破壁灵芝孢子粉中多种重金属元素及硒含量检测方法探讨

采用微波消解进行前处理,三重四极杆-电感耦合等离子体质谱法测定破壁灵芝孢子粉中镉、铬、镍、砷、铅、汞及硒元素含量,对方法条件进行优化和讨论,并对20批次破壁灵芝孢子粉进行测定。结果表明,镉、铬、镍、砷、铅和汞元素在氦气碰撞模式,硒元素在氧气反应模式下,采用内标校正定量,可达到良好的测定效果。在优化的条件下,各元素线性关系良好,检出限均可达μg·kg^(-1)级别;镉、铬、镍、砷、铅及硒元素的加标回收率在90.3%~105.0%,汞的加标回收率在82.1%~92.5%;方法精密度在5%以内。此方法前处理操作简便,检测灵敏度高,稳定性好,给灵芝孢子粉多元素测定提供了良好的技术支撑。

灵芝孢子粉和孢子油脂溶性成分分析

分析不同破壁时间、不同来源灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉,灵芝孢子油加工原料(破壁孢子粉)、中间体(制粒后孢子粉、一级萃取孢子油、二级萃取孢子油)和孢子油成品,不同来源灵芝孢子油,不同植物油的脂溶性成分含量和指纹图谱。结果表明:破壁处理能显著增加灵芝孢子粉中脂溶性成分溶出;不同来源灵芝孢子粉中脂溶性成分含量有差异,但不同来源孢子粉指纹图谱相似度均大于0.90,有18个共有峰;灵芝孢子油加工原料(破壁孢子粉)、制粒后孢子粉、一级萃取孢子油、二级萃取孢子油及孢子油成品脂溶性成分指纹图谱有22个共有峰,不考虑孢子油成品中维生素E峰,孢子油加工原料、中间体和孢子油成品间指纹图谱的相似度均大于0.99;不同来源灵芝孢子油指纹图谱峰组成和峰面积有差异,指纹图谱相似度为0.490~0.925,有23个共有峰;植物油的色谱峰与孢子油相比存在较大差异。研究结果为灵芝孢子粉和孢子油的质量控制提供参考。

灵芝孢子粉咀嚼片的研发与制作

以灵芝孢子粉为原料,研制灵芝孢子粉咀嚼片。通过配方优化试验和感官品质评价分析,得出最佳配方组合为灵芝孢子粉14.4%、低聚果糖34.0%、全脂奶粉51.6%。按照此配方制作的灵芝孢子粉咀嚼片口感和形状俱佳,硬度和脆碎度均符合标准,入口易崩解,且无杂质产生。

酶法提取灵芝孢子粉胞壁水溶性糖的工艺优化及分子量分布

为提高灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉胞壁水溶性糖的提取效率,以灵芝孢子粉胞壁残渣为研究对象,用单因素实验、响应面实验优化酶法胞壁水溶性糖提取工艺,并比较酶法和不同物理法处理的灵芝孢子粉胞壁水溶性糖的分子量分布。结果表明:最佳提取工艺为溶壁酶加量2%,酶解时间5 h,料液比1︰10(g︰m L)、温度40℃、pH6.5,在此条件下提取的灵芝孢子粉胞壁水溶性糖含量达到17.86%。分子量分布分析结果表明,酶解后的水溶性糖以低聚糖为主。研究结果可为有效利用和开发灵芝孢子粉提供参考。

某品牌灵芝破壁孢子粉的安全性评价

目的研究某品牌灵芝破壁孢子粉的安全性。方法采用急性毒性试验、3项遗传毒性试验和30 d喂养试验评价灵芝破壁孢子粉的安全性。结果该品牌灵芝破壁孢子粉对小鼠急性经口MTD值>15000 mg/kg b.wt,属无毒级;3项遗传毒性试验均为阴性结果;30 d喂养期间,不同剂量的灵芝破壁孢子粉对大鼠的体重、食物利用率、主要脏体、血液学和血生化指标均产生显著影响(P值均<0.05);试验动物组织病理学均未见显著改变。结论试验条件下,该品牌灵芝破壁孢子粉的安全性良好。

灵芝孢子粉复合饮料的加工工艺研究

为丰富功能性饮料市场,以灵芝孢子粉为原料制备一款功能性饮料,以灵芝孢子粉浸提液添加量、山楂枸杞浸提液添加量、甘草浸提液添加量、木糖醇添加量为考查因素进行单因素试验,采取正交试验筛选出最优工艺。结果表明,灵芝孢子粉浸提液添加量为10%,山楂枸杞浸提液添加量为7.5%,甘草浸提液添加量为2.5%,木糖醇添加量为14%时,感官评分最高。此时产品呈浅褐色,有灵芝孢子粉特有的气味与口感,澄清透明,无杂质沉淀,酸甜协调。

基于多糖及熵权-TOPSIS的灵芝孢子粉药材质量评价

目的:基于多糖部位及熵权-逼近理想解排序法(TOPSIS)模型建立灵芝孢子粉药材综合定量评价模型,为灵芝孢子粉药材质量评价及优选最佳批次提供参考。方法:测定同产地不同批次灵芝孢子粉药材粗多糖的得率、糖组成、总糖含量、蛋白含量和糖醛酸含量,将数据进行无量纲化后采用熵权-TOPSIS法综合评价不同批次灵芝孢子粉质量并建立优选标准。结果:各批次灵芝孢子粉外观均符合2020年版《中华人民共和国药典》描述。多糖质控指标中,熵权法赋权结果显示提取得率占比权重系数最大为28.44%,其次为半乳糖含量18.82%、总糖含量13.84%、蛋白含量13.24%。TOPSIS排序结果及分组显示,当相对贴近度(C_(i))≥0.55时,灵芝孢子粉为优质药材;当0.45≤C_(i)<0.55时,灵芝孢子粉为中等品质药材;当C_(i)<0.45时,灵芝孢子粉为下等品质药材。结论:不同批次间灵芝孢子粉质量差异较大。基于多指标的熵权-TOPSIS法可实现对灵芝孢子粉药材快速、高效且准确地优选优质药材来源,在生产和质量全面评价中有广泛的应用前景,也可为其他中药材或饮片质量评价提供参考。

分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量研究

目的:优化分光光度法测定破壁灵芝孢子粉中总三萜含量的分析方法。方法:分别针对方法中提取液除杂方式、挥干方式及水浴反应条件等进行优化,并对优化后的方法线性、检出限、定量限、准确性、专属性及重复性等进行验证。结果:测试方法中挥干方式为沸水浴挥干、除杂方式为4000 r·min^(-1)离心10 min、水浴条件为60℃反应15 min;熊果酸标准溶液在20~160μg范围内线性良好,相关系数R2为0.9992,加标回收率在93.12%~97.73%,相对标准偏差低于0.64%,方法检出限为0.1203μg·mL^(-1),定量限为0.3610μg·mL^(-1)。结论:该方法操作简便,条件明确,具有良好的准确度和精密度,适用于破壁灵芝孢子粉中总三萜含量测定。

不同干燥方式对灵芝孢子粉中灵芝孢子油过氧化值的影响

目的:比较不同干燥方式对灵芝孢子粉中灵芝孢子油过氧化值的影响。方法:以西藏灵芝孢子粉为例,采用不同的干燥方式将灵芝孢子粉干燥至合格,然后进行破壁,用超临界CO_(2)萃取法提取灵芝孢子油,检测灵芝孢子油的过氧化值,并比较不同干燥方式对灵芝孢子油的过氧化值的影响。结果:微波干燥和真空干燥方式得到的灵芝孢子油过氧化值均合格,分别为0.13%,0.14%;热风干燥和晾晒干燥方式得到的灵芝孢子油过氧化值不合格,分别为0.16%、0.17%。结论:水分变化率可能是灵芝孢子粉干燥过程中的重要影响因素,微波干燥方式水分变化率远高于其他方式,干燥效率高,耗能少,且不影响孢子油过氧化值,适合干燥大规模样品;其它干燥方式相对比较费时耗能,且灵芝孢子粉存在变质的风险。

灵芝孢子粉提质扩能生产及质量控制研究

为了能够保证灵芝孢子粉产品产量和质量,通过灵芝孢子粉精深加工提质扩能的建设和生产破壁灵芝孢子粉的质量控制,利用质量检测体系对灵芝孢子粉的理化指标进行了3批次的随机抽检分析,结果发现:提质扩能建设改善了生产车间、空气净化系统、净化水处理设备、保鲜冷库、外部参观通道窗口硬件设施,提升了低温灵芝孢子破壁、胶囊填充、自动装粉技术,使灵芝孢子粉产品的生产流程规范化标准化,灵芝孢子粉产品的理化检测指标均符合《破壁灵芝孢子粉质量标准》。

丽产特色中药材及饮片中33种禁用农药残留分析

建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法和气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)法评价丽产特色中药材及饮片中33种禁用农药残留情况。用乙腈高速匀浆提取低温浓缩,并结合亲水亲油平衡材料固相萃取柱净化。结果表明,33种禁用农药线性良好,相关系数均大于0.990,加标回收率为75.7%~119.7%,RSD为2.6%~9.8%。160批丽产特色中药材及饮片中有8批检出禁用农药(检出率为5%),其中1批样品超出限度(不合格率为1%),禁用农药残留情况整体良好,需重点关注灵芝孢子粉中硫丹残留。

不同品种灵芝子实体及孢子粉元素成分分析及重金属安全性评价

针对我国鲁西地区主栽灵芝品种,利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定不同品种灵芝子实体、孢子粉及破壁孢子粉中元素及重金属含量,开展元素成分分析及重金属安全性评价。元素成分分析结果表明,藏芝和香血芝子实体中大部分元素含量明显高于赤芝、美芝和新大片子实体中元素含量,特别是Fe、Cu、Zn、Mn、Se、B、V、Co、Sr 9种人体必需微量元素,其中藏芝子实体中Fe元素含量达到234 mg/kg、Zn元素含量达到57.9 mg/kg、Se含量达到0.309 mg/kg,香血芝子实体样品Sr元素含量最高,达到3.60 mg/kg。赤芝粉和赤芝椴木粉元素营养质量高于美芝粉和新大片孢子粉元素营养质量,赤芝粉和赤芝椴木粉中硒含量分别是美芝粉中硒含量的3倍和2倍。重金属安全性分析结果表明5种灵芝子实体与4种孢子粉样品Pb、Hg 2种重金属含量远低于相关标准,安全性较高,藏芝及香血芝子实体、新大片孢子粉样品As元素含量较高,具有一定的安全性风险。破壁技术会造成孢子粉中As、Pb、Cd、Cr、Cu、Ni金属元素含量不同程度的提高,孢子粉破壁过程中重金属存在一定的安全风险。

适合孢子粉高产的赤灵芝栽培配方筛选

为充分利用湛江市本地甘蔗渣、桑屑枝条、土沉香渣等秸秆资源,降低赤灵芝生产对木材原料的依赖,通过研究3个配方菌丝生长速度、子实体和孢子粉产量、品质(多糖、三萜)、抗氧化活性等,筛选出适合本地的优良赤灵芝栽培配方。结果显示,添加了甘蔗渣的配方2,菌丝生长速度最快(0.75 cm·d^(-1)),孢子粉产量最高(14.45 g/袋),且多糖和三萜总含量也高于其他2个配方。添加土沉香渣的配方3,菌盖直径(7.55 cm)、子实体鲜质量(36.79 g/袋)、总产量最高,但多糖和三萜总含量不如其他2个配方。添加了桑屑的配方1,赤灵芝的总抗氧化活性稍高于其他2个配方,但无显著差异。3个配方下子实体的三萜含量高于孢子粉,而孢子粉的多糖含量高于子实体。综合分析,配方2是实现梅灵3号灵芝孢子粉高产的较优栽培配方,适合在当地推广应用。

大孔树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜

研究比较大孔树脂对灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的吸附特性,优选其对灵芝总三萜的分离纯化工艺条件。采用紫外分光光度法测定灵芝子实体和孢子粉两个不同部位中总三萜的含量,选择8种大孔树脂,以总三萜吸附率和解吸率为指标,筛选最佳树脂型号,并考察最佳树脂纯化灵芝子实体和孢子粉中总三萜的工艺参数。结果表明:8种大孔树脂中,HPD-500型大孔树脂对灵芝子实体总三萜的吸附解吸效果最好,最佳纯化工艺条件为上样液浓度1.0 g干样/mL,最大上样量2 BV,用8.5 BV的75%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝子实体总三萜纯度达60.59%;而AB-8型大孔树脂对灵芝孢子粉总三萜的吸附解吸效果最好,且最佳纯化工艺条件为上样液浓度0.4 g干样/mL,最大上样量3 BV,用8.5 BV的95%乙醇进行洗脱,该工艺下灵芝孢子粉总三萜纯度达65.48%。综上,HPD-500型和AB-8型大孔树脂分别富集纯化灵芝子实体和灵芝孢子粉中总三萜的工艺效果显著,简单可行,为灵芝三萜的深入探究和工业化纯化灵芝子实体和孢子粉总三萜提供理论依据。

灵芝孢子粉脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱构建及含量测定

以16批(S1~S16)不同来源的灵芝(Ganoderma lucidum)孢子粉为材料,构建灵芝孢子粉脂质成分高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)指纹图谱,将S1~S16的HPLC-ELSD指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版),指认共有峰和评价相似度,采用HPLC-ELSD测定S1~S16中亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇含量。结果表明:共指认4个共有峰,分别为亚油酸、棕榈酸、油酸和麦角甾醇;除S14外,其他15批灵芝孢子粉中脂质成分HPLC-ELSD指纹图谱相似度高,较为稳定;不同来源的灵芝孢子粉中亚油酸、棕榈酸和油酸的含量差异较大,麦角甾醇含量较为稳定。

灵芝破壁孢子粉中粗多糖含量测定的不确定度评估及控制

为明确用于食用菌粗多糖含量测定的苯酚-硫酸分光光度法中对结果可靠性的影响因素,根据标准NY∕T 1676—2008中的方法对一个灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖进行测定,分析该方法在测定过程中的不确定度来源,计算各分量的不确定度和合成不确定度,并对各分量不确定度对合成不确定度的贡献大小进行排名。结果表明:灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖含量为2.71%±0.09%(k=2),影响不确定度的主要来源是标准品溶液配制和稀释、标准曲线拟合、样品重复性。增加标准工作溶液的配制量可有效降低苯酚-硫酸分光光度法的不确定度,并能提高其可靠性。

响应面法提取优化破壁灵芝孢子粉多糖及其分级醇沉组分的抗氧化活性研究

目的:对破壁灵芝孢子粉多糖(BGP)的最佳提取工艺、各分级醇沉多糖组分的抗氧化性进行探究。方法:以破壁灵芝孢子粉为原料,采用内部沸腾法探究提取温度、提取时间、料液比对BGP得率的影响;利用响应面法分析优化BGP的提取参数。用不同浓度的乙醇醇沉多糖,通过测定其DPPH自由基以及羟自由基的清除力,测定其抗氧化性。结果:根据回归模型分析预测结果,最佳提取工艺参数为提取温度83℃、提取时间7 min、料液比1:21。在此条件下BGP的得率为9.10%。以不同浓度的乙醇分级醇沉BGP,得到5种醇沉BGP组分。乙醇浓度为90%时,所得BGP的得率最高。抗氧化实验表明各醇沉BGP都具有一定的抗氧化活性。90%-BGP的抗氧化性稍强于其他醇沉多糖,并且随着多糖浓度的增加,各醇沉多糖的抗氧化性均有一定的增加的趋势。结论:利用最佳提取参数提取,不同乙醇浓度醇沉的BGP均具有一定的抗氧化活性。

去壁灵芝孢子粉水溶成分抑制头颈鳞癌细胞增殖及转移

目的探讨去壁灵芝孢子粉水溶成分(A-GSP)在头颈鳞癌细胞中的生物学作用。方法利用MTS法检测A-GSP在头颈鳞癌细胞系SCC15和SCC25中的细胞活力。采用平板克隆、划痕愈合实验和穿室实验探究A-GSP对头颈鳞癌细胞增殖、转移能力的影响。通过流式分析试剂盒检测A-GSP对头颈鳞癌细胞凋亡能力和细胞周期分布的影响。免疫蛋白印迹法检测A-GSP处理后上皮间质转化(EMT)分子和细胞周期蛋白的表达变化。结果A-GSP作用后,头颈鳞癌细胞的增殖能力减弱(F=62.72,P<0.0001),转移能力下降(F=95.7,P<0.0001),细胞凋亡能力增加(F=87.65,P<0.0001),G2/M期停滞(F=15.31,P<0.01)。此外,A-GSP处理导致上皮细胞标志物E-cadherin上调,间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin、Snail、Slug下调,细胞周期激酶CDK1下调,P21和P27上调,但是,并未引起凋亡通路蛋白Caspase和Bax水平改变。结论A-GSP通过诱导细胞周期G2/M期停滞和抑制EMT从而抑制头颈鳞癌细胞的增殖转移。

武夷山赤芝GL8栽培子实体鉴定及其孢子粉成分检测

通过形态鉴定及ITS序列比对证实武夷山GL8栽培子实体为赤芝正品,在其ITS2区域中发现单碱基突变和插入位点。扫描电镜观察到原木栽培采收得到的GL8孢子粉纯度高,呈完整而饱满的椭圆形,而在破壁样品中可见其孢壁结构均已崩裂、破损。检测结果表明,破壁孢子粉中17种氨基酸总量可达13.04 g·100^(-1)·g^(-1),其中甲硫氨酸含量占比高达56.21%~57.64%;其粗脂肪含量高达32.1~32.4 g·100^(-1)·g^(-1),主要成分为以不饱和脂肪酸为主,包括油酸(C18∶1,61.4%)、亚油酸(C18∶2,13.3%)、棕榈酸(C16∶0,14.6%)和硬脂酸(C18∶0,4.2%)。通过临界CO_(2)流体萃取、采用气相色谱-质谱联用和高效液色谱分析,可以进一步确定孢子油中脂肪酸组分及是否存在齐墩果酸、熊果酸。

微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定灵芝孢子粉中铅元素含量的方法验证

依据《食品安全国家标准食品中铅的测定》(GB 5009.12—2017),对微波消解-石墨炉原子吸收分光光度法测定灵芝孢子粉中铅元素含量方法的线性关系、检出限定量限、精密度准确度进行分析。结果表明,铅浓度和吸光度的线性关系为y=0.0049x-0.0011,相关系数为0.9994,方法检出限为0.0108 mg·kg^(-1),方法定量限为0.0360 mg·kg^(-1),精密度与准确度均符合标准要求,证明了该方法在保健食品灵芝孢子粉检测中的适用性。