 μg·L-1 ,血浆样品在 - 2 0℃可稳定保存。结论 该法简便、灵敏、准确 。

多指标正交试验法优选酸枣仁药材水提取工艺

目的:以浸膏收率、总皂苷含量、斯皮诺素含量为指标,优选酸枣仁药材水提取工艺。方法:采用正交试验,考察煎煮时间、提取次数和加水倍量3个因素,对酸枣仁药材水提取工艺条件进行优化。结果:酸枣仁药材最佳水提取工艺条件为加10倍量水浸泡过夜,加热煎煮3次,每次1h。结论:该提取工艺稳定可行,重现性好,适于酸枣仁药材水提取。

UPLC同时测定酸枣仁中4种活性成分的含量

目的：建立UPLC同时测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸含量。方法：采用ACQUITY UPLC,HSS T3色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8μm）,流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液,进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,波长204 nm,进行检测。结果：斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸的质量浓度与峰面积分别在29.70~594.0μg·mL-1,10.68~213.6μg·mL-1,6.175~123.5μg·mL-1,22.00~440.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率均在98.3%~99.4%之间,RSD均小于1.4%。结论：该方法快速、准确、简便,为全面控制酸枣仁质量提供依据。

基于“病证-效应-生物样本分析”方法的酸枣仁“安神”药性物质及归经的研究

目的:研究酸枣仁"安神"药性物质及指标性成分体内分布与归经的相关性。方法:灌胃甲状腺片混悬液160 mg·kg-1连续13天制备大鼠阴虚模型,结合高架十字迷宫装置和明暗箱装置评价酸枣仁对阴虚大鼠焦虑行为的影响;将阴虚焦虑大鼠于灌胃酸枣仁水煎液后10、20、30、40、60、90、120、240 min时摘眼球取血,并立即处死,采集心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、大肠、小肠等组织,联合应用HPLC-PDA-ELSD检测斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B在大鼠各组织中的浓度,检测数据用DAS 2.0软件处理得到相关药动学参数。结果:与阴虚模型组比较,酸枣仁显著降低阴虚大鼠24 h内异常增高的进食量(P<0.01)和饮水量(P<0.01),显著增加实验前后体质量差值(P<0.01),显著降低肾脏系数(P<0.01)和肾上腺系数(P<0.01),显著降低T3(P<0.01)、T4(P<0.05)测定值,显著升高TSH测定值(P<0.01),表明酸枣仁可以明显改善阴虚症状;显著增加开臂进入次数百分比(P<0.01)、开臂滞留时间百分比(P<0.01)和明暗箱穿箱次数(P<0.01),表现出明显的抗焦虑作用。指标成分体内分布结果显示,斯皮诺素和酸枣仁皂苷A经血液循环广泛地分布于心、肝、脾、肺、肾、胃、脑、大肠、小肠等组织中,酸枣仁皂苷B经血液循环分布于血、胃、大肠和小肠中,其中,斯皮诺素在组织中的平均分布浓度依次为小肠>胃>肝>脑>大肠>脾>肺>心>肾,在组织中的AUC0-t依次为小肠>胃>肝>大肠>脾>脑>心>肾>肺;酸枣仁皂苷A在组织中的平均分布浓度依次为肺>大肠>心>脾>肝>肾>小肠>胃>脑,在组织中的AUC0-t依次为肺>脾>肝>心>大肠>脑>胃>肾>小肠;酸枣仁皂苷B在组织中的平均分布浓度依次为大肠>小肠>胃,在组织中的AUC0-t依次为大肠>小肠>胃。结论:酸枣仁能有效改善阴虚症状,能很好地对抗阴虚大鼠的焦虑行为,具有良好的抗焦虑作用。酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A为"安神"功效物质,也是酸枣仁甘、酸味的物质基础。斯皮诺素和酸枣仁皂苷A成分在阴虚焦虑大鼠体内的分布情况与酸枣仁的归经情况比较接近。

RP-HPLC法测定酸枣仁汤中棘苷和阿魏酸的含量

目的 建立测定酸枣仁汤中棘苷和阿魏酸含量的 RP- HPL C分析方法。方法 色谱柱 :Hypersil C1 8( 2 0 0mm× 4 .6 m m,5 μm) ,棘苷流动相为乙腈 - 1%冰醋酸水溶液 ( 17∶ 83) ,检测波长 334nm;阿魏酸流动相为乙腈 - 1%冰醋酸水溶液 ( 16∶ 84 ) ,检测波长 32 0 nm,内标物为对羟基苯甲醛。结果 棘苷和阿魏酸分别在 0 .96 0～ 13.4 4μg/m L ( r=0 .9998)和 2 .0 4～ 2 7.2 μg/ m L ( r=0 .9997)与峰面积线性关系良好。平均回收率分别为 98.4 %和98.8% ,RSD分别为 2 .5 %和 2 .8%。结论 本法操作简便、快速、准确 。

RP-HPLC法测定酸枣仁中黄酮碳苷的含量

目的 建立测定酸枣仁中黄酮碳苷含量的新方法。方法 RP- HPL C法 ,采用 Hypersil- C1 8柱为分析柱 ,乙腈 -水 (17∶ 83)为流动相 ,检测波长为 334 nm,,流速为 0 .8m L/ min。结果 黄酮碳苷在 5 .2 80～ 14.0 8μg/ m L范围内与峰面积呈良好的线性关系 (r=0 .9997,n=6 ) ,平均回收率为 95 .8%。结论 该法简便、快速、重现性好 ,适用于酸枣仁中黄酮碳苷的定量分析。

2种斯皮诺素固体分散体的制备及其体内药动学行为

目的制备斯皮诺素固体分散体、磷脂复合物固体分散体,并考察其体内药动学行为。方法溶剂挥发法制备2种固体分散体后,X射线粉末衍射(XRPD)分析存在状态,测定溶解度和体外溶出速率。大鼠灌胃给药后,HPLC法测定斯皮诺素血药浓度,计算主要药动学参数。结果斯皮诺素在2种固体分散体中以无定型状态存在,溶解度、体外溶出速率明显提高。与原料药比较,固体分散体、磷脂复合物固体分散体相对生物利用度分别增加到219.61%、265.39%。结论固体分散体、磷脂复合物固体分散体均可促进斯皮诺素口服吸收,以后者更明显。

正交设计法优化炒酸枣仁的炮制工艺

目的:采用正交设计法优化炒酸枣仁的炮制工艺。方法:采用L9(34)正交设计表安排实验,以斯皮诺素含量为指标,对酸枣仁炒制温度和炒制时间进行考察,以此来优化炒酸枣仁的炮制工艺。结果:炒酸枣仁的最佳炮制工艺为130℃,炒制4 min。结论:中试试验结果证实此法优选的炒酸枣仁工艺合理可行。

RP-HPLC测定枣仁安神颗粒中斯皮诺素的含量

目的:建立并应用HPLC法测定枣仁安神颗粒中斯皮诺素的含量。方法:采用Hpersil C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.03%磷酸水溶液(18∶82)为流动相,检测波长270 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:所建立的RP-HPLC含量测定方法线性关系良好(r=0.9991),方法平均回收率99.3%,RSD=1.4%(n=9)。结论:该分析方法快速、准确,重现性好,可用于枣仁安神颗粒的质量控制。