沙门菌属质粒毒力基因spv的研究

沙门菌属质粒携带的spv基因是一段约8kb的高度保守的核苷酸区域,普遍存在于许多非伤寒沙门菌的一个毒力质粒上,其开放读码框由spv R、A、B、C、D、E6个基因组成,主要与细菌的毒力有关,如血清抗性、粘附与定居、沙门菌在肠外组织细胞的生长、细菌在巨噬细胞内存活和生长等。以往的研究认为,spv基因只存在于非伤寒沙门菌中,但最近发现在伤寒沙门菌耐药质粒上亦有spv。

spvB/spvC基因对沙门菌毒力及宿主免疫功能的影响

目的研究spv B/spv C基因对沙门菌毒力及对宿主免疫系统的影响。方法野生型沙门菌(STM.211)、敲除spv B基因的沙门菌(STM.211-Δspv B)、敲除spv C基因的沙门菌(STM.211-Δspv C)、敲除spv B及spv C基因的沙门菌(STM.211-Δspv B.spv C)和PBS组分别经腹腔注射0.2 m L105CFU的STM.211、STM.211-Δspv B、STM.211-Δspv C、STM.211-Δspv B.spv C感染BALB/c小鼠,观察小鼠精神状态、运动情况、腹泻、体质量、毛发改变等感染中毒症状,用ELISA法测定小鼠血清IL-10、IL-12、IFN-γ水平;并分离小鼠肝、脾,观察靶器官大体观及显微镜下的病理改变。结果(1)STM.211、STM.211-Δspv B和STM.211-Δspv C组的中毒症状明显较PBS组严重,STM.211-Δspv B.spv C组与PBS组间无明显差异;(2)STM.211组、STM.211-Δspv B组、STM.211-Δspv C组的IFN-γ和IL-12分泌量均显著低于STM.211-Δspv B.spv C组(P<0.05),而IL-10的分泌量明显高于STM.211-Δspv B.spv C组(P<0.05);STM.211组、STM.211-Δspv B组、STM.211-Δspv C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)spv B/spv C基因缺失对沙门菌毒力影响不明显,但spv B.spv C基因共同缺失,使沙门菌毒力减弱;(2)spv B/spv C基因相对抑制TH1细胞因子IFN-γ和IL-12的分泌,促进TH2细胞因子IL-10的分泌,使免疫应答向TH2方向偏移,从而有利于病原菌抵抗和逃避宿主的免疫防御,加重感染结局。

伤寒沙门菌耐药质粒pR_(ST98) spv毒力基因的研究

目的 研究多重耐药伤寒沙门菌耐药质粒pRST98是否具有沙门菌属中其他致病菌毒力质粒上的高度保守基因——spv,并对扩增的spv基因进行克隆及核酸序列测定。方法 对已确定能增强细菌毒力表型的耐药质粒pRST98,用spv基因特异引物进行PCR扩增和SPV探针的Southerblot分析,并将扩增到的spv基因片段装入克隆载体pGEM TEASY进行测序。结果 PCR和Southernblot结果显示,伤寒沙门菌耐药质粒pRST98上亦存在spv基因的同源序列spvR和spvB,其ORF分别为894bp和1 776bp,与鼠伤寒沙门菌毒力质粒上spv基因的同源性超过99%。结论 本研究从核酸水平首次证实伤寒沙门菌耐药质粒pRST98具有多效性,是既编码细菌抗药性又编码细菌毒力的“嵌合型”质粒。

伤寒沙门菌质粒pR_(ST98)与树突状细胞在免疫反应中关系的研究

研究伤寒沙门菌质粒pRST98在沙门菌致病中的作用机制。将伤寒沙门菌质粒pRST98导入鼠伤寒沙门菌低毒株RIA形成接合子pRST98/RIA,经腹腔感染小鼠,检测脾脏DC的数量及其表面分子CD80和CD86的表达,比较细菌刺激DC成熟的能力;将接合子的热灭活抗原与其致敏的DC共培养,检测IFN-γ和IL-10水平,评价spv活化DC分泌细胞因子的能力;将接合子致敏的DC分别与初始型CD4+和CD8+T细胞进行混合淋巴细胞反应,检测DC刺激初始型T细胞活化增殖的能力。实验结果表明,pRST98/RIA接合子感染组小鼠脾脏DC的数量及其表面分子的表达均高于对照组(P<0.05),DC分泌的细胞因子水平与对照组无显著性差异(P>0.05),但其刺激初始型T细胞增殖的能力则明显增强(P<0.05)。说明携带pRST98质粒的沙门菌感染能增强DC介导的特异性免疫应答。