破壁灵芝孢子粉中多种重金属元素及硒含量检测方法探讨

采用微波消解进行前处理,三重四极杆-电感耦合等离子体质谱法测定破壁灵芝孢子粉中镉、铬、镍、砷、铅、汞及硒元素含量,对方法条件进行优化和讨论,并对20批次破壁灵芝孢子粉进行测定。结果表明,镉、铬、镍、砷、铅和汞元素在氦气碰撞模式,硒元素在氧气反应模式下,采用内标校正定量,可达到良好的测定效果。在优化的条件下,各元素线性关系良好,检出限均可达μg·kg^(-1)级别;镉、铬、镍、砷、铅及硒元素的加标回收率在90.3%~105.0%,汞的加标回收率在82.1%~92.5%;方法精密度在5%以内。此方法前处理操作简便,检测灵敏度高,稳定性好,给灵芝孢子粉多元素测定提供了良好的技术支撑。

灵芝孢子粉和孢子油脂溶性成分分析

分析不同破壁时间、不同来源灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉,灵芝孢子油加工原料(破壁孢子粉)、中间体(制粒后孢子粉、一级萃取孢子油、二级萃取孢子油)和孢子油成品,不同来源灵芝孢子油,不同植物油的脂溶性成分含量和指纹图谱。结果表明:破壁处理能显著增加灵芝孢子粉中脂溶性成分溶出;不同来源灵芝孢子粉中脂溶性成分含量有差异,但不同来源孢子粉指纹图谱相似度均大于0.90,有18个共有峰;灵芝孢子油加工原料(破壁孢子粉)、制粒后孢子粉、一级萃取孢子油、二级萃取孢子油及孢子油成品脂溶性成分指纹图谱有22个共有峰,不考虑孢子油成品中维生素E峰,孢子油加工原料、中间体和孢子油成品间指纹图谱的相似度均大于0.99;不同来源灵芝孢子油指纹图谱峰组成和峰面积有差异,指纹图谱相似度为0.490~0.925,有23个共有峰;植物油的色谱峰与孢子油相比存在较大差异。研究结果为灵芝孢子粉和孢子油的质量控制提供参考。

酶法提取灵芝孢子粉胞壁水溶性糖的工艺优化及分子量分布

为提高灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉胞壁水溶性糖的提取效率,以灵芝孢子粉胞壁残渣为研究对象,用单因素实验、响应面实验优化酶法胞壁水溶性糖提取工艺,并比较酶法和不同物理法处理的灵芝孢子粉胞壁水溶性糖的分子量分布。结果表明:最佳提取工艺为溶壁酶加量2%,酶解时间5 h,料液比1︰10(g︰m L)、温度40℃、pH6.5,在此条件下提取的灵芝孢子粉胞壁水溶性糖含量达到17.86%。分子量分布分析结果表明,酶解后的水溶性糖以低聚糖为主。研究结果可为有效利用和开发灵芝孢子粉提供参考。

某品牌灵芝破壁孢子粉的安全性评价

目的研究某品牌灵芝破壁孢子粉的安全性。方法采用急性毒性试验、3项遗传毒性试验和30 d喂养试验评价灵芝破壁孢子粉的安全性。结果该品牌灵芝破壁孢子粉对小鼠急性经口MTD值>15000 mg/kg b.wt,属无毒级;3项遗传毒性试验均为阴性结果;30 d喂养期间,不同剂量的灵芝破壁孢子粉对大鼠的体重、食物利用率、主要脏体、血液学和血生化指标均产生显著影响(P值均<0.05);试验动物组织病理学均未见显著改变。结论试验条件下,该品牌灵芝破壁孢子粉的安全性良好。

灵芝孢子粉咀嚼片的研发与制作

以灵芝孢子粉为原料,研制灵芝孢子粉咀嚼片。通过配方优化试验和感官品质评价分析,得出最佳配方组合为灵芝孢子粉14.4%、低聚果糖34.0%、全脂奶粉51.6%。按照此配方制作的灵芝孢子粉咀嚼片口感和形状俱佳,硬度和脆碎度均符合标准,入口易崩解,且无杂质产生。

不同干燥方式对灵芝孢子粉中灵芝孢子油过氧化值的影响

目的:比较不同干燥方式对灵芝孢子粉中灵芝孢子油过氧化值的影响。方法:以西藏灵芝孢子粉为例,采用不同的干燥方式将灵芝孢子粉干燥至合格,然后进行破壁,用超临界CO_(2)萃取法提取灵芝孢子油,检测灵芝孢子油的过氧化值,并比较不同干燥方式对灵芝孢子油的过氧化值的影响。结果:微波干燥和真空干燥方式得到的灵芝孢子油过氧化值均合格,分别为0.13%,0.14%;热风干燥和晾晒干燥方式得到的灵芝孢子油过氧化值不合格,分别为0.16%、0.17%。结论:水分变化率可能是灵芝孢子粉干燥过程中的重要影响因素,微波干燥方式水分变化率远高于其他方式,干燥效率高,耗能少,且不影响孢子油过氧化值,适合干燥大规模样品;其它干燥方式相对比较费时耗能,且灵芝孢子粉存在变质的风险。

灵芝孢子粉提质扩能生产及质量控制研究

为了能够保证灵芝孢子粉产品产量和质量,通过灵芝孢子粉精深加工提质扩能的建设和生产破壁灵芝孢子粉的质量控制,利用质量检测体系对灵芝孢子粉的理化指标进行了3批次的随机抽检分析,结果发现:提质扩能建设改善了生产车间、空气净化系统、净化水处理设备、保鲜冷库、外部参观通道窗口硬件设施,提升了低温灵芝孢子破壁、胶囊填充、自动装粉技术,使灵芝孢子粉产品的生产流程规范化标准化,灵芝孢子粉产品的理化检测指标均符合《破壁灵芝孢子粉质量标准》。

不同品种灵芝子实体及孢子粉元素成分分析及重金属安全性评价

针对我国鲁西地区主栽灵芝品种,利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定不同品种灵芝子实体、孢子粉及破壁孢子粉中元素及重金属含量,开展元素成分分析及重金属安全性评价。元素成分分析结果表明,藏芝和香血芝子实体中大部分元素含量明显高于赤芝、美芝和新大片子实体中元素含量,特别是Fe、Cu、Zn、Mn、Se、B、V、Co、Sr 9种人体必需微量元素,其中藏芝子实体中Fe元素含量达到234 mg/kg、Zn元素含量达到57.9 mg/kg、Se含量达到0.309 mg/kg,香血芝子实体样品Sr元素含量最高,达到3.60 mg/kg。赤芝粉和赤芝椴木粉元素营养质量高于美芝粉和新大片孢子粉元素营养质量,赤芝粉和赤芝椴木粉中硒含量分别是美芝粉中硒含量的3倍和2倍。重金属安全性分析结果表明5种灵芝子实体与4种孢子粉样品Pb、Hg 2种重金属含量远低于相关标准,安全性较高,藏芝及香血芝子实体、新大片孢子粉样品As元素含量较高,具有一定的安全性风险。破壁技术会造成孢子粉中As、Pb、Cd、Cr、Cu、Ni金属元素含量不同程度的提高,孢子粉破壁过程中重金属存在一定的安全风险。

适合孢子粉高产的赤灵芝栽培配方筛选

为充分利用湛江市本地甘蔗渣、桑屑枝条、土沉香渣等秸秆资源,降低赤灵芝生产对木材原料的依赖,通过研究3个配方菌丝生长速度、子实体和孢子粉产量、品质(多糖、三萜)、抗氧化活性等,筛选出适合本地的优良赤灵芝栽培配方。结果显示,添加了甘蔗渣的配方2,菌丝生长速度最快(0.75 cm·d^(-1)),孢子粉产量最高(14.45 g/袋),且多糖和三萜总含量也高于其他2个配方。添加土沉香渣的配方3,菌盖直径(7.55 cm)、子实体鲜质量(36.79 g/袋)、总产量最高,但多糖和三萜总含量不如其他2个配方。添加了桑屑的配方1,赤灵芝的总抗氧化活性稍高于其他2个配方,但无显著差异。3个配方下子实体的三萜含量高于孢子粉,而孢子粉的多糖含量高于子实体。综合分析,配方2是实现梅灵3号灵芝孢子粉高产的较优栽培配方,适合在当地推广应用。

大孔树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜

研究比较大孔树脂对灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的吸附特性,优选其对灵芝总三萜的分离纯化工艺条件。采用紫外分光光度法测定灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的含量,选择8种大孔树脂,以总三萜吸附率和解吸率为指标,筛选最佳树脂型号,并考察最佳树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜的工艺参数。结果表明:8种大孔树脂中,HPD-500型大孔树脂对灵芝子实体总三萜的吸附解吸效果最好,最佳纯化工艺条件为上样液浓度1.0 g干样/mL,最大上样量2 BV,用8.5 BV的75%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝子实体总三萜纯度达60.59%;而AB-8型大孔树脂对灵芝孢子粉总三萜的吸附解吸效果最好,且最佳纯化工艺条件为上样液浓度0.4 g干样/mL,最大上样量3 BV,用8.5 BV的95%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝孢子粉总三萜纯度达65.48%。综上,HPD-500型和AB-8型大孔树脂分别富集纯化灵芝子实体和灵芝孢子粉中总三萜的工艺效果显著,简单可行,为灵芝三萜的深入探究和工业化纯化灵芝子实体和孢子粉总三萜提供理论依据。

灵芝破壁孢子粉中粗多糖含量测定的不确定度评估及控制

为明确用于食用菌粗多糖含量测定的苯酚-硫酸分光光度法中对结果可靠性的影响因素,根据标准NY∕T 1676—2008中的方法对一个灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖进行测定,分析该方法在测定过程中的不确定度来源,计算各分量的不确定度和合成不确定度,并对各分量不确定度对合成不确定度的贡献大小进行排名。结果表明:灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖含量为2.71%±0.09%(k=2),影响不确定度的主要来源是标准品溶液配制和稀释、标准曲线拟合、样品重复性。增加标准工作溶液的配制量可有效降低苯酚-硫酸分光光度法的不确定度,并能提高其可靠性。

灵芝孢子粉脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱构建及含量测定

以16批(S1~S16)不同来源的灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉为材料,构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)指纹图谱,将S1~S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版),指认共有峰和评价相似度,采用HPLC-ELSD测定S1~S16中亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇含量。结果表明:共指认4个共有峰,分别为亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇;除S14外,其他15批灵芝孢子粉中脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱相似度高,较为稳定;不同来源的灵芝孢子粉中亚油酸、棕榈酸和油酸的含量差异较大,麦角甾醇含量较为稳定。

去壁灵芝孢子粉水溶成分抑制头颈鳞癌细胞增殖及转移

目的探讨去壁灵芝孢子粉水溶成分(A-GSP)在头颈鳞癌细胞中的生物学作用。方法利用MTS法检测A-GSP在头颈鳞癌细胞系SCC15和SCC25中的细胞活力。采用平板克隆、划痕愈合实验和穿室实验探究A-GSP对头颈鳞癌细胞增殖、转移能力的影响。通过流式分析试剂盒检测A-GSP对头颈鳞癌细胞凋亡能力和细胞周期分布的影响。免疫蛋白印迹法检测A-GSP处理后上皮间质转化(EMT)分子和细胞周期蛋白的表达变化。结果A-GSP作用后,头颈鳞癌细胞的增殖能力减弱(F=62.72,P<0.0001),转移能力下降(F=95.7,P<0.0001),细胞凋亡能力增加(F=87.65,P<0.0001),G2/M期停滞(F=15.31,P<0.01)。此外,A-GSP处理导致上皮细胞标志物E-cadherin上调,间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin、Snail、Slug下调,细胞周期激酶CDK1下调,P21和P27上调,但是,并未引起凋亡通路蛋白Caspase和Bax水平改变。结论A-GSP通过诱导细胞周期G2/M期停滞和抑制EMT从而抑制头颈鳞癌细胞的增殖转移。

武夷山赤芝GL8栽培子实体鉴定及其孢子粉成分检测

通过形态鉴定及ITS序列比对证实武夷山GL8栽培子实体为赤芝正品,在其ITS2区域中发现单碱基突变和插入位点。扫描电镜观察到原木栽培采收得到的GL8孢子粉纯度高,呈完整而饱满的椭圆形,而在破壁样品中可见其孢壁结构均已崩裂、破损。检测结果表明,破壁孢子粉中17种氨基酸总量可达13.04 g·100^(-1)·g^(-1),其中甲硫氨酸含量占比高达56.21%~57.64%;其粗脂肪含量高达32.1~32.4 g·100^(-1)·g^(-1),主要成分为以不饱和脂肪酸为主,包括油酸(C18∶1,61.4%)、亚油酸(C18∶2,13.3%)、棕榈酸(C16∶0,14.6%)和硬脂酸(C18∶0,4.2%)。通过临界CO_(2)流体萃取、采用气相色谱-质谱联用和高效液色谱分析,可以进一步确定孢子油中脂肪酸组分及是否存在齐墩果酸、熊果酸。

响应面法提取优化破壁灵芝孢子粉多糖及其分级醇沉组分的抗氧化活性研究

目的:对破壁灵芝孢子粉多糖(BGP)的最佳提取工艺、各分级醇沉多糖组分的抗氧化性进行探究。方法:以破壁灵芝孢子粉为原料,采用内部沸腾法探究提取温度、提取时间、料液比对BGP得率的影响;利用响应面法分析优化BGP的提取参数。用不同浓度的乙醇醇沉多糖,通过测定其DPPH自由基以及羟自由基的清除力,测定其抗氧化性。结果:根据回归模型分析预测结果,最佳提取工艺参数为提取温度83℃、提取时间7 min、料液比1:21。在此条件下BGP的得率为9.10%。以不同浓度的乙醇分级醇沉BGP,得到5种醇沉BGP组分。乙醇浓度为90%时,所得BGP的得率最高。抗氧化实验表明各醇沉BGP都具有一定的抗氧化活性。90%-BGP的抗氧化性稍强于其他醇沉多糖,并且随着多糖浓度的增加,各醇沉多糖的抗氧化性均有一定的增加的趋势。结论:利用最佳提取参数提取,不同乙醇浓度醇沉的BGP均具有一定的抗氧化活性。

化学视角下破壁灵芝孢子粉工艺研究

为了研究破壁灵芝孢子粉生产的关键技术,建立灵芝孢子粉制备破壁灵芝孢子粉胶囊生产工艺,测定了其20项指标,并依据国标和中国药典对试样进行了风险评估。结果表明:精深加工后的灵芝孢子粉呈棕褐色,有细微清淡的独特香味,孢子粉比较分散疏松,无颗粒感,无结块。按照指标要求中的国标方法检测发现破壁灵芝孢子粉胶囊中的水分为3.72%<8.0%、总灰分为0.89%<3.0%、过氧化值未检出、菌落总数为2.1×10^(3) CFU/g<10000、大肠菌群为0.3 MPN/g<0.92 MPN/g、霉菌和酵母为5 CFU/g<20 CFU/g、沙门氏菌未检出、金黄色葡萄球菌未检出、As为0.6 mg/kg<1.0 mg/kg、Ni为0.11 mg/kg<1.0 mg/kg、Pb为0.154 mg/kg<2.0 mg/kg、Cd为0.034 mg/kg<0.5 mg/kg、Cr未检出、Hg为0.036 mg/kg<0.1 mg/kg,说明中药饮片破壁灵芝孢子粉胶囊理化指标符合国家标准。

灵芝孢子粉通过JAK1/STAT6信号通路抑制M2型巨噬细胞极化

目的探究灵芝孢子粉对M2型巨噬细胞极化的影响及其可能的作用机制。方法采用IL-4(100 ng·mL^(-1))刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞,建立M2型巨噬细胞模型,分别给予灵芝孢子粉1、2、4 mg·mL^(-1)进行孵育。CCK8法观察灵芝孢子粉对正常巨噬细胞活力的影响,流式细胞术检测M2型巨噬细胞表面分子CD206和CD86的表达,RT-q PCR、ELISA检测TGF-β1、IL-10和Arg-1的表达;Western blot检测JAK1和STAT6磷酸化表达水平。结果与正常组相比,IL-4组M2型极化相关标志物CD206、TGF-β1、IL-10和Arg-1等表达显著升高(P<0.001),JAK1、STAT6磷酸化蛋白水平显著上升(P<0.001);灵芝孢子粉干预后,上述M2型极化相关标志物和蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05,P<0.001)。结论灵芝孢子粉可以抑制M2型巨噬细胞极化,其作用机制可能与抑制JAK1/STAT6信号通路有关。

微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定灵芝孢子粉中铅元素含量的方法验证

依据《食品安全国家标准食品中铅的测定》(GB 5009.12—2017),对微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定灵芝孢子粉中铅元素含量方法的线性关系、检出限定量限、精密度准确度进行分析。结果表明,铅浓度和吸光度的线性关系为y=0.0049x-0.0011,相关系数为0.9994,方法检出限为0.0108 mg·kg^(-1),方法定量限为0.0360 mg·kg^(-1),精密度与准确度均符合标准要求,证明了该方法在保健食品灵芝孢子粉检测中的适用性。

响应面法优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取工艺

目的:优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯的提取工艺。方法:利用超声波法提取破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯,以甘油三油酸酯提取率为响应值,在提取条件单因素试验的基础上,根据响应面Box-Behnken试验设计,优化壁灵芝孢子粉的提取工艺。结果:破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯最佳提取参数为料液比0.1:25(g·mL-1),超声功率560W,超声时间30min。在此最优提取条件下,破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取率为5.01%。结论:本方法利用超声波提取法可以有效提取破壁灵芝孢子粉中的甘油三油酸酯。

灵芝孢子粉抗突变和抑制肿瘤作用实验研究

目的 对灵芝孢子粉的抗突变和抗肿瘤作用进行研究 ,为开发灵芝的保健作用提供依据。方法 以小鼠骨髓细胞微核实验和睾丸染色体畸变实验观察灵芝孢子粉的抗突变作用 ,以S - 180瘤细胞和H - 2 2瘤细胞移植性肿瘤观察灵芝孢子粉的抗肿瘤效果。结果 灵芝孢子粉对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核发生和丝裂霉素诱发的小鼠睾丸细胞染色体畸变均有明显的抑制效果。对S - 180和H - 2 2肿瘤细胞小鼠移植性肿瘤生长也有明显的抑制作用。结论 灵芝孢子粉对体细胞和生殖细胞的DNA损伤均有保护作用 。