Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SW1353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响及其机制。方法体外培养人软骨肉瘤SW1353细胞,分为对照组和实验组,分别采用MTT法、流式细胞术和细胞迁移实验观察Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SW1353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响,并通过Western-blot检测Src激酶抑制剂-1作用后Src及下游信号通路蛋白的影响。结果 0.5、1、5、10μmol/L的Src激酶抑制剂-1均能明显抑制SW1353细胞的增殖(P<0.01);1、5、10μmol/L的Src激酶抑制剂-1均能明显促进SW1353细胞的凋亡(P<0.01);Src激酶抑制剂-1能明显限制SW1353细胞的迁移;Src激酶抑制剂-1能明显抑制SW1353细胞Src(Tyr416)及下游信号ERK1/2、Akt和FAK(Y397)的磷酸化。结论 Src激酶抑制剂-1具有抑制人软骨肉瘤SW1353细胞生长和迁移的能力,可能对软骨肉瘤具有一定的治疗效果,这是通过直接抑制Src酪氨酸激酶的活性,进而抑制其下游信号通路的激活来实现的。

Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱尿路上皮癌T24细胞钙黏附蛋白E表达的影响

【目的】探讨Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞Src蛋白下游信号钙黏附蛋白E（E-Cadherin）的作用。【方法】应用半定量RT—PCR法检测0μmol／L、0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后的人膀胱癌T24细胞各浓度组的E—Cadherin表达情况。【结果】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后，E-Cadherin表达呈上调趋势；人膀胱癌T24细胞E-Cadherin mRNA表达水平随加入Src Kinase Inhibitor Ⅱ浓度增加呈上调趋势，0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L浓度组OD比值显著高于0μmol／L浓度组，组间比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。【结论】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对C-Src蛋白下游信号E-Cadberin具有上调作用，进一步证实了c-Src蛋白及其下游信号E-Cadherin作为膀胱移行细胞癌分子靶向治疗的可能性。

Src激酶对小鼠心肌细胞缺血再灌注损伤中容积敏感性氯通道的调控研究

目的探讨在小鼠心肌细胞缺血再灌注(IR)损伤过程中Src激酶对容积敏感性外向整流性氯通道(VSORC)的调控。方法取培养好的新生1~2 d的C57小鼠原代心肌细胞分为5组,Control组、低渗组、H_(2)O_(2)组、低渗+SU6656组和H_(2)O_(2)+SU6656组,前3组分别给予等渗、低渗或200μmol/L H_(2)O_(2)等渗外液灌流,后2组分别给予低渗或200μmol/L H_(2)O_(2)等渗外液灌流过程中加40μmol/L SU6656灌流细胞,各组灌流5~10 min。用全细胞膜片钳技术检测VSORC电流,流式细胞仪技术检测细胞体积,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果与Control组比较,低渗组和H_(2)O_(2)组电流强度明显升高(P<0.05);与低渗组和H_(2)O_(2)组比较,低渗+SU6656组和H_(2)O_(2)+SU6656组电流强度明显降低(P<0.05)。低渗组较Control组、H_(2)O_(2)组较Control组心肌细胞体积明显增大(259.90±19.78 vs 244.11±13.42,309.99±12.33 vs 286.43±15.45,P<0.05),低渗+SU6656组和H_(2)O_(2)+SU6656组心肌细胞体积趋近于Control组(P>0.05)。H_(2)O_(2)组心肌细胞凋亡较Control组明显增加;H_(2)O_(2)+SU6656组心肌细胞凋亡较H_(2)O_(2)组明显减少。结论Src激酶被抑制后,可能通过调控VSORC发挥抗心肌细胞IR损伤,实现心肌保护作用。

过表达Src诱导K562细胞产生格列卫耐药

目的:探讨过表达Src激酶在诱导K562细胞产生耐药中的作用及机制。方法:应用质粒转染的方法在K562细胞中过表达Src激酶,WST方法检测对格列卫(Imatinib)的敏感性,并通过RNA干扰特异抑制Src激酶,检测其对耐药的K562/G细胞增殖的影响。结果:在K562细胞中过表达Src激酶,显著提高细胞对格列卫的耐药性;用siRNA方法抑制Src激酶,24h就可以抑制约47%的K562/G细胞增殖。结论:Src激酶在诱导K562细胞耐药中发挥重要作用,抑制Src激酶可以抑制细胞增殖,Src激酶可以成为治疗耐药的慢性粒细胞白血病的新靶点。

RITA通过ROS/Src/Stat3通路诱导肺鳞癌H226细胞凋亡

目的探究肿瘤凋亡和P53再生化合物(RITA)对肺鳞癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用MTT细胞活力检测法检测不同浓度RITA对肺鳞癌细胞H226和正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖的影响,筛选合适的干预浓度。经0、0.05、0.1和0.2μmol/L RITA处理后,采用流式细胞术分析H226细胞内活性氧(ROS)产生和细胞凋亡水平变化。Western blot检测P-Src、Src、转录信号转换器和激活因子3(Stat3)、P-Stat3、Bim、Mcl-1、存活蛋白(Survivin)、Bax及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平。H226细胞经0.2μmol/L RITA和5.0 mmol/L抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)同时处理后,观察NAC能否逆转RITA对H226细胞的生物学效应。结果0.05~0.2μmol/L范围内,随着RITA浓度的升高,H226细胞增殖活性下降,半抑制浓度(IC_(50))为(0.130±0.008)μmol/L,而相同给药浓度下对BEAS-2B细胞增殖无明显影响。0~0.2μmol/L RITA可增加H226细胞内ROS水平并诱导细胞凋亡,下调P-Src、P-Stat3、Mcl-1、Survivin、Bcl-2蛋白表达,上调Bim、Bax蛋白表达。经NAC处理后,RITA抑制Src/Stat3通路活性及诱导H226细胞凋亡的效应被逆转。结论RITA通过提高肺鳞癌H226细胞内ROS的水平,从而抑制Src/Stat3通路活性,最终诱导细胞凋亡。

Src激酶在机械通气性牵张致肺泡上皮细胞损伤中的作用

目的 评价Src激酶在机械通气性牵张致肺泡上皮细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将体外培养的MEL12细胞分为3组：机械通气性牵张组（S组）、二甲基亚砜对照组（D组）和Src激酶抑制剂PP2组（P组）.D组和P组分别加入二甲基亚砜30 μl/ml和Src激酶抑制剂PP2100 μmol/L（用二甲基亚砜溶解）孵育30 min,然后3组给予20％应变率的机械牵张,频率0.5 Hz.分别于机械牵张即刻、2、4和8h时,每组取3孔 MLE-12细胞,测定细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率,采用Western blot法测定Occludin蛋白的表达.结果 与S组比较,D组各时点细胞凋亡率和Occludin蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）,P组机械牵张2、4和8h时细胞凋亡率降低,Occludin蛋白表达上调（P＜0.05）.结论 Src激酶激活参与了机械通气性牵张致肺泡上皮细胞损伤.

Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞KYSE180生长及凋亡的影响

目的:探讨Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib对人食管鳞癌细胞生长和凋亡的影响及其相关机制。方法:采用蛋白质印迹法检测食管鳞癌细胞株KYSE180、EC109、KYSE30和人永生化食管上皮细胞株SHEE中总Src和磷酸化Src激酶的表达。用不同剂量的Src酪氨酸激酶抑制剂dasatinib作用KYSE180细胞后,分别采用MTT法、FCM法、蛋白质印迹法和裸鼠皮下移植瘤实验观察dasatinib对KYSE180细胞Src激酶的抑制作用,以及对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和裸鼠皮下移植瘤的影响。结果:KYSE180、EC109和KYSE30细胞中Src激酶显著活化,而在SHEE细胞中未见活化Src激酶。Dasatinib可显著抑制KYSE180细胞增殖,阻碍细胞G1/S期转换,促进细胞凋亡,并上调caspase3、cytochrome C和Bax等凋亡相关蛋白的表达。另外,dasatinib可显著抑制裸鼠皮下KYSE180细胞移植瘤的生长。结论:Dasatinib可通过抑制食管鳞癌细胞增殖、促进细胞凋亡以及影响细胞周期等机制,抑制食管鳞癌细胞皮下移植瘤的生长,因此其可望成为治疗食管鳞癌的一个有效药物。

C末端Src激酶在血管紧张素Ⅱ诱导足细胞骨架重构中的作用

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激对大鼠肾脏及条件永生性小鼠足细胞C末端Src激酶（C—terminal Srckinase，Csk）表达的影响，探讨Csk在Angll诱导足细胞骨架重构中的作用。方法24只无特定病原（SPF）级雄性Wista大鼠皮下埋置渗透性微泵，随机分为正常对照组和AnglI输注组（AngⅡ以400ng·kg^-1·min^-1持续输注），于造模后2周和4周留取肾组织用于后续实验。采用透射电镜观察各组大鼠肾脏足细胞超微结构改变；Western印迹检测各组大鼠Csk蛋白表达水平；免疫荧光法检测肾脏Csk表达及分布改变。体外培养条件永生性小鼠足细胞（MPC），Western印迹法检测不同浓度AngⅡ（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）刺激MPC细胞6h及10^-6mol／LAngⅡ刺激不同时间（0、1．5、3、6、12、24h）后足细胞Csk蛋白表达水平。CsksiRNA转染足细胞下调Csk表达，异硫氰酸荧光素（FITC）-鬼笔环肽（phalloidin）标记F-actin评价AngⅡ、细胞松弛素D（CytochalasinD）诱导的足细胞骨架重构改变。结果（1）透射电镜观察发现，AngⅡ输注组大鼠足细胞出现足突融合；（2）免疫荧光及Western印迹显示，AngⅡ输注组肾小球Csk表达增加（P〈0．05）；（3）AngⅡ可诱导培养的小鼠足细胞Csk蛋白表达增加（P〈0．05），且呈时间和剂量依赖性；（4）CsksiRNA转染足细胞下调Csk表达，可减轻AngⅡ诱导的足细胞F—actin重构，可减轻细胞松弛素D诱导的足细胞骨架破坏。结论AngⅡ可诱导Csk表达上调，Csk可能参与了AngⅡ诱导的足细胞骨架重构及足突融合。

芬太尼抑制鼻咽癌细胞侵袭转移的机制研究

目的通过选择10 nmol·L-1芬太尼作用于鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1,研究芬太尼对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。方法取对数生长期的鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1,选择10 nmol·L-1芬太尼分别作用于鼻咽癌细胞系30 min和1h,Western blot检测p-Src和Src表达,Transwell检测细胞迁移能力;构建Src过表达质粒,转染鼻咽癌细胞系,观察鼻咽癌细胞形态,检测细胞的迁移能力。结果 10 nmol·L-1芬太尼处理鼻咽癌细胞CNE2和HONE1 48 h后,细胞呈现出类间质向上皮转化的形态特征,同时,与对照组相比,加入芬太尼处理组的鼻咽癌细胞其迁移能力显著降低;应用芬太尼分别处理鼻咽癌细胞30 min和1 h后,p-Src水平显著下调;此外,与转染空载体质粒的对照组相比,过表达Src的细胞迁移能力明显增强,而在过表达Src的细胞中同时联合芬太尼处理后,细胞的迁移能力没有被抑制。结论芬太尼可能通过抑制Src通路活化抑制鼻咽癌细胞侵袭转移。

抑制Src激酶可减轻单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化．

目的探讨Src激酶在单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾问质纤维化中的作用及其机制。方法雄性C57BL／6J小鼠随机分为假手术（Sham）组（n=8）、Sham＋PP2（Src激酶抑制剂）组（n=8）、UUO组（n=8）和UUO＋PP2组（n=8）。Sham＋PP2组和UUO＋PP2组白手术13起每天给予2mg／kgPP2腹腔注射。PP2溶解于生理盐水配制的1％二甲基亚砜（DMSO）。Sham组和UUO组给予等量1％DMSO腹腔注射。术后第7天处死取肾组织。天狼星红染色观察肾脏组织胶原分布；Western印迹法分别检DH,0Src、蛋白激酶B（PKB，也称AKT）、丝裂原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）的活化及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）的表达；免疫组化检测I型胶原（COLI）的表达；ELISA法检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP-1）、转化生长因子p1（TGF—β1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素6（IL-6）的表达。结果与Sham组比较，UUO组小鼠第7天肾组织纤维化明显，COLI及FN表达升高（均P〈0．05），Src及其下游p38MAPK、AKT和ERK激酶活化增加（均P〈0．05），同时伴有α-SMA表达增加（P〈0．05），TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、MCP-1和IL-6表达升高（均P〈0．05）。与UUO组比较，UUO＋PP2组肾脏Src、AKT、p38MAPK和ERK的活化受抑制（均P〈0．05），TGF-β1、MCP-1和IL-6表达减少（均P〈0．05），COLI、FN及α-SMA表达降低（均P〈0．05），肾组织纤维化程度明显减轻；MMP-9、TIMP-1的表达不受PP2干预影响。结论Src激酶通过激活其下游相关信号通路促进肾间质肌成纤维细胞聚集、促纤维化因子分泌及炎性反应，参与UUO小鼠肾间质纤维化的进展。

PP2可增强乳腺癌Hs578T细胞缝隙连接功能

目的：探讨Src激酶抑制剂PP2对乳腺癌细胞Hs578T缝隙连接功能的影响.方法：MTT法检测PP2对乳腺癌细胞生长的影响;细胞接种荧光示踪法观察PP2对乳腺癌细胞之间荧光传递功能的影响;Westem blot法检测PP2对乳腺癌细胞Sre激酶表达的影响.结果：1～8μmol/L浓度的PP2对乳腺癌细胞生长几乎无影响;细胞接种荧光示踪结果显示,1～8μmol/L的PP2能显著增强细胞荧光传递功能（P＜0.01）,8μmol/L的PP2作用6、12和24 h后细胞荧光传递功能亦明显增强（P＜ 0.01）;Western blot结果显示,PP2（1～8 μmoL/L）可显著降低Src激酶表达（P＜0.05 ～0.01）,8μmol/L PP2作用6、12和24 h后Src激酶的表达亦明显降低（P＜0.01）.结论：PP2能增强乳腺癌细胞Hs578T的缝隙连接功能,这种增强作用可能与其降低Src激酶表达有关.

Src激酶和NR2B介导D1/D5受体激动剂诱导的脊髓LTP

目的探讨Src激酶在D1/D5受体激动剂诱导的脊髓长时程增强(LTP)中的作用。方法细胞外记录技术在脊髓腰膨大部记录背角浅层神经元C-纤维诱发电位。结果①D1/D5受体激动剂SKF38393(250μmol/L)诱导的脊髓LTP的效应可被D1/D5受体拮抗剂SCH23390(20μmol/L)所阻断;②Src激酶的选择性抑制剂Genistein(200μmol/L)对脊髓背角C-纤维诱发电位的基础电位没有影响,但可阻断SKF诱导的脊髓背角LTP;③N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基2B特异性拮抗剂Ro25-6981(50μmol/L)阻断SKF诱导的脊髓背角LTP。结论脊髓背角Src激酶和NMDAR2B受体参与D1/D5受体诱导的脊髓LTP。

Src激酶在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用

目的评价Src激酶在内毒素血症小鼠肝损伤中的作用。方法雌性BABL／c小鼠48只，体重15—20g，3～4月龄，采用随机数字表法分为3组（／Z=16）：对照组（c组）、内毒素血症组（LPS组）和Src激酶抑制剂PP2组（PP2组）。LPS组和PP2组腹腔注射脂多糖（LPS）20mg／kg，C组给予等容量PBS，2h后PP2组腹腔注射PP21mg／kg。于注射LPS或PBS后6h取8只大鼠，经腹主动脉采集血样，测定血清碱性磷酸酶（ALP）水平；随后处死大鼠，取肝组织，检测核因子E2相关因子2（Nrf2）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及髓过氧化物酶（MPO）活性；于注射LPS或PBS后24h处死8只大鼠，取肝组织，行病理学观察。结果与c组比较，LPS组和PP2组血清ALP、肝组织MDA和MPO的水平升高，SOD和Nrf2的水平降低（P〈0．05）；与LPS组比较，PP2组血清ALP、肝组织MDA和MPO的水平降低，SOD和Nrf2的水平升高（P〈0．05）。PP2组小鼠肝组织病理学损伤较LPS组减轻。结论Src激酶参与了内毒素血症诱发小鼠肝损伤的过程。

听觉系统Src家族调控电压门控性钠通道机制

感音神经性聋是耳鼻咽喉科常见的难治性疾病，其发病机制与听神经动作电位异常有关。蛋白酪氨酸激酶Src家族（srcfamilykinases，SFKs）是神经系统重要的细胞信号调控因子，可调控电压门控性钠通道的表达及功能而影响动作电位。近年来研究发现SFKs可上调听神经元性钠通道的功能，而抑制SFKs具有听觉防护的效果，因此研究SFKs调控电压门控性钠通道与听觉防护之间的关系，有望为研究耳聋治疗方案提供新的思路。

右美托咪定对小鼠海马神经元缺氧复氧时Src介导NR2A酪氨酸磷酸化水平的影响

目的评价右美托咪定对小鼠海马神经元缺氧复氧时Src介导NR2A酪氨酸磷酸化水平的影响。方法拉颈处死孕18d的C57小鼠,剖腹取胎鼠,分离海马神经元。将神经元接种于培养液中,培养至第7天,采用随机数字表法分为3组(n=30):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和右美托咪定组(D组)。H/R组和D组缺氧4h复氧24h制备小鼠海马神经元缺氧复氧损伤模型;D组给予终浓度为1μmol/L的右美托咪定孵育4h,随后制备模型。于复氧24h时采用MTT法检测海马神经元活力,TUNEL染色法观察海马神经元凋亡情况,计算细胞凋亡指数,Westernblot法检测海马神经元c-Src、p-SrcY416、NR2A、p-NR2AY1325和cleavedcaspase-3表达水平。结果与C组比较,H/R组海马神经元活力降低,凋亡指数升高,p-SrcY416、p-NR2AY1325和cleavedcaspase-3表达上调(P<0.05);与H/R组比较,D组海马神经元活力升高,凋亡指数降低,p-SrcY416、p-NR2AY1325和cleavedcaspase-3表达下调(P<0.05)。3组c-Src和NR2A表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论右美托咪定可抑制缺氧复氧小鼠海马神经元凋亡,其机制可能与降低Src介导NR2A酪氨酸磷酸化水平有关。

c—src／NADPH氧化酶1／活性氧对中性粒细胞弹力蛋白酶诱导气道黏蛋白5AC表达的影响

目的探讨中性粒细胞弹力蛋白酶（NE）诱导气道黏液高分泌的上游信号调节机制。方法体外培养人气道BEAS-2B上皮细胞，将细胞分为空白对照组（不加任何刺激）、NE组（NE刺激）、NE＋PP2组（NE刺激合并c—src抑制剂PP2）、NE＋c—src siRNA组（NE刺激合并c—src siRNA）、NE＋Nox1 siRNA组[NE刺激合并NADPH氧化酶1（Nox1）siRNA]、阴性siRNA对照组（加入阴性对照siRNA）及NE＋阴性siRNA组（NE刺激合并阴性对照siRNA）为干预条件。检测干预前后各组细胞中活性氧含量、Nox1蛋白含量、黏蛋白5AC的蛋白及mRNA水平。用四甲基偶氮唑盐法测定各组细胞活性；活性氧试剂盒测定活性氧相对含量；逆转录PCR法检测各组黏蛋白5AC mRNA水平；ELISA法分析细胞黏蛋白5AC的蛋白相对含量；Western blot法检测Nox1蛋白及c—src蛋白的相对含量。结果NE组细胞中Nox1蛋白相对含量为0．88±0．12，高于空白对照组的0．32±0．09（t=9．12，P=0．003）；活性氧相对含量为0．76±-0．09，高于空白对照组的0．18±0．02（t=9．44，P=0．003）；黏蛋白5AC蛋白相对含量为0．82±0．09，基因转录水平为0．77±0．05，均高于空白对照组（分别为0．21±0．11和0．18±0．08，t值分别为7．75和6．13，P值分别为0．004和0．006）。NE＋c—src siRNA组细胞的Nox1蛋白相对含量（0．39±0．08）、活性氧相对含量（0．29±0．05）均低于NE组（t值分别为5．43和5．60，均P=0．007）；黏蛋白5AC蛋白相对含量（0．38±0．09）及mRNA水平（0．41±0．04）低于NE组（t值分别为5．28和4．09，P值分别为0．008和0．034）。NE＋PP2组活性氧相对含量为0．41±0．11，Nox1蛋白相对含量为0．44±0．05，黏蛋白5AC蛋白及mRNA水平分别为0．48±0．08和0．46±0．07，均低于NE组（均P〈0．05）。NE＋Nox1 siRNA组中活性氧相对含量（0．19±0．06）、黏蛋白5AC蛋白相对含量（0．31±0．05）及mRNA水平（0．32±0．06）也低于NE组（均P〈0．05）。结论c—src／Nox1参与了，NE诱导的活性氧活化，是气道上皮细胞黏蛋白5AC合成及分泌的上游信号调节因子。

二烯丙基三硫通过miR-34a调控人白血病细胞中NADPH氧化酶的机制研究

目的 :研究二烯丙基三硫(diallyl trisuli de,DATS)对人白血病细胞HL-60细胞中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性的影响及可能的作用机制。方法:DATS(150μmol/L)作用于HL-60细胞不同时间后,采用硝基四氮唑蓝(nitro blue-tetrazolium,NBT)还原实验检测NADPH氧化酶的活性;实时荧光定量PCR检测DATS对微RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)以及Src、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响;蛋白质印迹法检测DATS及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2蛋白磷酸化的影响;细胞计数实验检测DATS和miR-34a对HL-60细胞增殖的影响。结果 :DATS作用于HL-60细胞后能明显提高细胞中NADPH氧化酶的活性,且呈时间依赖性,而Src激酶抑制剂PP2可抑制这种作用;DATS能上调HL-60细胞中miR-34a的表达水平,呈时间依赖性;miR-34a过表达可抑制Src、Gab1和Shp-2 mRNA及磷酸化蛋白的表达;DATS能抑制磷酸化Src、Gab1和Shp-2蛋白的表达水平。DATS和miR-34a过表达能抑制HL-60细胞的增殖,而抑制miR-34a的表达则可提高白血病细胞的增殖能力。结论 :DATS可能通过促进HL-60细胞miR-34a-Src-Gab1-Shp途径调控NADPH的氧化酶活性,从而起到抑制白血病细胞增殖的作用。

Kruppel样转录因子2对人肝窦内皮细胞体外迁移的影响

目的探索Kruppel样转录因子2（KLF2）对肝窦内皮细胞（LSEC）体外迁移的影响及其机制。方法采用慢病毒感染的方式构建过表达和干扰KLF2表达的LSEC（分别为LV5-KLF2和LV3-shKLF2），采用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测病毒感染效率，未处理LSEC作为野生对照（wT）组。采用Transwell实验检测KLF2表达的改变对LSEC迁移能力的影响，荧光定量PCR和蛋白印迹法检测促迁移因子血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）的表达，蛋白印迹法检测迁移相关信号通路蛋白Src，P38MAPK，P44／42MAPK的表达。结果Transwell实验计数12h细胞迁移数，过表达KLF2可抑制LSEC的体外迁移能力，LV5-KLF2组LSEC细胞迁移数目较LV5-NC和wT组少[（35．6±1．4）、（71．3±2．4）和（69．3±1．6）]，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。而下调KLF2表达后，LV3-shKLF2组LSEC的细胞迁移能力较LV5-NC和WT组增强，细胞迁移数目较对照组多[（189．5±5．4）、（83．4±2．5）和（82．2±3．4）]，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。荧光定量PCR和蛋白印迹法证实过表达KLF2可抑制LSEC中促迁移因子VEGFR2的mRNA和蛋白水平的表达，而干扰KLF2则上调VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平。蛋白印迹结果提示过表达KLF2，抑制LSEC中信号通路蛋白p-Src、p-P38 MAPK及p-P44／42的表达，而干扰KLF2则促进LSEC中上述磷酸化蛋白的表达。结论KLF2可能通过Src／MAPK通路抑制LSEC的体外迁移。