重度子痫前期胎盘组织中Staufen1的表达及其意义

目的研究早发型重度子痫前期(ESPE)和晚发型重度子痫前期(LSPE)患者胎盘组织中Staufen1(STAU1)的表达情况及其临床意义。方法选取2016年5月至2018年4月于我院剖宫产分娩的重度子痫前期(SPE)孕妇30例作为SPE组,其中ESPE15例,LSPE15例;另选择同期正常妊娠孕妇30例作为对照组(N组),其中ESPE对照(EN)组10例,LSPE对照(LN)组20例。采用实时PCR(RT-PCR)方法检测孕妇胎盘组织STAU1 mRNA的相对表达量,采用Western blotting方法及免疫组织化学方法检测胎盘组织中STAU1蛋白的表达及定位情况。结果实时PCR结果显示,SPE组胎盘组织中STAU1 mRNA表达水平显著低于N组,差异有统计学意义(0.844±0.074 vs 1.096±0.057,P<0.01);其中,ESPE组胎盘组织中STAU1 mRNA表达水平显著低于EN组,差异有统计学意义(0.683±0.061 vs 1.015±0.060,P<0.01),而LSPE组胎盘组织中STAU1 mRNA表达水平与LN组无统计学差异(1.005±0.124 vs 1.136±0.080,P>0.05)。Western blotting结果显示,STAU1蛋白表达于胎盘组织中,SPE组胎盘组织中STAU1蛋白的表达水平显著低于N组,差异有统计学意义(0.916±0.102 vs 1.573±0.135,P<0.001);其中ESPE组胎盘组织中STAU1蛋白表达水平显著低于EN组,差异有统计学意义(0.719±0.101 vs 2.025±0.155,P<0.001),而LSPE组胎盘组织STAU1蛋白表达水平与LN组无统计学差异(1.112±0.165 vs 1.337±0.165,P>0.05)。免疫组织化学结果显示,胎盘组织的细胞滋养细胞和合体滋养细胞中均有STAU1蛋白表达,且主要在合体滋养细胞的细胞质中表达。结论STAU1低表达可能与SPE中ESPE的发病密切相关。

小鼠双链RNA结合蛋白STAUFEN1介导的mRNA降解机制及其在脂肪细胞分化过程中的作用

过多能量摄入导致的肥胖已经成为了一个世界范围的问题,严重威胁着人们的健康。肥胖症以某些部位脂肪过度沉积为特点,而脂肪细胞的过度增殖和异常分化是肥胖发生的基础。越来越多的研究表明转录后调控在脂肪细胞分化过程中发挥着重要功能。STAU1(STAUFEN1)是一种双链RNA结合蛋白,能够靶向介导下游m RNA降解,参与脂肪细胞分化。STAU1可以在转录后水平调控脂肪细胞分化相关基因的可变剪接、翻译及降解,从而影响m RNA的代谢。该文就STAU1在脂肪细胞和组织中的功能和机制进行综述,希望为肥胖及2型糖尿病的治疗提供新的启示。

敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3⁃L1中FOXP1的表达增加

目的在小鼠前脂肪细胞系3T3-L1分化过程中敲低双链RNA结合蛋白Staufen1(Stau1)后筛选差异表达的基因,分析其生物学功能,并用qPCR验证测序结果。方法用RNA-seq分析Stau1敲低后基因的转录调控。构建STAU1 shRNA并转染3T3-L1细胞,鸡尾酒方法诱导其分化为成熟脂肪细胞,收取0、4 d的细胞设立对照组和STAU1敲低组(各3组生物重复样本)收取12组样品的细胞基因芯片信息,以变化倍数log2(Fold change)>1且校正后的P<0.05作为条件筛选Stau1敲低的细胞与对照组样本间的差异表达基因,进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(KEGG通路数据库),qPCR验证差异表达的基因。荧光素酶报告基因实验验证SATU1与叉头盒蛋白P1 FOXP1 mRNA 3′UTR上Staufen1结合位点(SBS)存在结合。结果较对照组STAU1敲低细胞组中共筛选出差异表达基因588个,其中上调406个、下调182个。差异表达基因主要参与的生物学过程中脂代谢、炎性反应因子,主要富集的信号通路有糖代谢和能量代谢相关通路。敲低Stau1后FOXP1表达升高5.3倍,软件预测FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点,荧光素酶报告基因验证了FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点。结论推测STAU1能够与FOXP1 mRNA上的STAU1结合位点结合并促进其降解。

小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1介导Foxp1 mRNA降解机制初探

目的 探究小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1对Foxp1 mRNA转录后的调控作用。方法 培养3T3-L1前脂肪细胞,采用鸡尾酒法诱导其分化为成熟脂肪细胞,分别收取第0天和第4天样本进行RNA测序筛选出差异倍数(FC)>2的转录因子;提取第0、1、2、3、4天细胞总RNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验验证。RBPDB数据库预测Foxp1的RNA结合蛋白。转染空载体质粒和STAU1过表达质粒后将细胞分为对照组和STAU1过表达组,提取第0、12、24、36、48小时细胞总RNA。利用RT-qPCR及Western-Blot实验检测两组3T3-L1细胞STAU1过表达效率、分化过程中Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平。10只雄性2~3周龄C57BL/6小鼠的腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue, iWAT)分离培养的血管基质部分(Stromal vascular fraction, SVF)细胞,鸡尾酒法诱导分化,感染慢病毒,利用免疫荧光实验检测SVF细胞中Foxp1的蛋白质表达水平,用catRAPID软件进行预测。RNA免疫共沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测STAU1与Foxp1 mRNA 3′非翻译区(3′un-translated region, 3′UTR)STAU1结合位点(Staufen binding site, SBS)的结合情况。转染质粒24 h后加入放线菌素D,提取第0、1、2、4、6、8小时细胞总RNA,利用RT-qPCR实验检测两组3T3-L1细胞STAU1对Foxp1 mRNA稳定性的影响。结果 经RNA-seq筛选出5个表达上调和5个表达下调的转录因子;RT-qPCR验证结果显示,在成脂过程中Foxp1 mRNA的表达逐渐下降,Pparγ mRNA的表达逐渐上调;RBPDB数据库结果显示,STAU1是Foxp1的RNA结合蛋白;与对照组比较,STAU1过表达组STAU1的mRNA和蛋白质表达水平显著升高(P<0.05),Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,与对照组比较,STAU1过表达组中Foxp1相对荧光强度降低(P<0.05);RNA免疫沉淀实验后的PCR验证结果显示,STAU1与Foxp1 mRNA 3′UTR的6 714~7 000 bp存在结合;与对照组比较,STAU1过表达组Foxp1的mRNA稳定性显著下降(P<0.05)。结论 STAU1通过结合在Foxp1 mRNA 3′UTR上,启动STAU1介导的mRNA降解途径(Staufen-mediated decay, SMD)降解其mRNA,下调Foxp1的mRNA表达水平。

不同型重度子痫前期患者胎盘组织STAU1、PLGF表达与妊娠结局

目的:探究早发型重度子痫前期(ESPE)与晚发型重度子痫前期(LSPE)患者胎盘组织中staufen1蛋白(STAU1)、胎盘生长因子(PLGF)表达水平与妊娠结局关系。方法:选取2017年1月—2019年10月于本院分娩的重度子痫前期孕妇86例,其中早发型43例(ESPE组)、晚发型43例(LSPE组),另随机选取同期正常妊娠分娩孕妇43例为对照组,分别采用Western blotting蛋白印迹方法和免疫组织化学法检测各组胎盘组织中STAU1、PLGF表达并分析与妊娠结局关系。结果:ESPE组胎盘组织中STAU1(0.69±0.13)、PLGF(72.14±4.42)表达水平均低于LSPE组(1.25±0.24、120.31±6.45)和对照组(1.34±0.21、117.78±6.31)(P<0.05),LSPE组与对照组无差异(P>0.05)。胎盘重量(385.5±41.2g)、新生儿出生体重(1.21±0.23kg)、新生儿1min Apgar评分(8.01±0.76分)ESPE组均低于LSPE组和对照组,且LSPE组低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析,ESPE与新生儿出生体重、新生儿1min Apgar评分、胎盘重量呈负相关(r=-0.441、-0.572、-0.615,均P=0.000)。结论:ESPE孕妇胎盘组织STAU1、PLGF显著低表达,而LSPE孕妇与正常孕妇差异不显著;STAU1、PLGF低表达可能与ESPE发病及进展有关。