猪脾转移因子增强禽白血病病毒A/B亚群抗体阳性鸡群免疫水平的研究

为了解猪脾转移因子(TF)对禽白血病病毒A/B亚群(ALV—A/B)抗体阳性鸡群免疫水平的影响,本研究以新城疫(ND)HI试验和淋巴细胞增殖试验分别检测ND HI抗体效价(log2x)和刺激指数(SI)作为指示参数,采集特佳、罗曼、海兰和伊莎共4个品种蛋鸡血样,并从中选出各60羽份(ALV-A/B抗体阳性、阴性鸡各半,ALV p27抗原均为阴性),将4个品种的ALV-A/B抗体阳性蛋鸡均分为实验组(联合接种TF 0.02 mL+NDV La Sota疫苗1羽份/羽,TF多肽含量为3.5 mg/mL,核糖含量为72.0μg/mL,脱E受体法效力检验活力为15%)和对照组(单独接种NDV La Sota疫苗1羽份/羽),于接种后21 d采血检测。结果显示,ALV-A/B抗体阳性鸡群(120羽份)的ND HI抗体效价均值(6.1±1.3)与阴性鸡群(120羽份)均值(6.2±1.3)差异不显著,但其SI均值(1.20±0.10)显著低于阴性鸡群(1.35±0.10)(p<0.05);实验组(60羽份)的ND HI抗体效价和SI均值(9.0±1.3,1.73±0.15)显著高于对照组(60羽份)均值(7.8±1.2,1.39±0.16)(p<0.05)。研究结果表明,ALV-A/B抗体阳性与鸡ND HI抗体效价相关性不大,而对SI具有抑制作用;TF具有增强ALV-A/B抗体阳性鸡群免疫水平的作用。

脾脏转移因子对粤黄鸡生长发育以及血液T_4、T_3、GH水平的影响

１日龄雌性粤黄鸡随机分为４组，实验组各组分别每周胸肌注射０５ｍＬ１∶１、１∶５、１∶２５稀释的鸡脾脏转移因子提取液，对照组注射等量ＰＢＳ。每周称重，第４、８周龄时分别采集血样，用ＲＩＡ法测定血液中Ｔ４、Ｔ３、ＧＨ的浓度。结果表明：注射高浓度（１∶１）的鸡脾脏转移因子提取液能显著促进粤黄鸡生长、提高血液中Ｔ４、ＧＨ浓度。

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子(TF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量(10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份)LaSota疫苗株单独(单独免疫组)、LaSota疫苗株与TF联合(联合免疫组)免疫SPF鸡,14 d后以NDV F 48 E 9强毒攻毒,同时设立对照组(非免疫攻毒)和空白组(非免疫非攻毒),并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量(PD_(50))如下:单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.0008羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.0005羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^(-3)羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著(P<0.01);攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著(P<0.01)。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD_(50);在抵抗NDV F 48 E 9强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。

猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫猪脾脏转移因子的制备及其活性分析

从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反应和硝酸-钼酸铵试验等方法检测TF的主要成分,经高效液相色谱法测定TF中氨基酸种类及其含量;通过鸡红细胞吞噬试验和MTT法,检测TF对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血淋巴细胞增殖活性的调节作用。进而将9头4周龄健康仔猪随机分为A、B和C组,每组3头。A组每头猪左、右侧耳后分别肌内注射1头份PRRSV疫苗和1mL TF;B组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL TF的混合液;C组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL生理盐水混合液。免疫后20d,通过MTT法检测每组猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖活性。制备的TF内无蛋白质成分,含有核酸和18种氨基酸,每毫升TF含核酸21.5μg、总氨基酸3.479mg。TF能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力和PBLC增殖活性。当TF与PRRSV疫苗分开或混合注射给4周龄仔猪后,能够显著提高仔猪PBLC的增殖能力。从PRRS弱毒活疫苗免疫猪的脾制备了TF,其能显著提高巨噬细胞的吞噬功能和外周血淋巴细胞的增殖活性。

牦牛脾脏转移因子对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响

为了研制一种能够增强动物抗病力的生物活性免疫制剂。采用冻融-透析法提取牦牛脾脏中非特异性转移因子(nTF),并用MTT法检测牦牛TF对小鼠淋巴细胞转化增殖的影响。结果表明:(淋巴细胞+刀豆蛋白+TF)对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖效果优于(淋巴细胞+TF)组和(淋巴细胞+脂多糖+TF)组,差异显著(P<0.05);注射TF组对小鼠脾淋巴细胞的转化增殖的效果优于注射生理盐水对照组(P<0.05)。牦牛脾脏转移因子对小鼠脾淋巴细胞增殖有促进作用,协同刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)对淋巴细胞增殖的效果有增强趋势。

鸡脾转移因子对鸡肠道抗炎因子和致炎因子分泌的影响

为研究鸡脾转移因子对蛋雏鸡肠道细胞因子分泌的影响,试验选取200只SPF白来航蛋鸡,随机均分成4组。各组从5日龄开始分别灌服0.1 mg/只·d、0.25 mg/只·d及1 mg/只·d剂量的鸡脾转移因子(灌服1周,停喂1周);对照组灌服生理盐水。40日龄屠宰称重,取十二指肠、空肠、回肠及直肠组织,ELISA方法检测TNF-α、IL-10的表达水平。结果表明,1 mg剂量组鸡的体重显著高于对照组(P<0.05)。0.25 mg和1.0 mg剂量组十二指肠内TNF-α水平显著降低(P<0.05);0.25 mg/d剂量组十二指肠、直肠的IL-10含量显著提高(P<0.05);1 mg剂量鸡脾转移因子显著提高十二指肠IL-10含量(P<0.05),极显著提高空肠、回肠和直肠的IL-10含量(P<0.01)。综上结果表明,鸡脾转移因子可提高鸡肠道抗炎因子表达,抑制促炎因子分泌,改善肠道黏膜免疫屏障功能。

转移因子口服液制备方法的研究

目的研究以猪脾为材料制备转移因子口服液的方法。方法将猪脾去脂肪细胞破碎,离心澄清、超滤、除菌,按国家药品监督管理局国家药品标准用Folin酚法进行全面检定。结果用上述工艺提取的转移因子口服液,多肽8.04 mg/ml,核糖459.2μg/ml,E玫瑰花15.8%;经检验质量稳定,3批试制品其理化性质和生物学活性均符合转移因子的制备要求;无菌试验,免疫活性测定均达到国家的药品标准。结论使用该生产工艺制备的转移因子口服液,具有周期短、质量稳定、产量高、含量高、生产成本低等优点,可大规模生产。

牛脾转移因子的提取工艺研究

目的:比较从牛脾中提取活性TF的不同方法。方法:分别利用Lawrence—透析法、Lawrence-超滤法、超离心—超滤法提取,再以蛋白反应、红外及紫外扫描予以鉴定比较。结果:Lawrence-超滤法和超离心—超滤法效果较好。

猪脾转移因子与鸡毒支原体F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究

为了解猪脾转移因子(TF)与鸡毒支原体(MG)F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率的影响,以活菌数达109ccu/m L的MG F株0.033 m L/羽与TF 0.02 m L/羽分侧点眼SPF鸡,设为A组;B组以MG F株0.033 m L/羽与生理盐水0.02m L/羽分侧点眼;C组以生理盐水0.033 m L/羽与TF 0.02 m L/羽分侧点眼;D组以生理盐水0.033 m L/羽和0.02 m L/羽对应分侧点眼,作为对照组。点眼后第7 d采血测定淋巴细胞比率。结果显示,A组(63.9%)、B组(53.8%)和C组(54.6%)的淋巴细胞比率均值分别比D组(41.5%)提高了22.4%、12.3%和13.1%。结果表明,TF与MG F株单独使用均能提高SPF鸡的淋巴细胞比率,且TF与MG F株联合使用后淋巴细胞比率提高值高于单独使用。

三种转移因子的部分理化性质比较

以人脾、猪脾和牛脾的3种不同的转移因子,通过紫外光谱分析,人脾和猪脾的转移因子的E260/E280≥2,与转移因子的质量控制标准一致,紫外最高吸收峰在波长250±2nm处。而牛脾转移因子的E260/E280≥1,最高吸收峰在波长268=2nm处。通过高效反向液相色谱和水解氨基酸成分分析进一步证明,人脾和猪脾转移因子组成成分相似,牛脾转移因子与前两者有一定差异。

猪脾转移因子的制备及活性鉴定

采用透析法提取猪脾转移因子(TF),并对其理化性质、生物活性、安全性进行了研究。结果表明,TF可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,体外抑菌结果显示TF对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌敏感,对链球菌不敏感。

人巨细胞病毒特异性转移因子对小鼠脾细胞分化增殖的作用

①目的检测人巨细胞病毒特异性转移因子（ＨＣＭＶ－ＳＴＦ）对小鼠脾细胞分化增殖作用。②方法采用微量细胞培养法培养小鼠脾细胞，共分５组，分别加入１６４０培养液（空白对照），ＰＨＡ，ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ，ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ．培养４８ｈ后加入氚－胸腺嘧啶（３Ｈ－ＴＤＲ），再培养２４ｈ，收集细胞，用液体闪烁计数器计数（ｃｐｍ），计算促进率。③结果ＨＣＭＶ－Ａｇ＋ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组与ＨＣＭＶ－Ａｇ，ＨＣＭＶ－ＳＴＦ组比较具有明显的促进小鼠脾细胞分化增殖的作用（ｑ＝３．３５，４．７５，Ｐ＜０．０５）。④结论ＨＣＭＶ－ＳＴＦ具有相应抗原的依赖活性；同时也证明３Ｈ－ＴＤＲ掺入法检测小鼠脾细胞分化增殖效应，是特异性转移因子质控的一种较为理想的测试方法。

PEF辅助快速提取非特异性奶牛脾脏转移因子的实验研究

应用PEF成功从奶牛脾脏中提取非特异性转移因子,并与常规提取法和复合酶提取法进行了比较。经理化特性分析,奶牛脾脏转移因子是以低分子多肽(<10kD)为主的混合物,含有少量核酸和氨基酸。实验表明,将物料溶解于6倍质量的磷酸盐(pH7.0)缓冲液中,在脉冲电场强度为25kV/cm,脉冲数为16μs,和流速为2mL/min的条件下,提取液中低分子多肽的含量有最大值9.85mg/mL。PEF提取率是常规方法的2倍,复合酶法的1.47倍。PEF法耗时短,操作简单,成本低。因此,PEF提取是一种很有希望的提取非特异性奶牛脾脏转移因子方法。

流行性出血热病毒特异性转移因子的研究

对流行性出血热病毒(EHFV)特异性转移因子(EHFV-TF)的制备、特性及在小鼠体内的活性作用进行了研究。其理化性状与普通 TF 非常相似,能激活淋巴细胞的 E 受体(激活率为65.54%),明显提高 Et-RFC 的形成率。E-HFV-TF 还具有特异性抗原依赖活性:①促进 BALB/C 小鼠和 NIH 裸鼠特异性抗体的产生;②促进 LACA 小鼠脾细胞对 EHFV 反应的特异性应答;③促进脾细胞在 EHVF 存在时对 PHA 诱导下的增殖反应(促时率为151.3%)。EHFV—TF可推迟动物感染 HEFV 后的发病期,延长病程和推迟死亡时间;减轻发病动物脑肺充血、出血、水肿现象和肝肾病理损害程度。结果表明 EHFV-TF 不仅具有提高细胞免疫的非特异活性,而且具有对 EHFV 抗原的依赖活性。本研究提示,E-HFV-TF 可用于 EHFV 感染病人的治疗。

注射用转移因子不同生产方法比较

比较从猪脾中提取活性转移因子的不同生产方法,以建立适合产业化的制造工艺。将猪脾匀浆后,分别冻融0、3、5次,再以超滤法或Lawence法提取转移因子。与lawrence法相比,经5次冻融并超滤制备的产品收率高,符合国家标准。匀浆冻融次数对转移因子的收率和质量有一定的影响,超滤法适合于转移因子的大规模生产。

清热利湿汤治疗脾胃湿热型口腔扁平苔藓临床研究

目的:观察清热利湿汤治疗脾胃湿热型口腔扁平苔藓(OLP)的临床效果。方法:将60例脾胃湿热型OLP患者随机分为对照组和观察组各30例。对照组给予转移因子口服液治疗,观察组给予清热利湿汤治疗。治疗后评估2组临床疗效,观察2组治疗前后相关指标的变化情况。结果:观察组治疗总有效率90.00%,高于对照组的66.67%,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗前,2组症状、体征积分比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗后,2组症状、体征积分均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P <0.05);观察组症状、体征积分均低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05)。治疗前,2组IgA、IgG水平比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。治疗后,2组IgA水平与治疗前比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);2组IgG水平均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P <0.05);观察组IgG水平低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:清热利湿汤治疗脾胃湿热型OLP,可有效改善患者的临床症状及免疫指标。

ND高免猪脾脏转移因子的分离鉴定

对ND疫苗3只高免猪脾脏进行了转移因子(TF)分离 ,对分离出的转移因子做理化性质检验及含量测定 ,并与正常猪脾转移因子作了比较研究。结果表明 ,ND高免猪脾脏与正常猪脾脏转移因子理化性质基本一致 。

牦牛脾脏TF理化性质和部分生物学特性的测定

采用冻融—透析法提取了牦牛脾脏转移因子(transfer factor,TF),并对其澄明度、p H值等理化性质进行了测定和分析,同时对牦牛脾脏TF进行了无菌检验、热原检验、安全性试验、过敏试验、体外抑菌试验等部分生物学特性检测和分析。结果表明,用该方法提纯的牦牛脾脏TF含有DNA、核苷酸等,无菌,无热原,无毒性,无致敏性,无抗原性,符合生物制剂的质量标准。该研究对牦牛脾脏转移因子的开发利用提供了试验依据。

猪脾转移因子的提取与特性鉴定

将猪脾制成匀浆，经透析袋透析，Ｇ—６漏斗除菌，即可获得粗制猪脾转移因子（Ｔ—Ｐ）．经鉴定，猪脾转移因子的理化性质和生物学特性与国内外报道资料相符，表明制品达到国内外同类制品水平．

体外免疫法制备狗脾抗结核特异性转移因子的实验研究

本实验旨在探索体外细胞免疫的可行性 ,即脾淋巴细胞与卡介苗在体外培养条件下能否使淋巴细胞致敏 ,产生抗结核特异性转移因子 (STFTB)。方法 :采用狗脾淋巴细胞与卡介苗共同孵育培养 ,收集培养后的细胞 ,用超声粉碎法破碎细胞 ,中空纤维超滤器超滤 ,收集超滤液即为狗脾抗结核特异性转移因子 (CS -STFTB)。对该制剂进行理化指标及相关的免疫学试验。结果 :该制剂为淡黄色澄清黄色澄清透明液体 ,多肽含量 1.0 3mg/ml,核糖含量 87μg/ml。蛋白质反应 (- )。紫外最大吸收峰在 2 5 8nm ,E2 6 0nm/ 2 80nm为2 .6 6 7。CS -STFTB与白细胞、PPD共同孵育数减低。能够拮抗HC引起的吞噬功能下降。结论 :用体外免疫法制备的CS -STFTB符合转移因子制检标准 ,可提高机体的特异性和非特异性免疫功能。