Dammarane-type saponins from steamed leaves of Panax notoginseng

Four new dammarane-type triterpenoid saponins,namely notoginsenosides SFt1-SFt4(1-4)were isolated from the steamed leaves of Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen(Araliaceae),together with 17 known saponins.Their structures were established on the basis of detailed spectroscopic analyses and acidic hydrolysis.The known ginsenosides Rk2 and Rh3 were obtained from P.notoginseng for the first time.All of these new saponins showed no in vitro cytotoxicity against five human cancer cell lines(HL-60,SMMC-7712,A-549,MCF-7,and SW480).

三七茎叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响

试验旨在研究三七茎叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和肠道健康的影响。选取26日龄断奶仔猪24头随机分为3组,每组8个重复,每个重复1头仔猪。对照组饲喂基础饲粮,低剂量组、高剂量组分别在基础饲粮中添加0.2%和0.4%的三七茎叶提取物。试验期21 d。结果显示,与对照组相比,高剂量组断奶仔猪平均日增重显著升高(P<0.05),低剂量组和高剂量组血清乳酸脱氢酶活性、谷草转氨酶活性和谷草/谷丙的比值显著降低(P<0.05);高剂量组断奶仔猪十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度显著增加(P<0.05),十二指肠和回肠的绒隐比显著升高(P<0.05);低剂量组和高剂量组结肠白细胞介素-12 p35(IL-12 p35)、白细胞介素-12 p40(IL-12 p40)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和干扰素-γ(IFN-γ)的mRNA表达量显著降低(P<0.05)。研究表明,在饲粮中添加三七茎叶提取物可以改善断奶仔猪生长性能、肠道健康,添加0.4%三七茎叶提取物较为适宜。

基于网络药理学探究三七叶对糖尿病大鼠的治疗机制

目的 利用网络药理学和动物实验,研究三七叶抗糖尿病的主要活性成分和潜在作用机制。方法 基于Pubchem、PharmMapper、OMIM等数据库筛选三七叶与糖尿病共同的潜在靶点之后,再利用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用网络图,对其进行拓扑学分析和聚类分析获得核心靶点,并进行GO和KEGG富集分析筛选药物作用于疾病的可能机制。随后进行动物实验验证三七叶的抗糖尿病作用。结果 预测结果共获得三七叶与糖尿病的共同靶点50个,核心靶点有3个:ANXA5、CFB、GSTP1,共涉及生物过程986种,细胞组成15种,分子功能74种,信号通路101条。动物实验表明三七叶可降低糖尿病大鼠的血糖,减少与糖尿病肾病相关的p38 MAPK和TGF-β1 mRNA的表达,同时也可以调节氧化应激和血脂水平,减少动脉粥样硬化。结论 三七叶是通过多途径多靶点共同发挥抗糖尿病的作用,其作用机制可能与减少氧化应激、调节细胞因子、减少动脉粥样硬化和抗糖尿病肾病肾纤维化等有关。

Transformation of Compound K from Saponins in Leaves of Panax notoginseng by Immobilized β-Glucanase

Objective To prepare an active anti-tumor component,compound K(C-K),from saponins in leaves of Panax notoginseng(SLPN) using immobilized β-glucanase.Methods Two entrapments,alginate gel-1(Alg 1) and alginate gel-2(Alg 2),were evaluated for their ability to immobilize β-glucanase.The amount and purity of C-K obtained from the transformation process were analyzed by HPLC,and the immobilizing parameters were optimized.Results β-Glucanase can be immobilized and reused with either of the entrapment.However,using Alg 1 resulted in higher enzyme activity than Alg 2.The optimal concentration of the immobilized enzyme was 10%;The optimal crosslinking time was 4–6 h;and the optimal concentration of the crosslinking agent was 6%– 7%.Conclusion Immobilized β-glucanase shows sustained enzyme activity,good ethanol tolerance,and was reusable for the preparation of C-K from SLPN.

4种真菌发酵对三七叶化学成分及药理活性的影响

以三七叶为原料,选择米根霉、粗糙脉孢菌、红曲霉和鲁氏毛霉4种真菌对其进行发酵,测定发酵过程中三七叶总皂苷、总多糖、总酚和总黄酮的含量变化,评估其体外抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的变化,并采用超高效液相色谱-质谱对发酵前后三七叶的代谢谱进行分析。结果表明:4种真菌均可使三七叶中总皂苷和总多糖含量显著降低,但米根霉、粗糙脉孢菌和红曲霉可提高总酚含量,而米根霉和鲁氏毛霉可提高总黄酮含量。真菌发酵3~5 d后,三七叶的抗氧化活性明显增强,其中红曲霉发酵3 d的增强效果最好,可使三七叶的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除能力以及铁离子还原能力分别提高14.30%、5.13%、18.40%。此外,真菌发酵可先降低后提高三七叶的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中红曲霉在发酵6 d后可使其提高16.03%。进一步的非靶向代谢组学分析,从三七叶中共鉴定出573种代谢物,经红曲霉发酵3 d后,其上调代谢物明显少于下调代谢物,主要为氨基酸、生物碱、碳水化合物、脂类、酚类、类黄酮以及萜类化合物等;对其中的21种皂苷类化合物进行进一步分析,发现其中只有人参皂苷F2显著上调,另有8种皂苷显著下调;对差异代谢物进行京都基因与基因组百科全书富集分析发现,嘌呤代谢、嘧啶代谢、类黄酮生物合成、辅助因子的生物合成等是三七叶在发酵过程中最可能的代谢通路。综上,真菌发酵尤其是红曲霉发酵是改善三七功能活性的绿色有效手段,其可通过多个作用途径使三七叶的代谢物变化,影响其功能活性,本研究可为三七叶的绿色加工提供科学参考。

三七茎叶-滇黄精速溶粉提取工艺及抗氧化活性分析

为探索三七茎叶-滇黄精复合产品的开发工艺,该研究分析了三七茎叶-滇黄精速溶粉中可溶性总糖、皂苷、多酚化合物的组成及含量,并测定其抗氧化活性。以单因素-响应面实验考察三七茎叶-滇黄精在乙醇添加量、料液比(g∶mL)、浸提时间3种变量条件下的最佳浸提条件,进一步以喷雾干燥的方法获取三七茎叶-滇黄精速溶粉,以蒽酮比色法测定速溶粉中可溶性总糖的含量,高效液相色谱法测定速溶粉中皂苷、多酚含量,进一步测定其抗氧化活性,并进行感官审评。喷雾干燥优化出三七茎叶与滇黄精的最佳质量比为6∶4,最佳浸提工艺为三七茎叶-滇黄精的料液比(g∶mL)为1∶21,29%(体积分数)乙醇,浸提37 h,重复浸提2次,每1 kg复合物可得到速溶粉374.23 g,得粉率37.42%,该速溶粉溶解性好,香甜回甘。速溶粉中可溶性总糖含量为(55.44±3.21)mg/g,活性成分以三七皂苷Fa、Fd、Fc、人参皂苷Rb1等7种皂苷及咖啡酸(caffeic acid,CA)、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin-3-gallate,ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocahechin-3-gallate,EGCG)等5种酚类化合物为主。抗氧化活性结果表明,三七茎叶-滇黄精速溶粉对ABTS阳离子自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基具有较好的清除能力,其IC 50值分别为0.30、0.63、0.49、1.67 mg/mL。该研究优化了三七茎叶-滇黄精浸提工艺,所得速溶粉富含皂苷、多酚、可溶性糖等成分,为三七茎叶和滇黄精在食品开发领域提供基础研究数据,为云南特色食品及药食同源产品的开发利用提供科学支撑。

凝结芽胞杆菌发酵三七叶茶抗氧化活性及其香气成分研究

为探究凝结芽孢杆菌接种量对三七叶茶功效成分、抗氧化活性和香气成分的影响,设置了4种凝结芽胞杆菌接种量(0%、1%、3%和5%)发酵三七叶茶,分析了发酵三七叶茶的总酚、总黄酮、总皂苷、DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除率、挥发性香气成分和感官评价。结果表明,凝结芽孢杆菌发酵三七叶茶总酚含量和总黄酮含量显著降低了6.8%~21.3%和28.4%~40.9%,且随接种量增加,发酵三七叶茶的总酚含量和总黄酮含量均呈先增大后减小的趋势;接种凝结芽孢杆菌使发酵三七叶茶的总皂苷含量显著增加了0.085~1.45倍,醇提物DPPH自由基、ABTS阳离子自由基清除率显著增加了12%~28.8%、9.6%~22.5%,且挥发性成分种类和浓度均有增加。此外,凝结芽孢杆菌能提高三七叶茶的感官总评分。其中,3%凝结芽孢杆菌接种量发酵的三七叶茶总皂苷含量最高,为373.7 mg/g,且抗氧化效果和感官评价最好,推荐作为发酵三七叶茶的适宜接种量。该研究结果可为优化三七叶茶发酵工艺,实现三七叶片的高效利用提供理论依据和科学指导。

干燥方式对三七叶主要活性成分、体外抗氧化、α-葡萄糖苷酶抑制活性、挥发性成分和代谢物的影响

为选择较好的三七叶干燥方式,分别采用热风干燥、热泵干燥、真空干燥3种方式对三七叶进行干燥,测定不同干燥方式下三七叶的总皂苷、多糖、总酚和总黄酮含量以及单体皂苷含量,评估其体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制能力,采用气相色谱-离子迁移谱联用技术鉴定其挥发性成分,并采用非靶向代谢组学技术分析其代谢物变化。结果表明:3种干燥方式均可明显提高三七叶的总皂苷和多糖含量,降低其总酚和总黄酮含量,但均不同程度地减弱了其功能活性;其中热泵干燥组的总皂苷和多糖含量最高,并具有最强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力和α-葡萄糖苷酶抑制能力,以及较强的2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸阳离子自由基清除能力和铁还原能力;高效液相色谱分析发现热泵干燥显著降低了三七叶中三七皂苷Fc、Fe的含量,而真空干燥组与之相反;从三七叶中共检测出85种挥发性成分,其中热泵干燥组的醇类和醛类化合物相对含量最高,而酮类化合物相对含量最低,且不同处理组之间有明显区别;采用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱质谱联用技术从热泵干燥前后的三七叶中鉴定出659种代谢物,其中有113种和68种代谢物分别在正、负离子模式下表达显著上调,98种和31种代谢物分别在正、负离子模式下表达显著下调,主要包括脂质和类脂分子、有机杂环化合物、有机酸及其衍生物等。针对三七叶中24种皂苷类代谢物进行进一步分析,发现其中7种相对含量显著降低、1种相对含量显著升高,这也印证了高效液相色谱的测定结果;对差异代谢物进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,发现新鲜三七叶在热泵干燥过程中最可能存在的代谢通路有氨基酸的生物合成、2-氧羧酸代谢及辅助因子的生物合成。综上,热泵干燥对三七叶的化学成分和功能活性具有最好的保持效果,较适合用于三七叶的干燥,其可通过多个作用途径改变三七叶的代谢物组成,并影响其挥发性成分含量。

饲粮中添加三七茎叶对西畴乌骨鸡血清生化指标、免疫功能以及肌肉品质的影响

试验旨在研究在饲粮中添加三七茎叶对西畴乌骨鸡血清生化指标、免疫功能以及肌肉品质的影响。选择42日龄的西畴乌骨鸡270只随机分为3组,每组3个重复,每个重复30只。对照组乌骨鸡饲喂基础饲粮,Ⅰ组、Ⅱ组分别在基础饲粮中添加4%、8%三七茎叶。试验期90 d。结果显示,Ⅰ组、Ⅱ组乌骨鸡血清球蛋白含量、法氏囊指数、脾脏指数以及肌肉中苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸、棕榈油酸、油酸、γ-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸以及必需氨基酸的含量显著提高(P<0.05),血清中碱性磷酸酶、尿素氮含量以及肌肉中豆蔻酸、硬脂酸含量显著降低(P<0.05)。研究表明,在饲粮中添加三七茎叶饲喂西畴乌骨鸡可改善其血清生化指标,调节机体代谢功能,提升免疫力,改善西畴乌骨鸡的肌肉品质,添加4%三七茎叶较为适宜。

消栓通络片中三七茎叶及重金属检查

目的建立消栓通络片中三七茎叶的检查方法,同时考察该制剂中重金属残留水平。方法采用薄层鉴别法对消栓通络片中三七茎叶进行筛查;运用电感耦合等离子体质谱法对样品中5种重金属有害元素残留量进行测定,并进行安全风险评估。结果置日光和紫外光(365 nm)下检视,样品色谱中在与三七茎叶皂苷对照提取物色谱相应的位置上未出现相同颜色的斑点;所有样品中有2批砷超标、1批汞超标,而安全风险评估结果显示该制剂整体上所含5种重金属的量对人体所构成的非致癌风险较低。结论所建薄层鉴别法可有效甄别消栓通络片中是否存在三七茎叶冒充三七投料现象,对重金属有害残留量的考察有助于控制该制剂的整体质量。

三七叶甙制备原人参二醇及其差向异构体

三七叶总甙以c(NaOH)=2mol/L的氢氧化钠水溶液溶解,沸水浴加热8h进行水解,所得产物经乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析分离得到原人参二醇。三七叶总甙与浓盐酸常温反应7h后,再用饱和碳酸钠溶液常温搅拌24h,所得产物经乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析分离得到20(R) 原人参二醇。它们的结构经光谱分析及与文献对照得以鉴定。

三七茎叶黄酮类成分的研究

目的对三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]茎叶的黄酮类成分进行分离鉴定。方法利用水煎煮提取、大孔吸附树脂吸附、硅胶柱色谱、ODS柱色谱等方法分离提纯,通过理化性质及IR,UV,MS,1H-NMR,13C-NMR等光谱数据鉴定其结构。结果分离得到6个黄酮类单体化合物,分别鉴定为:山柰酚(kaempferol,Ⅰ)、槲皮素(quercetin,Ⅱ)、山柰酚-7-O--αL-鼠李糖苷(kaempferol 7-O--αL-rhamnoside,Ⅲ)、山柰酚-3-O--βD-半乳糖苷(kaempferol 3-O--βD-galactoside,Ⅳ)、山柰酚-3-O--βD-半乳糖(2→1)葡萄糖苷[kaempferol 3-O-(2″--βD-glucopyranosyl)--βD-galactopyranoside,Ⅴ]、槲皮素-3-O--βD-半乳糖(2→1)葡萄糖苷[quercetin3-O-(2″--βD-glucopyranosyl)--βD-galactopyranoside,Ⅵ]。结论除山柰酚(kaempferol,Ⅰ)、槲皮素(quercetin,Ⅱ)之外,其余4个化合物皆为首次从该植物中分离得到,Ⅲ与Ⅵ为首次从该属植物中分离得到。

三七叶化学成分的进一步研究

从三七叶乙醇提物中分离到16个化合物，分别鉴定为人参皂甙（ginsenoside）Rh2（1），F2（4），Rg3（5），Rg1（7），Rd（8），Re（11），Rb3（13），Rb1（14），Rc（15），七叶胆皂甙（gypenoside）XIII（2），IX（9），XVII（10），三七皂甙（notoginsenoside）R1（12），Fa（16），甘草素（liquiritigenin）（3），以及芹糖甘草甙（liquiritin apioside）（6）。其中化合物1，2，3和6首次分离自该植物中，化合物1，8及10，12首次从三七叶中分离到。研究结果进一步证实，三七叶以含原人参二醇型皂甙为主，同时含有微量的原人参三醇型皂甙和黄酮类化合物。

Fusarium sacchari对三七茎叶中有效成分生物转化条件的优化

利用从种植人参的土壤中分离、筛选的稀有菌种Fusarium sacchari,对三七茎叶中的主要有效成分三七叶苷进行生物转化,以3种抗肿瘤活性成分20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(C-K)、20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃木糖苷(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(C-Mx)和20(S)-原人参二醇-20-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(G-Mc)的总生成量为考查指标,通过因子转化实验确定最佳转化条件为:培养基初始pH值6、底物加入量40 mg、装液量30 ml,30℃、160 r.min-1转化6 d.该方法可提高三七茎叶的利用率和经济效益.

RP-HPLC法测定三七叶中黄酮类成分的含量

目的:对三七叶中的2种主要黄酮类成分山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷(Ⅰ)与槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷(Ⅱ)进行含量测定。方法:采用反相高效液相色谱法,使用 ZORBAX Extend C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.15%乙酸水溶液(35:65),流速1.2 mL·min^(-1),检测波长268 nm,柱温25℃。结果:山柰酚-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷与槲皮素-3-O-β-D-半乳糖(2→1)葡萄糖苷在进样量0.5-20μg范围内均有良好的线性关系,相关系数 r 皆为0.9999;Ⅰ的平均加样回收率为97.5%,RSD 为0.78%;Ⅱ的平均加样回收率为101.8%,RSD 为1.1%。结论:方法简便快捷,准确度高。

微波—碱水法提取三七茎叶总黄酮的工艺研究

利用微波效应,以碱水为溶剂来提取三七茎叶中的总黄酮。以总黄酮的提取率为指标,采用4因素3水平正交设计法筛选碱水的pH值,微波功率,液料比,微波处理时间四个因素的3个水平的最佳组合,得出微波—碱水法提取的最佳工艺:pH值8,微波功率中档,料液比1g∶40ml,微波作用时间10 min。提取2次。在此条件下,总黄酮的得率为22.484(mg/g DW)。

不同方法测定三七花、茎叶中维生素C含量

目的:比较3种测定三七花、茎叶中维生素C含量的方法,为三七地上部分开发利用提供科学依据。方法:采用2,6-二氯靛酚滴定法、紫外分光光度法、高效液相色谱法3种不同检测方法对三七地上部分维生素C含量进行测定。结果:三七花和茎叶中,采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定维生素C含量,其方法学考察良好,且两种方法测定结果高于滴定法所得结果。三七花和茎叶中维生素C平均含量无明显差异,其中采用HPLC法测得的结果分别为11.76mg/100g和11.39mg/100g。结论:三七花和茎叶中含有丰富的维生素C,紫外分光光度法和HPLC法均适用于三七地上部分中维生素C的含量测定。

三七叶中低糖链皂苷的分离与鉴定

三七叶总苷经硅胶柱层析及反相RP-18柱层析分得6个低糖链皂苷成分,光谱分析及与标准品对照鉴定它们的结构分别为20(R)-人参皂苷-Rh_2、20(R)-人参皂苷-Rg_3、人参皂苷-Mc、人参皂苷-F_1、人参皂苷-rRh_1和胡萝卜苷。

正交试验法优选三七茎叶中总黄酮的提取工艺

目的：从三七茎叶中提取总黄酮。方法：采用正交试验法研究三七茎叶总黄酮的提取工艺,考察了浸提用水的pH值、浸提温度、浸提时间、浸提次数、液料比五个因素对三七茎叶总黄酮提取率的影响。结果：确立了三七茎叶总黄酮最佳提取条件为：用pH10的稀碱水作溶剂,液料比30：1,浸提温度为80℃,回流提取2次,提取时间为每次40min。

顶空气相色谱法测定三七叶苷中大孔树脂有机溶剂残留物

目的:建立三七叶苷中8种大孔树脂有机溶剂残留物的检测方法。方法:采用顶空进样毛细管气相色谱法,色谱柱为INNOWAX 毛细管柱(30 m×0.53 mm×1.0 μm);柱温(程序升温):60℃维持16 min,再以每分钟20℃的升温速率升至200℃,维持2 min;进样口温度:240℃;FID 检测器温度:300℃;25%N,N-二甲基乙酰胺为溶解介质,载气为氮气,测定三七叶苷中正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1,2-二乙基苯及二乙烯苯8种大孔树脂有机溶剂残留量。结果:本法线性关系良好,r=0.9996～0.9999,精密度 RSD 均小于6.0%,8种溶剂的平均回收率为77.4%～101.6%,其 RSD 在3.0%～5.0%。结论:该方法操作简便快速,灵敏度高,准确度好,可作为三七叶苷中大孔树脂有机溶剂残留量的测定方法。