spy1的DNA改组提高普那霉素的产量

目的研究普那霉素产生菌株选育的分子育种方法,提高普那霉素的产量。方法对来自6种始旋链霉菌基因组重排菌株的spy1调控基因,进行DNA改组研究,然后筛选阳性接合子进行发酵,HPLC法测定普那霉素两组分的产量变化。结果建立了普那霉素生物合成调控基因spy1的改组基因库,筛选出71个spy1改组接合子。接合子的普那霉素I产量都有了不同程度的提高,最高产量为出发菌株7.5倍,达60mg/L;普那霉素II产量则没有显著变化。结论利用DNA改组技术进行调控基因的分子进化可以有效提高抗生素的产量,为普那霉素分子育种研究中的首次尝试。

家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因表达及其与茧层率的相关性研究

为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpins)基因Spi1、Spi2与家蚕雌雄丝物质合成差异的关系,应用RT-PCR、实时定量PCR以及Western blot等方法,比较了6个家蚕品种幼虫丝腺中丝氨酸蛋白酶抑制剂基因mRNA和蛋白水平的表达情况,并测定茧层率。结果显示,Spi1基因在家蚕幼虫5龄中后期开始表达,其中在中部丝腺(MSG)和后部丝腺(PSG)中的表达量都比较高,Spi1基因在雄蚕的丝腺及中肠中持续表达时间均比雌蚕长,Spi2在MSG以及头部和体壁有表达;Western blot检测显示,SPI1蛋白在雄性中从4龄眠期就有表达,而雌性只在5龄末期有表达;Spi1基因在雄性丝腺中表达和蛋白质翻译的持续时间均比雌性长;品种之间,菁松雌雄茧层率均较高,与分子水平上其幼虫丝腺中Spi1基因表达量较高、SPI1蛋白的表达显著高于其他品种相一致。表明家蚕丝物质合成效率与Spi基因在mRNA和蛋白水平上的表达量有关。

亚抑菌浓度山奈酚对鼠伤寒沙门氏菌侵袭鸡肠道上皮细胞的抑制作用研究

为研究亚抑菌浓度山奈酚对鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)侵袭鸡肠道上皮细胞的作用,本研究首先通过二倍稀释法确定山奈酚的最小抑菌浓度(MIC)及其亚抑菌浓度,然后利用亚抑菌浓度山奈酚处理S.typhimurium后检测其SPI-1毒力基因表达水平及其对鸡肠道上皮细胞的侵袭变化规律和对雏鸡的致病性。结果显示,山奈酚对S.typhimurium CVCC542和SL1344株的MIC均>200μg/m L。亚抑菌浓度山奈酚能显著抑制S.typhimurium SPI-1毒力基因sip A、sop B、sop E2、hil A、hil C和hil D的基因表达,并显著降低S.typhimurium对鸡肠道上皮细胞侵袭数目,抑制S.typhimurium诱导鸡肠道上皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性升高和F-actin骨架重排,并延长雏鸡存活时间。上述结果表明,亚抑菌浓度山奈酚能够抑制S.typhimurium侵袭鸡肠道上皮细胞,并降低其对雏鸡的致病性,为山奈酚应用于防治S.typhimurium感染提供了实验依据。