草石蚕块茎膨大相关SSH文库构建及分析

为挖掘草石蚕块茎膨大的关键基因,研究其分子机理,以快速膨大的草石蚕块茎为测验方,幼嫩块茎为驱动方,构建了草石蚕块茎膨大相关正向SSH文库。从文库中随机挑选阳性单克隆,利用引物Nest-1和Nest-2R对其进行验证,获得400个克隆,插入片段的大小为200~1 500 bp,主要集中在500 bp左右片段。随机挑取65个阳性克隆测序后得到60条ESTs,经过聚类、拼接和冗余去除后获得单拷贝序列33条,其中序列最长的片段为1 037 bp,最短片段为182 bp。通过序列比对,发现33条单拷贝序列中来源于蚕豆萎蔫病毒基因占39.4%,植物基因占36.4%,其它未知基因占24.2%。根据同源基因的来源分析,来源于茄科植物的基因所占比例最大(41.67%)。序列编号20 (632 bp)的EST与clone cSTB39G13 CENP-C mRNA基因有63%同源性;序列编号25 (378 bp)的EST与光敏色素A基因有84%同源性,这两个ESTs可能与草石蚕块茎膨大相关。