基于UPLC特征图谱和含量测定的蜜远志标准汤剂质量评价研究

目的建立蜜远志标准汤剂特征图谱以及3种成分质量分数同时测定的UPLC方法,对不同来源蜜远志饮片制成的标准汤剂质量进行评价。方法采用UPLC法建立蜜远志标准汤剂的特征图谱以及细叶远志皂苷、远志酮Ⅲ和3,6′-二芥子酰基蔗糖质量分数测定的方法,并对16批标准汤剂进行测定,采用高分辨质谱对共有峰进行了指认,采用聚类分析及偏最小二乘法分析(PLS-DA)对共有峰进行了分析。结果蜜远志标准汤剂特征图谱标定了9个共有峰,通过高分辨质谱分别指认为:西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、远志酮Ⅲ、3,6′-二芥子酰基蔗糖、黄花远志素A、细叶远志皂苷A、远志寡精H、远志寡糖A、1,2,3,7-四甲氧基呫吨酮,相似度结果显示16批样品的相似度均大于0.900。聚类分析及PLS-DA显示不同来源之间的样品可能存在质量差异。结论本研究建立的蜜远志标准汤剂特征图谱和质量分数测定方法简便、快速、准确,可为蜜远志相关制剂的质量评价提供参考。

淡附片标准汤剂质量标准研究

目的制备淡附片标准汤剂,进行含量测定及指纹图谱分析。方法制备15批淡附片标准汤剂,通过检测单酯型生物碱的含量计算其转移率;采用HPLC建立淡附片标准汤剂指纹图谱,计算指纹图谱相似度。结果15批淡附片标准汤剂的单酯型生物碱转移率为56.93%~94.06%,平均转移率为78.03%。经HPLC指纹图谱分析,发现共有峰9个,确认其中3个;15批淡附片标准汤剂的指纹图谱与对照指纹图谱相似度均大于0.95。结论本研究建立了淡附片标准汤剂HPLC含量测定和指纹图谱分析方法,可为淡附片中药配方颗粒的质量控制提供参考。

六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠脂代谢的影响

目的观察六味地黄汤及其水提醇沉物对2型糖尿病肾阴虚证大鼠脂代谢的影响。方法采用高脂乳灌胃结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)再灌胃氢化可的松的方法建立2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型。设空白组、模型组、六味地黄汤组、六味地黄汤水提醇沉物组、罗格列酮组,分组给药30 d,模型组和空白组给等量生理盐水,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清cAMP、胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)。结果模型大鼠FBG≥16.7 mmoL/L,cAMP水平为(1.32±0.04)mmoL/L,成功建立了2型糖尿病肾阴虚证大鼠模型;六味地黄汤及其水提醇沉物均能降低2型糖尿病肾阴虚证大鼠空腹血糖值及CHO、TG、LDL-C水平,升高HDLC水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),改善脂代谢。结论六味地黄汤干预2型糖尿病肾阴虚证的作用可能与其改善脂代谢有关,其水提醇沉物可能是六味地黄汤改善2型糖尿病肾阴虚证的药效物质基础之一。

蜜紫菀饮片标准汤剂制备及质量评价方法研究

目的:建立蜜紫菀饮片标准汤剂质量评价标准,为以蜜紫菀为原料的相关制剂质量标准制定提供参考。方法:收集14批蜜紫菀饮片,制备标准汤剂,测定蜜紫菀标准汤剂出膏率和pH值,并建立HPLC指纹图谱分析方法。结果:14批蜜紫菀标准汤剂出膏率范围为45.8%～61.4%;pH值范围为4.50～4.81;采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)"进行指纹图谱分析,相似度均大于0.899,确定12个共有峰,指认其中3个并对其进行简易定量分析,探讨适合标准汤剂定量的指标成分。结论:蜜紫菀标准汤剂研究可为以蜜紫菀为原料的相关制剂质量控制提供参考,因标准汤剂中紫菀酮转移率极低,可选择槲皮素等作为其定量指标成分。

加味补肝汤对糖尿病大鼠背根节细胞凋亡的影响

目的观察加味补肝汤对糖尿病大鼠背根节细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法以链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发糖尿病模型。分别给药后4、8周处死大鼠,应用化学比色法测定血清中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;用免疫组织化学法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法分别检测背根节细胞活化半胱天冬酶-3(Caspase-3)的蛋白表达以及细胞凋亡。结果(1)造模后4周、8周模型组大鼠血清中MDA水平明显高于同一时间点正常组,差异具有统计学意义(P<0.01),而GSH水平明显低于同一时间点正常组,差异具有统计学意义(P<0.01)。随病程的延长大鼠血清中MDA水平逐渐增加,而GSH水平逐渐降低。与同一时间点模型组相比,加味补肝汤能降低血清中MDA水平,提高GSH水平,差异具有统计学意义(均P<0.05);(2)在正常组大鼠背根节细胞中未见活化的Caspase-3的蛋白表达和细胞凋亡,模型组大鼠上述表达均增加,加味补肝汤干预后其表达均较同一时间点模型组表达明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论加味补肝汤抑制Caspase-3的活化,减少细胞凋亡,可能与调节机体内的氧化应激状态有关,具有良好的抗氧化作用,从而达到神经保护作用。

泽泻、郁金、熟地黄合煎对熟地黄中毛蕊花糖苷煎出量的影响

目的:研究泽泻、郁金、熟地黄合煎对熟地黄中毛蕊花糖苷煎出量的影响,为三药合用的药效物质研究提供参考。方法:取药材分为单煎-1(熟地黄20 g)、单煎-2(泽泻20 g)、单煎-3(郁金20 g)、合煎-1(熟地黄、泽泻各20 g)、合煎-2(熟地黄、郁金各20g)、合煎-3(泽泻、郁金各20 g)、合煎-4(熟地黄、泽泻、郁金各20 g)组,分别制备水煎液干浸膏,回流法提取后采用高效液相色谱法检测样品液中毛蕊花糖苷的含量并计算其煎出量。结果:单煎-1、合煎-1、合煎-2、合煎-4干浸膏中毛蕊花糖苷煎出量分别约为0.035 4、0.022 3、0.022 8、0.011 0 mg/g,后3组与单煎-1组比较差异具有统计学意义(P<0.01),以三药合煎组煎出量最低;阴性对照组(单煎-2、单煎-3及合煎-3)中未检测到毛蕊花糖苷。结论:熟地黄与泽泻、郁金三药合煎时毛蕊花糖苷煎出量降低,推测毛蕊花糖苷可能不是三药合煎液中发挥药效作用的主要成分。

生地黄标准汤剂质量评价及其指纹图谱的建立

目的开展生地黄标准汤剂的质量标准研究,为其配方颗粒的质量评价提供参考。方法根据中药饮片标准汤剂制备原则制备生地黄饮片标准汤剂,采用薄层色谱法对15批生地黄标准汤剂进行毛蕊花糖苷、梓醇薄层检识;采用高效液相色谱法对15批生地黄标准汤剂的苯乙醇苷类成分进行含量测定,色谱柱为Diamonsil Plus C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,流速为0.8 mL·min-1进行梯度洗脱,检测波长为334 nm,柱温为25℃,进样量为10μL;计算出膏率、苯乙醇苷类成分转移率;以毛蕊花糖苷峰为参照峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)检测,并进行相似度比较。结果标准汤剂出膏率为(58.49±2.83)%;苯乙醇苷类成分含量为(0.051±0.009)%;建立15批生地黄饮片标准汤剂的高效液相指纹图谱,指纹图谱批次间相似度均大于0.96。结论该研究建立的生地黄标准汤剂质量标准可行,适用于生地黄饮片标准汤剂的质量评价。

经典名方金水六君煎物质基准的薄层鉴别方法学研究

目的:建立经典名方金水六君煎物质基准中熟地黄、炙甘草和生姜的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法,以5-羟甲基糠醛为对照品,建立金水六君煎中熟地黄的薄层鉴别方法;以甘草苷和甘草对照药材为对照,建立金水六君煎中甘草的薄层鉴别方法;以6-姜辣素为对照品,建立金水六君煎中生姜的薄层鉴别方法,并对其进行方法学验证。结果:熟地黄、炙甘草和生姜的薄层鉴别方法,具有斑点清晰、分离度好、阴性无干扰的特点,薄层方法学考察结果良好。结论:该方法操作简便、结果可靠、重复性好,可作为熟地黄、炙甘草和生姜的鉴别方法,用于金水六君煎物质基准的质量控制。

回春育子颗粒质量标准研究

目的提高回春育子颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对制剂中的当归、熟地黄、川续断和甘草进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中原儿茶酸、阿魏酸、柚皮苷、淫羊藿苷和五味子醇甲的含量,色谱柱为WatersSymmetryC_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长分别为260 nm(原儿茶酸)、320 nm(阿魏酸)、283 nm(柚皮苷)、270 nm(淫羊藿苷)、250 nm(五味子醇甲),柱温为35℃,进样量为10μL。结果当归、熟地黄、川续断和甘草的TLC图斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;原儿茶酸、阿魏酸、柚皮苷、淫羊藿苷和五味子醇甲的质量浓度分别在1.10~55.09μg/mL(r=0.9996),0.96~48.36μg/mL(r=0.9981),0.14~7.11μg/mL(r=0.9979),2.83~141.46μg/mL(r=0.9993),1.00~49.97μg/mL(r=0.9986)范围内与峰面积线性关系良好;检测限分别为5.56,9.77,4.95,5.09,5.02 ng/mL,定量限分别为18.53,32.57,16.50,16.97,16.73 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);加样回收率分别为94.50%,92.28%,99.77%,98.54%,99.14%,RSD分别为1.61%,0.75%,1.34%,0.90%,1.01%(n=6)。结论该方法操作简单,结果准确可靠,重复性和稳定性均较好,可用于回春育子颗粒的质量控制。

基于数据挖掘对王树庆辨治慢性再生障碍性贫血的临床经验总结

目的:系统总结分析王树庆教授治疗慢性再生障碍性贫血(再障)的用药规律,通过对其临床用药数据进行挖掘,归纳其治疗慢性再障的临床经验。方法:搜集2014年11月至2017年12月门诊治疗的34例慢性再障病例,将患者临床证候及用药等资料进行统计整理,使用SPSS 19.0对病例中的中药进行频数统计分析,对频数较高的前36味中药进行系统聚类分析。结果:34例患者140诊次共用中药153味,分别属于9种功效不同的类别,累计用药频次2228次,使用频次最多的是熟地黄,其次为山萸肉、当归、泽泻、黄芪等。对36味高频药物进行聚类分析,得出6类不同的用药组合。结论:依据用药组合结合临床实践,总结王树庆治疗慢性再障的经验。王树庆辨治慢性再障以补肾、活髓、通络为根本治疗大法,以愈障汤为基础方,用药灵活,疗效肯定。

熟地黄标准汤质量标准及高效液相色谱指纹图谱研究

目的探讨熟地黄标准汤的质量标准,并建立其高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法采用紫外-可见分光光度法测定总多糖含量;采用HPLC法测定地黄苷D含量,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95,V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为203 nm,柱温为23℃,进样量为10μL。以地黄苷D为参照,测定15批熟地黄标准汤的HPLC图谱,采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"进行相似度评价,确定共有峰。结果15批熟地黄标准汤的干膏率平均值为67.01%,总多糖含量平均值为3.58%,其HPLC图谱有2个共有峰,相似度均大于0.95。结论所建立的质量标准及HPLC指纹图谱可为熟地黄标准汤的质量评价提供参考。

巴戟补肾丸质量标准研究

目的提高巴戟补肾丸的质量控制标准。方法采用TLC法对制剂中熟地黄和当归进行定性鉴别;采用HPLC法测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。选择C18柱,以乙腈-水(18:82)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为320nm。结果在TLC图谱中可检出熟地黄和当归的特征斑点。2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在11.28μg/mL～282.00μg/mL的浓度范围内线性关系良好,Y=37.81249X-20.79286(r=0.9999),平均回收率为96.1%,RSD为0.8%(n=6)。结论该方法简便,准确,专属性强,可用于该制剂的质量控制。

熟地黄炮制工艺及质量标准的探讨

目前以熟地黄为代表的中药,其炮制是否需要"九蒸九晒",在行业内一直没有定论。纵观本草文献,熟地黄的炮制往往需要"反复蒸晒",而现代工艺简化为"一步到位",这两者之间能否等效?作为典型的"生泻熟补"中药,熟地黄炮制前后性状、功效差异较大,这种差异必定与炮制工艺息息相关,而熟地黄现行质量标准无法体现差异性。为此,本文整理历代本草著作,收载有关熟地黄炮制方法,对比现行质量标准及相关研究,探讨熟地黄炮制工艺改进的可行性以及其质量标准存在的问题,以期为建立更科学的炮制工艺和质量标准提供思考与借鉴。

四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫收缩的影响

目的:分析评价四物汤及其组方药物对小鼠离体子宫平滑肌收缩的影响,探讨四物汤组方配伍特点。方法:采用小鼠离体子宫收缩痛经模型,观察该方及其组方药对离体子宫痛经模型小鼠子宫平滑肌平均肌张力、收缩幅度、收缩频率的抑制作用,计算抑制率。实验分为空白对照组,四物汤及其组方药给药组,每组6只,分两次平行进行,每次3只,单味药,药对及全方分别按生药量终浓度为0.5,1,2 g·L-1给药。结果:四物汤及其组方对缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩幅度、收缩频率和平均肌张力有不同程度的抑制作用,其中,当归-熟地黄药对对离体子宫的收缩幅度抑制作用最强,抑制率为23.195%;当归-白芍药对对离体子宫的收缩频率和平均肌张力的抑制作用最强,抑制率分别为47.826%和14.998%。结论:当归和白芍在抑制缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩效应上是有重要贡献的药味,且两药合用能增强其作用;熟地黄与当归配伍在抑制离体子宫收缩效应上也有协同增效的作用。

牟重临对脾肾主从关系的源流及其临床意义的探讨

通过对历代医家对脾肾相关的论述,从脏腑形成论脾肾关系,现代对脾肾相关的研究,补脾与补肾的方药之间的交互作用以及临床上补肾对补脾的补充作用等内容进行综合分析。牟重临老师认为人体脏腑活动以脾肾为本,肾是脾的延续部分,病理上脾肾互相影响,治疗上补肾弥补了补脾之不足,补肾实质是丰富了脾胃学说的内容。在临床上掌握好补脾与补肾主从关系的运用能够提高疾病的诊疗效果,且有助于脏腑本质的元研究。

藿草壮骨合剂中淫羊藿、骨碎补等薄层色谱鉴别方法的研究

目的：提高霍草壮骨合剂原药材与成品的质量标准,为临床提供安全有效的中药制剂.方法：采用薄层色谱法鉴别方中淫羊藿、熟地黄、骨碎补.结果：薄层色谱鉴别淫羊藿、骨碎补、熟地黄的特征斑点,且斑点清晰无干扰.结论：薄层色谱法方法简便,结果可靠,专属性强,重现性、耐用性好,可为藿草壮骨合剂的质量控制提供参考.

熟地黄饮片标准汤剂的质量标准研究

目的制备熟地黄饮片标准汤剂,并建立其质量标准。方法以水为提取溶剂,参照标准化工艺制备了15批不同产地的熟地黄的标准汤剂,测定毛蕊花糖苷,计算出膏率,并建立其HPLC指纹图谱分析方法。结果熟地黄标准汤剂中毛蕊花糖苷的质量浓度为0.011~0.025 mg/m L,出膏率为40.19%~60.79%。指纹图谱包含10个共有峰,通过对照品指认了2个,分别是5-羟甲基糠醛和毛蕊花糖苷,对熟地黄标准汤剂指纹图谱的相似度进行评价,其相似度均大于0.9。结论本法简便,精密度高,重复性好,可用于熟地黄标准汤剂的质量标准研究,为熟地黄配方颗粒的质量控制提供参考。

左归丸质量标准的研究和探讨

目的:对左归丸的质量标准进行增修提高。方法:增加左归丸中的山药、熟地黄、枸杞子和菟丝子等药材的显微鉴别方法;建立左归丸中熟地黄和枸杞子的薄层色谱鉴别的方法;建立HPLC法测定左归丸中莫诺苷和马钱苷的含量,使用ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃,以乙腈-0.3%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长240 nm。结果:显微鉴别专属性强,操作简单效果佳;薄层色谱中特征斑点明显,分离度好;莫诺苷和马钱苷进样量分别在0.08~0.80μg和0.08~0.85μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为101.4%和98.9%,RSD分别为0.60%和2.0%。17批样品中莫诺苷和马钱苷含量范围分别为0.231~0.632 mg·g^(-1)和0.345~0.604 mg·g^(-1),两者含量总和为0.636~1.236 mg·g^(-1)。结论:本文方法可对左归丸进行准确地定性和定量测定,能够有效评价与控制左归丸质量。

熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的相关性

目的:建立熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的HPLC指纹图谱,并对其质量相关性进行评价。同时结合出膏率和毛蕊花糖苷转移率等指标,评价熟地黄配方颗粒制备工艺的科学性和合理性。方法:采用HPLC法对多批次饮片、标准汤剂、中间体及配方颗粒进行指纹图谱检测和毛蕊花糖苷含量测定。指纹图谱方法采用Phenomenex Luna 100A C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水,流速1.0 m L·min^-1,检测波长300 nm。毛蕊花糖苷含量测定方法参照2015年版《中国药典》熟地黄饮片项下方法。同时,结合出膏率和毛蕊花糖苷转移率,进行配方颗粒制备过程中量值传递相关性分析。结果:熟地黄饮片、标准汤剂、中间体中毛蕊花糖苷含量基本一致,熟地黄中间体、配方颗粒的出膏率、毛蕊花糖苷转移率均在标准汤剂标准范围之内且与标准汤剂基本一致;熟地黄17批饮片,17批标准汤剂,10批中间体及10批配方颗粒指纹图谱均呈现7个共有峰,呈良好的相关性;采用UPLC-Q-TOF-MS分析技术成分归属了熟地黄配方颗粒中13个主要色谱峰,对7个共有峰中4个共有峰进行了指认,分别为5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、地黄苷。结论:熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的主要化学成分组成基本相同,熟地黄配方颗粒制备工艺合理,建立的HPLC指纹图谱方法可用于熟地黄配方颗粒的生产全过程的质量控制。

多指标-响应曲面法优选酒炖熟地黄最佳炮制工艺

目的基于响应曲面技术,应用HPLC法定量测定,从多指标、综合评价的角度建立酒炖熟地黄的最佳炮制工艺。方法采用HPLC定量分析,以地黄苷D、益母草苷、5-羟甲基糠醛(5-HMF)和毛蕊花糖苷为评价指标,采用响应曲面设计法考察地黄浸润时间、加黄酒量、炖制时间、干燥温度、干燥时间对酒炖熟地黄炮制工艺的影响,寻找出最佳炮制工艺。结果色谱柱为Tnature-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),体积流量为1 mL/min,柱温为25℃。地黄苷D和益母草苷定量测定:流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(4∶96),检测波长为203 nm;5-HMF和毛蕊花糖苷定量测定:流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱:0～15 min,11%乙腈;15～15.1 min,11%～16%乙腈;15.1～50 min,16%乙腈;检测波长为334 nm。酒炖熟地黄的最佳工艺为100 kg生地加入黄酒60 kg,浸润12 h,密闭炖制38 h,在76℃干燥33 h。结论所建立的HPLC法稳定可行,适合所选成分的测定。采用响应面法建立的模型相对准确,可以较好地预测4种成分含量;优选的酒炖熟地黄炮制工艺方法可行,为制定熟地黄的质量标准和现代研究提供了科学依据。