Sqt-1的5'端侧翼序列在旋毛虫rol6基因中的启动功能验证

为验证秀丽隐杆线虫(C.elegans)sqt-1的5'端侧翼序列(5'-FSsqt-1)是否具有启动旋毛虫(T.spiralis)基因表达的功能,本研究采用PCR方法从C.elegans全基因组DNA中扩增5'-FSsqt-1,并将其克隆至以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的C.elegans启动子验证载体p PD95.77中,构建重组质粒p PD-sqt-GFP。将T.spiralis表皮胶原蛋白rol6编码序列克隆至5'-FSsqt-1下游,构建重组质粒p PD-sqt-rol6-GFP。通过显微注射法将p PD-sqt-GFP和p PD-sqt-rol6-GFP分别转入C.elegans体内,进行荧光观察及western blot鉴定。结果显示,T.spiralis表皮胶原蛋白Rol6能够在C.elegans体内获得表达。研究表明,5'-FSsqt-1具有启动T.spiralis基因表达的功能,为T.spiralis基因在C.elegans体内表达奠定了基础。

恶性疟原虫GBP130基因5′近端侧翼序列调控功能的研究(英文)

目的 对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。 方法 构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提物 ,检测报告分子CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的强度调控功能。另将 pGBPΔ2 /4 0 0和pGBPΔ2 /80 0分别同时转染疟原虫 ,分别于转染后 5h、15h和 46h收集虫体 ,制备细胞抽提物 ,检测CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的期特异性调控功能。 结果 强度分析中 ,当从转录起始点下游删除较小的片段 ( pGBPΔ2 /80 0 ) ,CAT表达水平与pGBPCATΔ 2中CAT水平无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,当删除近端较大片段 ( pGBPΔ2 /4 0 0 )时 ,CAT表达水平明显下降 (P <0 .0 5 )。同时 pGBPΔ2 /4 0 0的转录活性与对照组也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;期特异性分析 ,pGBPΔ2 /4 0 0与pGBPΔ2 /80 0相比 ,在 5h时前者转录活性高于后者 ,但在 15h和 46h时 ,后者转录活性高于前者 ,提示 2种质粒在疟原虫不同生活阶段具有期特异性调控。 结论 推测不同GBP130启动子活性强度的差异是因为 5′UTR长度的不同 ,较长的UTR可促进基因的转录表达 ,可能GBP130基因近端侧翼序列中 2个同聚

新生儿基因CYP2E15′端RsaⅠ和PON2311位点多态性与早产的关系

探讨新生儿基因细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1) 5′端RsaⅠ多态性和对氧磷酶 2 (二乙基对硝基苯磷酸酯酶 2 )基因 311位点 (PON2 311)多态性对早产的影响。采用横断面调查方法 ,使用统一的调查表 ,由安庆市各县医院对入院分娩孕妇及其单胎、活产、早产和对照新生儿进行调查 ,共得到有效样本 194个母亲 -新生儿对。单因素分析结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型 (cut/cut)与突变纯合子基因型 (uncut/uncut) /杂合子基因型 (cut/uncut)比较 ,对早产的影响不具有统计学意义。而PON2Ser311Ser纯合子基因型与Cys311Cys纯合子基因型 /Cys311Ser杂合子基因型比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。进一步分析CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性是否存在交互作用 ,结果显示 :CYP2E1野生纯合子基因型和PON2Ser311Ser纯合子基因型这一组合与参照组比较 ,对早产的影响具有显著的统计学意义。基因CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性与新生儿早产不相关 ,但基因PON2 311位点多态性与新生儿早产相关 ,且CYP2E15′端RsaⅠ位点多态性和PON2 311位点多态性之间对早产的影响存在交互作用。

猪速激肽3基因启动子活性及其表达调控的初步研究

为了确定猪速激肽3基因（tachykinin3,TAC3）核心启动子区域,探索作用于该区域的转录因子对TAC3的调控作用,以猪耳组织DNA为模板,PCR扩增TAC3基因5＇端不同长度缺失片段,并构建至p GL3-basic载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过双荧光素酶活性分析确定核心启动子区域,染色质免疫共沉淀技术（Ch IP）验证转录因子与基因启动子区的作用,构建转录因子超表达载体和小干扰RNA（siRNA）转染至猪卵巢颗粒细胞,qRT-PCR检测TAC3基因mRNA表达变化。结果显示：成功构建了TAC3基因5＇端不同长度缺失片段,通过双荧光素酶报告系统分析发现,-1 310/-544区域为TAC3基因的核心启动子区,-2 486/-1 633区域可能存在负向调控元件,-1 310/-544区域可能存在正向调控元件。Ch IP检测发现转录因子C/EBPβ和YY1分别结合在TAC3基因的-653/-639和-873/-856区域;超表达C/EBPβ和YY1后,TAC3基因启动子活性显著升高（P〈0.05）、mRNA表达水平显著上调（P〈0.01）;干扰C/EBPβ后,TAC3基因mRNA表达水平显著下调（P〈0.01）;干扰YY1后,TAC3基因启动子活性显著降低（P〈0.05）。结果表明：转录因子C/EBPβ、YY1结合在TAC3基因的核心启动子区域,促进TAC3基因的转录活性。