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题名鼠伤寒沙门菌spvBC基因编辑株的构建
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作者
左玲莉
周丽婷
吴兴旗
吴超逸
吴淑燕
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机构
苏州大学医学部基础医学与生物科学学院
苏州高新区人民医院医学研究中心
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期253-260,共8页
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基金
国家自然科学基金面上项目(81671976,31970132)。
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文摘
利用λRed重组系统和pBAD原核表达载体构建鼠伤寒沙门菌spvBC质粒毒力基因修饰菌株,为深入探究沙门菌毒力基因spv的功能和致病机制及宿主抗感染免疫提供工具菌。以pKD4为模板,PCR扩增含spvBC同源臂的卡那霉素抗性基因以构建同源打靶片段,再将其电转入含有质粒pKD46的鼠伤寒沙门菌中进行同源重组,随后将质粒pCP20电转导入阳性转化子,消除卡那霉素抗性基因,PCR鉴定敲除株的构建。PCR扩增含酶切位点的spvBC基因片段,扩增产物与原核表达载体pBAD/gⅢ分别双酶切后连接构建pBAD-spvBC重组质粒,PCR筛选阳性菌落并测序鉴定。将构建成功的pBAD-spvBC重组质粒电转导入spvBC敲除株中,Western blot测定不同浓度L-阿拉伯糖诱导SpvB和SpvC蛋白表达情况。PCR结果表明鼠伤寒沙门菌spvBC基因敲除成功;PCR及测序结果表明pBAD-spvBC重组质粒构建成功,Western blot结果表明13 mmol/L L-阿拉伯糖可诱导SpvB和SpvC蛋白正常表达。λRed重组系统可用于沙门菌质粒上大片段基因的敲除,pBAD原核表达载体可用于沙门菌质粒上大片段基因的回补,丰富了细菌质粒的基因修饰和编辑策略。
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关键词
鼠伤寒沙门菌
spvbc基因
λRed重组系统
基因编辑
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Keywords
Salmonella typhimurium
spvbc gene
λRed recombination system
gene editing
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
Q93
[生物学—微生物学]
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