LPS和TNF-α对血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的:研究细菌脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)对牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C Kinase Substrate,SSeCKS)表达的影响和对细胞骨架结构的影响,探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法:应用LPS、TNF-α刺激体外培养的BPAEC,应用原位杂交、免疫印迹方法检测不同刺激条件下BPAEC中SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞荧光法观察LPS、TNF-α对内皮细胞中SSeCKS与纤维状肌动蛋白(F-actin)定位和结构的影响。结果:静息状态的BPAEC表达极少量的SSeCKS;经LPS刺激后,SSeCKS表达没有明显变化;而TNF-α以浓度和时间依赖的方式诱导内皮细胞SSeCKS表达增加;LPS和TNF-α刺激后,F-actin发生重构,且SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足聚集;蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220抑制LPS和TNF-α对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论:TNF-α能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加,PKC参与LPS、TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布,提示SSeCKS可能与LPS和TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构有关。

Src抑制的蛋白激酶C底物在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的表达及其意义

目的研究Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)进程中的表达情况,探讨其在EAE病理过程中可能的功能及意义,为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)和EAE提供新的治疗靶点。方法构建EAE大鼠模型,进行临床打分评估;用HE染色检测EAE大鼠脊髓组织的炎性浸润情况;用western blot检测SSeCKS的表达变化;用免疫组织化学观察SSeCKS在脊髓组织中的分布。结果髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)诱导单相的EAE过程:Lewis大鼠经MBP免疫后7～10d开始有临床症状,13～16d达到发病高峰,之后自发地恢复,至30d左右恢复到病前水平;EAE病程高峰期,大鼠脊髓炎性浸润情况显著;SSeCKS蛋白表达在EAE起始E1期显著增加,E3期达到高峰,之后开始下降,恢复期基本恢复到正常水平。结论本实验成功构建了Lewis大鼠的EAE模型;EAE病理过程中,SSeCKS蛋白表达水平发生变化,提示SSeCKS可能参与了EAE过程。

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。

TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0h、0.5h、1.5h、3h、6h、12h;后组分别以0U/ml、200U/ml、1000U/ml、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。运用RT-PCR法分析SSeCKSmRNA的表达变化。结果TNF-α可以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKSmRNA的表达。结论SSeCKS可能参与了TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤过程。

Src抑制的蛋白激酶C的底物在脑组织中的表达

目的:探讨大鼠发育过程中,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及意义。方法:通过Western blot,免疫组织化学法检测SSeCKS在脑组织中表达的时空变化及细胞定位。结果:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在明显的表达变化,在胎鼠和生后早期的SD大鼠中表达水平较高,尤以生后1周明显,成年以后显著降低,4周时最低。脑分区检测显示端脑、海马和间脑符合全脑检测结果。DAB显色示SSeCKS在脑组织中呈点状散在分布,免疫荧光双标记示SSeCKS与星形胶质细胞有部分共定位,与神经元无明显共定位。结论:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在时空变化,并且主要定位于星形胶质细胞。提示SSeCKS可能通过参与细胞骨架的调节和信号通路的活化影响大鼠胚胎发育过程中星形胶质细胞指导的神经元的迁移和轴突的生长。

卡巴胆碱对失血性休克大鼠肺微血管内皮细胞功能的影响

目的 观察大鼠失血性休克时卡巴胆碱对肺微血管内皮细胞的作用。方法 将30只健康雄性SD大鼠(SPF级)按每组10只随机分为假休克组(SS组)、失血性休克组(HS组)、失血性休克+卡巴胆碱组(CBL组)。失血性休克动物模型按照Wiggers改良法制作,各组模型制备完毕后6 h,经右侧股动脉采血,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取右肺下叶肺组织检测Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)、E-选择素蛋白质水平,取右肺下叶行透射电镜检查肺微血管内皮细胞超微结构。结果 SS组表达少量的TNF-α、SSeCKS、E-选择素,HS组和CBL组表达升高(P<0.05),与HS组相比,CBL组表达降低(P<0.05)。SS组肺微血管内皮细胞细胞膜表面光滑,细胞膜、细胞质、细胞核形态结构正常;HS组肺微血管内皮细胞出现细胞水肿、坏死和凋亡表现(细胞膜表面皱折、细胞膜表面凹凸不平、细胞器水肿、异染色质染色加深边集等);CBL组较SS组,细胞有所损伤,但好于HS组。结论 大鼠失血性休克时卡巴胆碱对肺微血管内皮细胞具有保护作用,也可通过抑制炎症细胞合成和释放炎症介质减轻对血管内皮细胞的损伤。

SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺损伤中的表达

目的观察新生大鼠高氧肺损伤模型肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达及细胞定位。方法64只新生大鼠按照随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露组,分别建立动物模型,于12、24、48、72h处死动物,进行肺组织的病理学检查及肺湿干质量比(W/D)检测,应用Western blot及免疫组化法检测各组各时相点肺组织中SSeCKS蛋白的表达,用间接免疫荧光双标法明确SSeCKS蛋白在肺组织中的定位。结果病理HE染色:高氧暴露24h肺泡内出现少量红细胞,肺泡壁增厚;48h肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁;72h出现肺出血,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔粒细胞浸润。Western blot法检测SSeCKS蛋白:空气对照组可检测到极少量的SSeCKS的表达,高氧暴露24h表达增加,72h达到最高,72h内随高氧暴露时间延长而增加;免疫组化定量分析与Western blot结果一致;间接免疫荧光双标法明确SSeCKS定位于毛细血管内皮细胞。结论提示SSeCKS参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程。

Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达及意义

目的 :探讨Src家族相关激酶(Hck、Lyn)和Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSe CKS)在Kupffer细胞中的表达及意义。方法:应用Real-time PCR的方法检测正常Kupffer细胞和炎症Kupffer细胞中Hck、Lyn和SSe CKS的表达水平;用Western Blot的方法检测Hck、Lyn和SSe CKS在Kupffer细胞中的表达水平。构建非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠模型,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测Hck、Lyn和SSe CKS在大鼠肝脏组织Kupffer细胞中的表达水平。结果:RT-PCR显示Hck、Lyn和SSe CKS在小鼠Kupffer细胞中均有表达,用60%CCl4损伤液刺激后Hck、Lyn表达明显升高(P<0.01),SSe CKS表达减少,但差异无统计学意义(P>0.05);Western Blot结果显示在Kupffer细胞中Hck、SSe CKS表达较为明显,Lyn未见明显表达;IHC结果显示Hck、Lyn和SSe CKS在大鼠正常肝组织Kupffer中均有表达;在炎症组织中Hck、Lyn的表达明显增加,而SSe CKS的表达却显著减少。在炎症刺激后Hck、Lyn的表达与Kupffer细胞数呈正相关,而SSe CKS的表达与Kupffer细胞数呈负相关。结论:Hck、Lyn和SSe CKS参与了NASH的发生发展,可作为NASH炎症反应的潜在调控靶点;检测其表达有助于NASH炎症程度的判断,为临床上治疗NASH提供一定的客观依据。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏SSeCKS的表达

目的:探讨Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)在大鼠非酒精性脂肪性肝(NAFL)形成中的作用。方法:SD大鼠16只,随机分为正常对照组(正常组)和高脂饮食组(高脂组)。高脂饲料喂养14周后,观察肝脏组织病理改变;检测大鼠血脂及肝功能;免疫组化和westernblot方法研究大鼠脂肪肝形成中SSeCKS表达变化。结果:高脂组大鼠肝脏指数显著高于正常组(P均<0.01)。高脂组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)及丙氨酸转氨酶(ALT)均显著高于正常组(P均<0.01)。肝组织SSeCKS蛋白表达亦明显增强。结论:非酒精性脂肪肝大鼠肝组织SSeCKS表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关。

SSeCKS对牛肺动脉内皮细胞黏附和迁移的影响

目的:研究SSeCKS在细胞外基质成份诱导内皮细胞黏附和迁移中的作用。方法:用纤黏连蛋白(FN)诱导内皮细胞,以Western blotting分析SSeCKS表达量的变化;用Ro31-8220、calphostin C(蛋白激酶C抑制剂)预处理内皮细胞,观察对细胞黏附和迁移的影响,以共聚焦显微镜观察其对SSeCKS、F-actin和vinculin在细胞定位的影响。结果:FN能够显著诱导内皮细胞黏附和迁移,SSeCKS的表达量也随之增加,具有时间和剂量依赖性;经Ro31-8220、calphostin C处理细胞后,SSeCKS表达量明显减少,细胞黏附率和迁移细胞数也较处理前显著减少,SSeCKS由细胞质散在分布向核周聚集,且SSeCKS与F-actin、vinculin在细胞边缘共定位比处理前减少。结论:SSeCKS参与细胞外基质诱导内皮细胞黏附和迁移的过程,由其介导的PKC信号转导促进了这一过程,蛋白激酶C抑制剂可有效抑制此过程。

AngⅡ诱导的肾损伤大鼠肾脏组织中SSeCKS的表达研究

目的建立由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾损伤大鼠模型,观察受损肾脏组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达情况。方法 26只Wistar大鼠随机分为模型组(n=10)、假手术组(n=10)和正常对照组(n=6)。模型组和假手术组大鼠经皮下埋置药物缓释泵分别向体内灌注AngⅡ和等量生理盐水,释放速度均为200 ng/(kg.min);正常对照组大鼠不予任何处理。各组大鼠均于埋泵后第3天收集24 h尿样后处死,留取肾皮质组织。采用磺基水杨酸法进行24 h尿蛋白定量检测;透射电子显微镜观察大鼠肾脏组织超微结构变化;免疫荧光染色法观察和分析SSeCKS在大鼠肾脏组织中的表达部位及荧光强度;采用RT-PCR技术检测各组大鼠肾脏组织中SSeCKS mRNA的表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白定量明显高于假手术组和正常对照组(P<0.05)。透射电子显微镜观察发现模型组大鼠肾小球内皮细胞皱缩、剥脱。免疫荧光染色分析结果显示:SSeCKS表达主要定位于肾小球基膜和部分系膜细胞区,模型组大鼠肾脏组织荧光强度显著高于假手术组和正常对照组。模型组大鼠肾脏组织中SSeCKS mRNA表达明显高于假手术组和正常对照组。结论通过皮下埋置AngⅡ药物缓释泵成功制作大鼠肾损伤模型,受损肾脏组织中SSeCKS的表达明显上调。

内毒素致伤大鼠肝组织SSeCKS mRNA水平的研究

目的观察内毒素/脂多糖(LPS)致伤大鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKs)mRNA的表达变化。方法SD大鼠腹腔注射LPS建立肝损伤模型,依据注射时相和剂量不同随机分组。用Real-timePCR法检测肝组织SSeCKSmRNA水平的表达情况。结果不同剂量LPS注入腹腔后8小时均可引起肝脏SSeCKS的表达变化,且呈现一定的剂量依赖关系。5mg/kgLPS腹腔注射后肝脏SSeCKSmRNA水平的表达量达到最高,此后虽然增加LPS剂量但也不能诱导SSeCKSmRNA水平表达量的增加;5mg/kgLPS腹腔注射后肝脏SSeCKS的表达变化呈现时间依赖关系,LPS注射后1小时肝脏SSeCKSmRNA水平表达增高,12小时达到最高水平,此后SSeCKS一直维持高水平。结论LPS引起肝脏SSeCKSmRNA表达呈时间和剂量依赖性变化,提示SSeCKS与LPS所致肝损伤相关。

SSeCKs与川崎病冠状动脉损伤关系的研究

目的 :观察幼兔川崎病模型中Src抑制的蛋白激酶C的底物(Src suppressed C kinase substrates, SSeCKs)的含量变化。方法:建立川崎病新西兰幼兔模型,运用热源仪测定其注射药物后的直肠温度;实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)测定外周血单个核细胞SSeCKs mRNA的表达;免疫组化法测定冠状动脉切片SSeCKs的表达。结果:注射牛血清白蛋白后连续0.5 h检测体温,实验组幼兔体温有升高趋势,正常组无变化。连续5 d同一时间点检测体温差异无统计学意义。免疫组化结果显示,正常组、急性期组和恢复期组的SSeCKs阳性表达率分别为(5.85±1.01)%、(24.88±0.25)%和(8.20±0.54)%。急性期组高于正常组和恢复期组(P<0.05),恢复组略高于正常组(P<0.05)。正常组、急性期组和恢复期组外周血单个核细胞SSeCKs mRNA水平分别为1.00±0.15、6.59±0.34和2.39±0.30,急性期组明显高于正常组和恢复期组(P<0.05),恢复期组高于正常组(P<0.05)。结论:SSeCKs可能与川崎病冠状动脉损伤有关。

src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α

目的探讨8re抑制的蛋白激酶c底物（SSeCKS）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）分泌肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法体外培养Wistar大鼠PMVEC，按随机数字表法分组（n=4），10mg／LLPS刺激1h、3h、6h、12h、24h或0．1mg／L、1mg／L、10mg／LLPS刺激24h；蛋白激酶C抑制剂（BIM）预处理0．5h或50nmol／LSSeCKS-siRNA转染PMVEC48h后再加入10mg／LLPS孵育24h，酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α 量（ng／L）。采用SPSSl0．0软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果0．1、1、10mg／LLPS刺激PMVEC24h后的，TNF-α分泌量分别为（253．70±23．55）、（327．88±37．25）、（403．204-36．22）ng／L，均高于未刺激组（82．28±22．56）ng／L（均P=0．000）；10mg／LLPS刺激PMVEC后，TNF-α分泌量于1h升高（170．11±49．22）ng／L，6h达峰值（404．82±13．78）ng／L，刺激24h后仍维持高水平（395．67±36．23）ng／L，分别与未刺激组（84．60±23．61）ng／L比较：P=0．001，0．000，0．000；BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激，TNF-α分泌量（200．44±27．39）ng／L较LPS单独刺激（402．28±31．07）ng／L显著较少（P=0．000）；与LPS单独刺激比较（407．28±32．64）ng／L，SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后，LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应（195．20±13．28）ng／L也显著下降（P=0．000）。结论下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应，从而减轻PMVEC的炎症反应。

血小板活化因子诱导大鼠肺微血管内皮细胞Src抑制的蛋白激酶C底物基因表达

目的研究血小板活化因子（PAF）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKs）mRNA表达的影响及其信号转导途径。方法体外培养RPMVEC，采用细胞原位杂交技术检测不同刺激条件下RPMVEC中SSeCKsmRNA的表达变化。结果正常RPMVEC中有少量SSeCKSmRNA表达，为棕黄色细颗粒状杂交信号，分布于胞质；用10^-10、10^-9、10^-8、10^-7mol／L的PAF分别孵育RPMVEc1．5h，SSeCKSinRNA表达随其浓度增加而升高（分别为0．0549±0．0007、0．0599±0．0018、0．0690±0．0018、0．0754±0．0019），与正常对照组（O．0368±0．0037）比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）；10^-7mol／LPAF刺激RPMVEC0．5、1．5、3、6、12、24h，SSeCKS mRNA表达水平于0．5h即显著升高（0．0710±0．0015），1．5h达峰值（0．0756±0．0017），之后逐渐下降，24h时（0．0439±0．0010）仍高于正常对照组（0．0382±0．0041，均P〈0．05）；10／lmol／L核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二巯基氨甲酸（PDTc）预处理RPMVEC1h可显著下调PAF对SSeCKSmRNA的诱导效应（0．0497±0．0032比0．0719±0．0019，P〈0．05），而蛋白激酶C（PKC）抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺（BIM）预处理RPMVEC0．5h则不影响此效应（0．0697±0．0021比0．0719±0．0019，P〉0．05）。结论PAF呈浓度和时间依赖的方式上调RPMVEC中SSeCKS基因转录；NF-κB信号通路而非PKC参与了PAF的诱导效应。

高脂血症大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物表达的变化

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物(SSeCKS)的表达变化,探讨高脂血症对SSeCKS表达的影响。方法高脂饮食组(n=8)和正常饮食组(n=8)SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测血清总胆固醇及甘油三酯;用HE染色观察心脏病理学改变;用免疫组织化学法检测SSeCKS在心脏的表达;用免疫荧光双标法观察SSeCKS在心脏中的细胞定位。结果高脂饮食组总胆固醇和甘油三酯较正常饮食组明显升高(P<0.05);病理学观察发现高脂饮食组形成高脂性心脏病变;免疫组织化学检测发现高脂饮食组中SSeCKS表达主要分布在心内膜、心间质;免疫荧光双标发现SSeCKS与心脏组织内皮细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞部分共定位。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏SSeCKS表达升高,SSeCKS可能参与了心脏结构重塑及细胞凋亡,从而促进动脉粥样硬化心脏病的发展。

TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS表达的影响及甲强龙的干预作用

目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)表达的影响及甲基强的松龙(甲强龙)对TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤和SSeCKS表达的干预作用,探讨SSeCKS是否具有调控PMVEC单层通透性的作用。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的大鼠PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0.5、1.5、3、6、12h;后组分别以200、1000、5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用3h。药物干预:分别以5000U/ml的TNF-α和0.2mg/ml的甲强龙+5000U/ml的TNF-α与PMVEC作用1.5h。以正常PMVECSSeCKS的表达作为对照,运用RT-PCR法及Western-blot法检测SSeCKSmRNA及蛋白的表达变化。用针头式滤器检测TNF-α(5000U/ml)组及甲强龙(0.2mg/ml)+TNF-α(5000U/ml)组作用1.5h后大鼠PMVEC单层通透系数(Kf),以正常PMVEC单层通透性作对照。结果正常情况下大鼠PMVEC呈低表达SSeCKS。5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达自0.5h开始增高,3h达到高峰,随后渐行性下降但维持较高表达水平至12h,以上各时间点mRNA及蛋白的表达均明显高于正常对照组。200、1000、5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKSmRNA及蛋白的表达依次递增,均明显高于正常对照组。甲强龙+TNF-α组SSeCKS的蛋白表达明显低于TNF-α组,而甲强龙+TNF-α组PMVEC单层通透系数(Kf)也明显低于TNF-α组。结论 TNF-α以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表达。甲强龙在抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平。提示SSeCKS参与TNF-α诱导大鼠PMVEC单层通透性损伤,可能具有调控PMVEC单层通透性的作用。

高体积分数氧致新生大鼠肺组织毛细血管内皮细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达及亚细胞定位变化

目的观察高体积分数氧(高氧)暴露时新生大鼠肺组织毛细血管内皮细胞中Src抑制的蛋白激酶C(PKC)的底物(SSeCKS)的表达及亚细胞定位的变化。方法出生12 h内大鼠128只按照随机数字表法分为4组:空气对照组、高氧暴露组、高氧暴露加蛋白激酶C抑制剂(R031-8220)组、高氧暴露加9 g/L盐水组。空气对照组置于空气中,余3组均置于常压高氧仓中,氧体积分数>950 mL/L,高氧暴露加R031-8220组自高氧暴露第1天起,腹腔注射5×10-2g/(kg.d)R031-8220,连续72 h;高氧暴露加9 g/L盐水组自高氧暴露第1天起,腹腔注射9 g/L盐水0.2 mL/(kg.d),连续72 h。于高氧暴露12、24、48和72 h时相点处死动物,在高氧暴露72 h行肺组织的病理学检查及肺湿/干质量比值(W/D)检测,应用免疫荧光双标法观察肺组织毛细血管内皮细胞SSeCKS的表达并通过IPP6.0软件对结果进行分析。采用SPSS13.0统计软件分析数据。结果高氧暴露组72 h时相点新生大鼠肺泡内可见大量红细胞,肺泡间隔增宽,粒细胞浸润;高氧暴露加R031-8220组新生大鼠肺组织病理改变较高氧暴露组明显减轻。与空气对照组比较,高氧暴露组W/D增加(t=9.223 P<0.01);与高氧暴露组比较,高氧暴露加R031-8220组W/D降低(t=5.050P<0.01)。72 h时相点其肺组织毛细血管内皮细胞SSeCKS的表达及亚细胞位置的变化:空气对照组SSeCKS主要分布在细胞膜;与空气对照组比较高氧暴露组SSeCKS表达增加,且有非常显著性差异(t=8.861 P<0.01),主要表达在细胞质中,高氧暴露加R031-8220组SSeCKS表达与高氧暴露组比较明显减少,有非常显著性差异(t=9.863 P<0.01),SSeCKS主要表达在细胞膜。结论新生大鼠肺组织毛细血管内皮细胞SSeCKS的变化参与高氧致新生大鼠肺组织毛细血管损伤的病理过程。

清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究

目的 :观察清脂护肝方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝功能、血清炎症因子以及肝组织中Src家族相关激酶(Hck、Lyn)和Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSe CKS)表达的影响并探讨其机制。方法 :以高脂饲料制备NASH大鼠模型,将造模成功的大鼠再随机分为模型组、清脂护肝方组(低、中、高3个剂量组),每组10只。模型组和正常组以0.9%Na Cl溶液灌胃,清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周。实验结束后检测大鼠肝功能、肝组织中Hck、Lyn和SSe CKS蛋白表达水平以及血清中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果 :清脂护肝方能改善NASH大鼠的肝功能;清脂护肝方可下调Hck和Lyn的表达而上调SSe CKS表达,可降低血清IL-1、IL-6水平,但不影响TNF-α水平。结论 :清脂护肝方能够改善NASH大鼠肝功能、降低炎症因子水平,其机制可能是通过调控Hck、Lyn、SSe CKS的表达从而减轻肝脏的炎症反应。

Src抑制的蛋白激酶C底物与炎性肺组织损伤

Src抑制的蛋白激酶C底物是一种新发现的细胞支架蛋白，亦是一种脂多糖反应蛋白，和炎症反应密切相关，可能参与了炎症所致的肺组织损伤。它和炎症所致肺血管损伤相关信号转导机制有着密切的关系，如蛋白激酶C、酪氨酸蛋白激酶、G蛋白耦联受体相关的信号通路，可能具有调节血管通透性的作用。通过对其的研究，能为急性肺损伤的防治提供新的理论依据。