中国棉花审定品种SSR指纹库的构建与综合评价

[目的]棉花是一种异源四倍体作物,基因组结构复杂,常异花授粉的繁殖方式也导致棉花品种难以实现高度纯合;棉种市场缺乏有效的监管技术手段,品种多乱杂现象长期存在,严重影响纤维品质一致性。构建中国近20年棉花审定品种标准样品的DNA指纹库,探索棉花品种高通量SSR身份鉴定模式,为棉花品种真实性鉴定和新品种特异性鉴定提供依据;分析审定品种的遗传多样性和群体分化,为棉花不同生态区的适应性鉴定和培育适应新环境的品种提供理论基础。[方法]基于多重PCR技术和毛细管电泳检测方法,使用筛选得到的60个SSR标记构建1 015份棉花审定品种标准样品的DNA指纹库,通过植物品种DNA指纹库管理系统对审定品种SSR指纹进行两两比对,分析审定品种的遗传差异,筛选用于品种鉴定的核心SSR位点。利用聚类分析法和群体结构分析法分析1 015份棉花审定品种的遗传多样性,并计算群体间遗传分化指数。[结果]60个SSR标记在1 015个审定品种中共扩增出216种等位变异,平均等位变异数为3.6,平均PIC值为0.37。1 015个审定品种的SSR指纹进行两两比较,共产生513 591组结果,样品间最大差异位点数为58个。差异位点百分比主要集中在41%-70%,涉及428 115组,占83.36%;其中,差异位点百分比在51%-60%时,涉及组数最多,为197 829组,占38.52%。品种间差异位点百分比大于20%时,占所有品种两两比对组数的99%以上,差异位点百分比低于20%的比对结果只占0.58%。基于组合鉴定法,筛选一套包含10个SSR位点的核心位点组合,在1 015个品种中鉴别能力达到99%。聚类结果和群体结构分析表明,1 015个品种被清晰地划分为5个亚群,G1(n=240)为早熟棉亚群,主要分布于中国北部和西北内陆地区,该亚群品种遗传多样性最丰富,品种间平均遗传距离为0.419。G2(n=277)亚群为中熟棉亚群,分布于长江流域,该亚群杂交种较多,亚群内平均遗传距离为0.309。G3(n=109)亚群属于早熟、中熟棉亚群,分布于河北黑龙港地区,该亚群品种遗传组分相对单一,亚群内平均遗传距离在陆地棉群体中最小,仅为0.150。G4(n=254)亚群属于中早熟棉亚群,主要分布于黄河流域,群体内平均遗传距离为0.307。G5(n=37)亚群由37份海岛棉组成,群体内平均遗传距离最小,为0.149。海岛棉与陆地棉之间遗传分化水平最高,平均FST值为0.503;陆地棉群体内,G3亚群与其他亚群之间遗传分化水平最高,FST值为0.193-0.242。长江流域与黄河流域相比,遗传分化水平最低,FST值为0.112。[结论]构建了1 015个中国近20年审定品种标准样品DNA指纹库,筛选了一套包含10个SSR位点的核心标记组合,可以清晰地鉴别99%以上的品种,创建了“核心位点+扩展位点”的高通量棉花鉴定模式;1 015个品种被划分为5个亚群,其中,陆地棉具有明显的地理分布特征。

茵陈蒿汤治疗肝胆疾病研究进展及质量标志物预测分析

茵陈蒿汤源于张仲景《伤寒杂病论》一书,是治黄疸第一良方。具有清热、利湿、解毒和退黄等功效。现代药理研究表明,其方有保护肝损伤及抗肝纤维化等保肝利胆作用,临床上以治疗黄疸型肝炎、非酒精性脂肪肝等为主。综述了茵陈蒿汤在化学成分,肝胆疾病的治疗及其药理作用等方面的研究进展。同时,基于中药质量标志物(Q-marker)这一概念中的五原则途径和以现代生物学技术为基础的代谢组学研究、网络药理学等来预测分析茵陈蒿汤质量标志物。提示绿原酸、滨蒿内酯、茵陈色原酮、栀子苷、西红花苷Ⅰ、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷可作为该复方的Q-marker,以期为茵陈蒿汤质量控制体系的建立提供科学的参考依据。

多成分含量测定结合抗氧化活性的化学计量学分析筛选五味子标准汤剂质量标志物的研究

目的探究五味子标准汤剂抗氧化活性的质量标志物。方法采用基于一测多评法(QAMS)的超高效液相色谱法(UPLC)结合化学计量学评价15批五味子标准汤剂的质量;采用DPPH法和ABTS法测定15批样品的抗氧化活性,并借助灰色关联度(GRA)和偏最小二乘回归法(PLSR)分析8种成分含量与抗氧化活性的关联。采用分子对接技术探讨候选质量标志物与抗氧化核心靶点的结合性,同时对单体的体外抗氧化活性进行实验验证。结果QAMS法与外标法(ESM)的含量结果差异不显著(P>0.05),并推测原儿茶酸、五味子醇乙、五味子酯乙、五味子乙素为五味子标准汤剂的质量差异成分。根据GRA和PLSR结果,上述4个质量差异成分可作为抗氧化能力的备选标志物。分子对接结果显示4个候选质量标志物与抗氧化相关靶点具有良好的亲和力。研究认为五味子标准汤剂的抗氧化作用可能是多种成分综合作用的结果,其中,单体成分验证结果显示原儿茶酸具有明显的抗氧化活性并呈现剂量依赖关系,最符合作为质量标志物的特征,因而可能作为五味子标准汤剂抗氧化的质量标志物。结论基于UPLC含量测定法和体外抗氧化实验,预测了五味子标准汤剂中的潜在抗氧化活性物质,也为五味子其它相关制剂的质量评价提供合理依据。

浅谈马克笔在欧美及国内的安全标准

近年来,我国马克笔总的出口量和出口创汇值继续呈一定幅度的增长态势,但在出口过程中,因国内的安全标准与国外的安全标准差异较大,我国笔类企业遭受到越来越多的技术性贸易壁垒。安全标准是技术性贸易措施的主要内容之一,加强对笔类产品安全标准的研究,对解决国外技术贸易壁垒问题具有重要意义。

藤茶化学成分、药理作用及质量标志物(Q-marker)预测分析

藤茶是民族地区民间习用的药食保健茶.我国藤茶植物资源丰富,且含有多种活性成分,包括黄酮类、酚类、氨基酸类、多糖、甾体类、挥发油等成分,极具广阔的开发利用前景和药用价值.近年来,藤茶在保健品和药品中的应用越来越广泛,因此藤茶的品质和质量评价成了其开发应用过程中急需解决的问题.通过查阅本草专著、医书古籍、专利、植物志和电子文献等相关资料,在对藤茶的化学成分和药理作用综述的基础上,结合质量标志物(Q-marker)理论,从同属植物亲缘学关系、传统功效、传统药性、临床新用途、化学成分可测性等几方面对藤茶质量标志物进行预测分析,为藤茶质量评价研究及其全面开发利用提供科学依据.

基于一测多评法同时测定脑心舒通胶囊中6种成分的含量

目的:建立HPLC一测多评法同时测定脑心舒通胶囊中6种成分(丹参素、原儿茶醛、羟基红花黄色素A、迷迭香酸、天麻素、丹酚酸B),使用外标法验证此方法在脑心舒通胶囊中质量控制应用的可行性及适应性。方法:以丹参素为内标物,建立其与其他5种成分间的相对校正因子,并计算脑心舒通胶囊各成分含量,实现一测多评。结果:丹参素与其他五种成分的相对校正因子分别为1.025、2.157、0.760、1.820、6.224;9批脑心舒通胶囊中用一测多评法测定6种成分的含量与外标法测定结果无显著差异(相对误差<5%)。结论:该方法准确可靠,可用于脑心舒通胶囊的质量控制。

骨髓炎颗粒HPLC指纹图谱及一测多评法测定7种成分含量

目的建立骨髓炎颗粒的HPLC指纹图谱及一测多评法(QAMS)测定骨髓炎颗粒中绿原酸、连翘酯苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、党参炔苷等7种主要成分的含量。方法采用Diamonsil-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,4μm),以乙腈-0.1%的磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·mL^(-1),柱温为30℃,检测波长为280 nm,建立骨髓炎颗粒HPLC指纹图谱与测定绿原酸、连翘酯苷、芦丁、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、党参炔苷等7种主要成分含量。结果10批样品共标定了26个共有峰,指认了7个峰,相似度均大于0.995。以黄芩苷为内参物,分别建立绿原酸、芦丁、连翘酯苷、黄芩素、汉黄芩苷、党参炔苷的相对校正因子分别为2.3131、4.1377、2.1300、0.7248、1.9161、8.1718;其校正因子在不同色谱条件下的RSD均小于2%。该6种成分含量用外标法进行测定,与QAMS法比较成分含量结果无明显差异。结论建立的HPLC指纹图谱及7种成分QAMS法,科学合理、简便易行,可用于骨髓炎颗粒中有效成分含量的测定,为深入研究其质量标准奠定基础。

藏茵陈化学成分和药理作用研究及质量标志物预测分析

藏药历史悠久,是中华传统医学的重要组成部分。相较于中药质量标准,藏药质量标准中存在基原不清、有效成分不明、专属性不强、安全性和质量控制研究薄弱等问题,在一定程度上制约了藏药的发展。藏茵陈作为“藏药八珍”之一,是藏药中具有代表性的治疗肝胆疾病的药物。该研究首先对藏茵陈的化学成分和药理作用进行系统总结;其次对比中药和藏药在基础理论、药性、配伍、制剂等特点的异同,以质量标志物的核心内容“五要素”为基础,提出符合藏药的质量标志物的研究方法;最后结合藏茵陈传统功效、传统药性、生源途径、传递与溯源与可测性等研究对藏茵陈质量标志物进行预测分析,将龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸作为藏茵陈的候选质量标志物。该文可为藏茵陈的质量评价及控制提供依据,并为质量标志物理论在藏药中的应用提供参考。

雄安新区岩土标准地层序列划分

为统一雄安新区地层序列划分标准,实现雄安新区工程勘察数据的入库、互相调用和综合利用分析,在搜集雄安新区大量工程勘察资料的基础上,综合考虑地质年代、地质成因、沉积序列、地层岩性、物理力学性质等因素,对雄安新区100 m深度范围内的地层进行了统一划分,并对标准地层采用“主层编码+岩性亚层编码+特殊成分编码+工程性质次亚层编码”的形式进行了标准化编码。将雄安新区100 m以浅地层自上而下划分为18个主层,其中冲洪积层及冲湖积层、5个钙质结核层是具有典型特征的标志层,可作为地层划分的重要依据,并根据颗粒粗细对各主层内的亚层进行了分层。雄安新区100 m深度范围内地层序列划分标准的建立,可为勘察单位在雄安新区规范、标准地开展工程地质工作提供借鉴,同时也可满足政府部门对工程地质数据的有效管理与精准服务的需求。

猫急性应激模型的建立及诊断标志物的筛选

本研究旨在建立猫急性应激模型,筛选诊断标志物,完善猫急性应激定义标准。选取18只猫随机分为对照组、应激组A和应激组B,每组6只。测量各组猫的生理指标,评估猫应激评分(CSS),采血进行血常规和血生化分析;ELISA法检测血清炎性因子、激素、五羟色胺(5-HT)和热休克蛋白-70(HSP-70)浓度;微量法检测血清氧化应激指标。结果表明,与对照组相比,应激组A的体温、呼吸频率、CSS、尿素氮(BUN)含量、肌酸激酶(CK)活性、IL-1β、TNF-α、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)、肾上腺素(EPI)、5-HT浓度显著升高(P<0.05),红细胞(RBC)数目、血红蛋白(HGB)、IL-10浓度、天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)活性、总胆固醇(TC)含量显著降低(P<0.05),心率、白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(NEUT)数目、葡萄糖(GLU)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CRE)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)含量、淀粉酶(AMY)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和HSP-70浓度无显著变化(P>0.05);应激组B的体温、呼吸频率、CSS、WBC、NEUT、RBC数目、GLU、BUN、TG含量、CK、AST、SOD、CAT活性、HGB、IL-1β、TNF-α、CRH、ACTH、EPI、HSP-70、5-HT浓度显著升高(P<0.05),IL-10和COR浓度显著降低(P<0.05),心率、LYM数目、ALT、AMY活性、TP、ALB、CRE、TC、MDA含量无显著变化(P>0.05)。结果提示,本研究设计的复合应激和束缚应激均能成功建立猫急性应激模型,并筛选出CRH、ACTH和CSS可用于完善猫急性应激的定义标准。

一测多评法同时测定金母颗粒中6种成分

目的建立一测多评法同时测定金母颗粒(金刚刺、土茯苓、火炭母等)中没食子酸、绿原酸、虎杖苷、落新妇苷、白藜芦醇、盐酸小檗碱等6种成分的含量。方法采用高效液相法分析,Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL·min^(-1);柱温35℃;检测波长291 nm;进样量10μL。以盐酸小檗碱为内标物,计算其他5种成分的相对校正因子,测定其含量。同时通过外标法和一测多评法测定11批金母颗粒中6个成分的含量,并比较两者的差异。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9994),平均加样回收率为88.74%~106.03%,RSD为0.41%~2.85%,以盐酸小檗碱为内标,没食子酸、绿原酸、虎杖苷、落新妇苷和白藜芦醇的相对校正因子分别为0.8666、0.7463、0.4663、0.6591、0.2683。一测多评法所得结果与外标法接近,相对平均偏差(RAD)<5.0%。结论该方法稳定,准确可靠,可为金母颗粒的质量控制和评价提供理论参考。

中药材及其饮片质量等级标准研究进展与展望

从性状评价、化学评价、生物活性、综合分析等方面综述中药材及其饮片质量等级标准的研究进展及方法,并分析了影响中药材及其饮片质量的因素,为制定科学、合理、可行的中药材及饮片质量等级标准开拓了思路。

基于质量标志物和抗氧化药效的盐巴戟天蒸制时间及特色质量标准研究

目的基于质量标志物(Q-marker)成分和抗氧化药效综合优选盐巴戟天的最佳蒸制时间,并建立该炮制饮片的特色质量标准。方法采用高效液相色谱-蒸发光散色检测器(HPLC-ELSD)法同时测定不同蒸制时间盐巴戟天中6种Q-marker成分(1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、果果三糖、果果四糖、果果五糖)的含量,采用紫外-可见分光光度法测定样品提取液清除4种氧化自由基的活性及其铁还原能力,采用灰色关联度与熵权逼近理想解排序-融合模型法筛选盐巴戟天的最佳蒸制时间;测定10批按最佳蒸制时间制备的盐巴戟天中6种Q-marker成分的含量,并建立盐巴戟天饮片的HPLC-ELSD指纹图谱。结果盐巴戟天在蒸制3~5 h时,6种Q-marker成分含量较高;当蒸制5 h时,其清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基、2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧自由基、羟基自由基和铁还原能力均最好。10批自制盐巴戟天样品的指纹图谱中共有20个共有峰,相似度均大于0.990;共指认出9个色谱峰,分别为D-果糖(峰1)、D(+)-无水葡萄糖(峰2)、蔗糖(峰3)、1-蔗果三糖(峰4)、耐斯糖(峰5)、1F-果呋喃糖基耐斯糖(峰6)、果果三糖(峰X2)、果果四糖(峰X3)和果果五糖(峰X4)。6种Q-marker成分的平均含量分别为4.17%、5.54%、6.60%、2.89%、2.62%、2.13%。结论盐巴戟天的最佳蒸制时间为5 h;初步拟定6种Q-marker成分的含量以干燥品计算,分别不得少于3.03%、4.11%、4.87%、2.15%、1.96%、1.58%,菊淀粉型总寡糖/全果型总寡糖含量比值不得大于2.5。

一测多评法测定无花果叶中4种成分的含量

目的:建立无花果叶中绿原酸、芦丁、补骨脂素和佛手柑内酯4种成分含量测定的一测多评方法,并验证此方法的可行性与准确度。方法:采用高效液相色谱法,以芦丁为内参物,建立绿原酸、补骨脂素和佛手柑内酯的相对校正因子(f_(s/i)),并利用f_(s/i)计算无花果叶样品中各成分的含量,同时用外标法测定不同产地无花果叶中各成分的含量,比较一测多评法和外标法所得结果的差异。结果:一测多评法得到的绿原酸、补骨脂素和佛手柑内酯f_(s/i)重现性较好,且通过一测多评法测得的不同产地的无花果叶各成分含量与外标法测得的结果无显著差异。结论:本研究建立的一测多评法准确可行,可用于无花果叶的定量分析和质量评价。

外感止咳露质量标准提升研究

目的:建立外感止咳露TLC鉴别和多成分含量测定的HPLC“一测多评”法。方法:采用薄层色谱法对外感止咳露中的防风、前胡、薄荷进行定性鉴别;采用HPLC法,色谱柱为Welch Ultimate AQ-C_(18),流动相为乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为254 nm,进样量为10μL。采用多点校正法建立5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷与甘草酸的相对校正因子(f_(k/s)),计算各成分含量。并使用外标法测定各成分含量,与(f_(k/s))所得计算值相比较,对一测多评法的可靠性与准确性进行验证。结果:防风、前胡、薄荷三个药材薄层色谱鉴别专属性强,阴性对照无干扰,样品和对照品溶液在相同位置斑点清晰完整;HPLC法测定甘草酸与升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的相对校正因子分别为3.229和3.286;检测限分别为6.64、4.00、22.94 ng·mL^(-1)。一测多评法在不同色谱柱和仪器上的计算结果与外标法的结果没有显著差异。结论:该实验开发的TLC鉴别方法和HPLC含量测定方法可靠、简便,提高了该制剂质量标准,可用于外感止咳露的质量控制。

大麦DUS测试标准品种的遗传多样性分析及指纹图谱的构建

为对大麦种子的真伪进行有效监控,防止假冒伪劣品种进入市场,也为新品种登记测试以及种质资源遗传多样性分析提供参考,采用SSR标记技术对29个大麦DUS测试标准品种进行了遗传多样性分析和指纹图谱的构建。利用筛选出的28对有多态性的SSR引物共扩增出125个等位基因,每对引物可扩增出3～7个等位基因,平均4.46个等位基因,每对引物在29个品种中的PIC值为0.25～0.81,平均为0.62。聚类分析表明,29个大麦DUS测试标准品种可聚成4类,具有较远的亲缘关系,这些材料首先按照穗棱型进行聚类,表明不同穗棱型品种间存在较大遗传差异。构建了29个大麦DUS测试标准品种在28个SSR位点上的指纹图谱。

通腑泻热灌肠液中大黄素及大黄酚含量测定

目的建立通腑泻热灌肠液的质量标准及活性成分含量测定方法。方法采用薄层色谱（TLC）法对通腑泻热灌肠液中所含大黄、栀子、忍冬藤进行定性鉴别;并用高效液相色谱（HPLC）法测定通腑泻热灌肠液中大黄的2个有效成分含量。结果薄层色谱鉴别方法能定性检出大黄、栀子、忍冬藤,斑点清晰,分离度好,专属性强,且阴性对照无干扰;大黄素、大黄酚分别在0.0726~0.726μg（r=0.9998）、0.0071~0.071μg（r=0.9999）范围内与峰面积均呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.13%、103.16%,RSD（n=6）分别为2.30%、1.50%。结论所建立的定性、定量分析方法可行,专属性强,准确可靠,能有效控制通腑泻热灌肠液的质量。

封闭群长爪沙鼠遗传标准的建立

目的建立封闭群长爪沙鼠遗传质量标准和遗传质量检测方法。方法根据群体遗传学理论,参照实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制(GB14923-2001),在查阅大量文献资料的基础上,建立封闭群长爪沙鼠遗传标准。检测方法采用微卫星标记分析技术。从GeneBank中挑选出的536个小鼠微卫星位点对长爪沙鼠基因组DNA进行PCR扩增得到135个长爪沙鼠微卫星,并优化PCR扩增条件,通过琼脂糖电泳和STR扫描二级筛选,根据位点在染色体分布情况、等位基因数目和多态性等优化出适于封闭群长爪沙鼠遗传检测的微卫星位点组合,建立检测方法。结果初步建立了封闭群长爪沙鼠遗传质量标准和检测方法。

结构基因座和微卫星标记应用于绵(山)羊群体遗传分化的比较研究

对湖羊、同羊及长江三角洲白山羊的随机样本分别进行14个结构基因座和7个微卫星标记的遗传检测,比较由两种遗传标记获得的群体基因平均杂合度(H)、多态信息含量(PIC)及群体有效等位基因数(Ne);分别根据两种类型的基因频率资料,计算3个群体间的标准遗传距离并加以比较。结果表明:由微卫星等位基因频率获得的群体基因平均杂合度、多态信息含量及有效等位基因数显著大于结构基因座获得的,但在三群体中变化趋势是一致的;由结构基因座资料计算的3个群体间标准遗传距离为0 0268～0 2487,微卫星标记资料计算的3个群体间标准遗传距离为:0 2321～1 2313,绵山羊间显著大于绵羊群体之间。提示:结构基因座和微卫星标记一致揭示3群体内的遗传变异;同羊>湖羊>长江三角洲白山羊;微卫星标记较结构基因座标记更能表达近缘种间进化趋异水平,可将FCB11、MAF33、AE101、FCB128及FCB304位点作为研究绵山羊近缘种间遗传分化的标志性位点。

封闭群实验用小型猪遗传标准的建立

目的建立封闭群实验用小型猪遗传质量标准和遗传质量检测方法。方法根据群体遗传学理论,参照实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制(GB 14923-2001),在查阅大量文献资料的基础上,建立封闭群实验用小型猪遗传标准。检测方法采用微卫星标记分析技术。从GeneBank中挑选出的100个猪微卫星位点进行PCR扩增和条件优化,通过琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺电泳和STR扫描三级筛选,根据位点在染色体分布情况和等位基因数目、多态性等优化出适于封闭群实验用小型猪遗传检测的微卫星位点组合,建立检测方法。结果初步建立了封闭群实验用小型猪遗传质量标准和检测方法。