蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对人胃癌细胞周期的影响

背景与目的:蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)已成为一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点。本研究旨在探讨PKC抑制剂Staurosporine(ST)对人胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901的增殖抑制、凋亡诱导及对其细胞周期的影响。方法:在用台盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率的基础上,通过细胞形态学观察凋亡小体,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化。结果:ST抑制MGC-803细胞生长,24h的IC50为54ng/ml,48h的IC50为23ng/ml;ST抑制SGC-7901细胞的生长,24h的IC50为61ng/ml,48h的IC50为37ng/ml。40、60、100ng/mlST分别作用MGC-803细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(23.6±1.8)%、(11.6±0.7)%、(3.3±0.2)%,而对照组为(54.3±3.1)%;G2/M期细胞分别为(22.6±4.0)%、(35.5±0.4)%、(36.8±5.5)%,而对照组为(13.5±0.2)%。40、60、100ng/mlST分别作用于SGC-7901细胞24h后,G0/G1期细胞分别为(27.1±1.4)%、(17.0±3.4)%,(13.7±0.7)%,而对照组为(52.5±4.4)%;G2/M期细胞分别为(21.9±2.6)%、(39.5±4.9)%、(38.4±3.1)%,而对照组为(13.5±2.2)%。实验组细胞与对照组比较,ST使两种细胞G0/G1期明显减少及G2/M期明显增加(P<0.01)。200ng/mlST作用24h后两种细胞的G1期前均出现明显的凋亡峰,可诱导细胞出现典型凋亡小体。

钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用

目的 :探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase 3激活的关系 .方法 :在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中 ,观察钾、氯离子通道阻断剂 (Quinine ,BaCl2 ,DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase 3活性及细胞膜完整性的影响 .实验分为阴性对照组 (无药物处理 )、阳性对照组 (staurosporine处理 )与药物干预组 (staurosporine加离子通道阻断剂 ) .结果 :①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡 .与阳性对照组 (2 9.8% )相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是 5 9.7% ,4 7.2 % ,5 8.6 %和 6 0 .7% ,均有显著的增加 (P <0 .0 1 ) .相对应的DNA片断电泳显示 :Qui nine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解 .②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3活性的激活 ,与阳性对照组 (6 0 0 .4 % )相比细胞的Caspase 3活性在Quinine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组分别是 1 84 .2 % ,2 1 6 .3% ,1 75 .6 %和2 2 1 .4 % ,均有显著的抑制 (P <0 .0 1 ) .③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于 1 0 % .结论 :在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中 ,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3?

DIDS对Bcl-2／Bax在staurosporine诱导心肌细胞凋亡中表达的影响

目的探讨氯离子通道阻断剂DIDS(4,4′-diisothiocy-ano-2,2′-stilbene-disulfonic acid)对staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡的调节蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法在STS诱导心肌细胞凋亡模型上,观察DIDS对心肌细胞存活率、caspase-3活性、Bcl-2/Bax蛋白表达水平及Bax细胞内分布的影响。实验分组:对照组、STS组、DIDS组。结果与STS组比较,DIDS能够明显抑制STS诱导的心肌细胞凋亡发生,心肌细胞存活率增加,caspase-3活性水平降低(P<0.01)。对照组、STS组和DIDS组在全细胞水平上Bcl-2、Bax表达差异无显著性(P>0.01),在亚细胞水平上发现STS组有明显的Bax蛋白从胞质向线粒体转位,DIDS可以抑制STS诱导的Bax线粒体转位。结论DIDS抑制心肌细胞凋亡可能与抑制促凋亡分子Bax由胞质向线粒体转位有关。

高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2

目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。

Staurosporine诱导小鼠心肌细胞凋亡模型的构建(英文)

目的 :Staurosporine可诱导不同细胞类型的细胞凋亡 ,但尚缺乏其对小鼠心肌细胞作用影响的报道。本研究旨在观察 Staurosporine是否也可引起小鼠心肌细胞的凋亡 ,并对其模型进行分子水平的鉴定。方法 :用 Stau-rosporine处理原代培养的小鼠心肌细胞的直接刺激后 ,观察心肌细胞的形态学变化、DNA片段、半胱天冬蛋白酶(caspase) -3活性、细胞存活率以及细胞膜完整性。结果 :1Staurosporine处理过的心肌细胞具有明显的凋亡形态学特征 :细胞的皱缩、核的浓缩及 DNA梯改变。2 Staurosporine4μmol/ L 对心肌细胞作用 8h后 ,与正常对照组比较细胞存活率降至 3 1.2 % (与对照组比 ,P<0 .0 1) ,且细胞存活率与 Staurosporine的作用浓度和作用时间呈依赖关系 ;同时测定细胞培养液中能反映细胞膜完整性的胞浆内容物乳酸脱氢酶 (L DH)水平 ,发现在 Staurosporine作用 1～ 8h的各个时间点 ,L DH的漏出水平最高未超过 10 % (与对照组相比 ,P>0 .0 5) ;这种高的细胞死亡率与低的细胞膜的损伤率 ,恰恰反映了细胞死亡的性质是凋亡性死亡。3 Staurosporine能激活心肌细胞内的 Caspese-3的活性 ,当使用广谱的 Caspese抑制剂 ZVAD-fmk预处理培养的小鼠心肌细胞后 ,能够有效的阻止上述细胞凋亡的发生 ,从而避免了

Staurosporine诱导乳鼠心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax的关系

目的探讨staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡过程中,凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化及意义。方法以STS诱导原代培养的SD乳鼠心肌细胞,检测半胱天冬蛋白酶(caspase)-3的活性及用Hoechst-33258荧光染色观察细胞凋亡。用免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2和Bax表达的变化。用免疫荧光共聚焦显微镜和免疫印迹法观察Bax在细胞内的分布。结果以4μmol/L STS处理心肌细胞,随着处理时间的延长,细胞中caspase-3的活性逐渐增加,与对照组比较,8 h达到峰值(P<0.01)。Hoechst-33258荧光染色显示,多数细胞核呈现核分叶。STS诱导心肌细胞凋亡过程中,Bcl-2和Bax的水平与对照组比较无显著变化。正常细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,在STS处理的细胞中,Bax明显聚集于线粒体上,呈现明显的线粒体的转位。STS诱导心肌细胞凋亡过程中,胞质片段Bax的水平明显下降,而线粒体片段Bax的水平明显升高,进一步证实STS诱导细胞凋亡过程中伴有明显的Bax线粒体转位。结论STS诱导细胞凋亡中,伴有明显的Bax由胞质向线粒体的转位。

Staurosporine衍生物的合成

以发酵产物 staurosporine为原料 ,提供了其 3个重要衍生物的高效合成方法。

蛋白激酶抑制剂staurosporine增强抗癌药对肿瘤细胞的杀伤

蛋白激酶抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ５ｎｇ·ｍｌ￣（－１）阻断人胚肺２ＢＳ细胞于Ｇ＿１／Ｓ边界，而不影响人胃癌ＢＧＣ－８２３细胞的周期运行。细胞周期时相特异药物阿霉素、阿糖胞苦或博莱霉素Ａ＿５与ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ合用，２ＢＳ细胞和ＢＧＣ－８２３细胞的ＩＣ＿（５０）均发生改变，显示低剂量ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ增强抗癌药对肿瘤细胞的杀伤。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）的荧光探针ｍＢＣＬ测定不同细胞周期时相的ＧＳＨ，发现ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ使２ＢＳ细胞中ＧＳＨ含量显著增高，而使ＢＧＣ－８２３细胞中ＧＳＨ含量显著下降。Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对正常和肿瘤细胞周期行进及胞内ＧＳＨ水平的不同影响，可能是它增强抗癌药物对肿瘤细胞杀伤作用的原因。

Staurosporine引起正常和肿瘤细胞内Ca^(2+)和CaM水平发生变化

低剂量Staurosporine可以使正常细胞可逆地阻断于G1期,但对肿瘤细胞的周期运行不发生任何影响。本文利用显微光度术,测定了单个细胞内Ca^(2+)、活化钙调素和总钙调素的含量,结果表明:5ng/mL staurosporine作用于细胞18h,使正常细胞2BS G1和S期总CaM含量降低;而BGC-823细胞各周期时相总钙调素含量不发生改变;钙活化钙调素增加。Staurosporine阻断2BS细胞于G1期而不影响BGC-823的周期运行可能与Stauro-Sporine使2BS G1期细胞的钙调素降低以及抑制了2BS细胞的P^(107)磷酸化有关。

Staurosporine诱导人乳腺癌MCF7/GFP-Bax非受体依赖途径的细胞凋亡对Bax自胞浆至线粒体转移定位的影响

以建立的人乳腺癌MCF7细胞GFP-Bax稳定表达细胞株(MCF7/GFP-PBax),观察staurosporine(STS)诱导的非受体途径的细胞凋亡对Bax自胞浆转移定位于线粒体的影响。荧光显微镜观察凋亡细胞Bax从细胞浆至线粒体转移和细胞核染色体断裂,检测STS诱导细胞凋亡的量效和时效关系。免疫荧光法观察GFP-Bax从细胞浆转移至线粒体与定位、细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)释放和Annexin V染色。MTT法测定STS的细胞毒作用,TMRE观测对细胞线粒体膜电位(ΔΨm)与功能的影响。Western blotting方法分析STS诱导的细胞凋亡的信号转导途径和作用机制。结果STS可明显促进Bax从细胞浆转移至线粒体与定位、细胞色素c释放,Western blotting显示JNK特异抑制剂SP600125可抑制STS诱导的细胞pJNK表达,表明STS作用机制与激活JNK信号通路相关。

PKC激活剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine对大肠癌HT-29细胞黏附作用的影响

目的 探讨蛋白激酶C(PKC )激活剂佛波酯PMA和PKC抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT -2 9细胞黏附作用的影响。方法 采用体外细胞培养观察、细胞黏附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)测定、Westernblot分析黏附分子E Cadherin(E Cad)、LamininReceptor(LnR)、αCatenin和αCatenin表达等方法,研究PMA和SP对HT- 2 9细胞黏附作用的影响。结果 从体外细胞培养观察和黏附HUVECs实验结果发现,10 0nmol/LPMA处理后,和培养液对照组相比可见HT- 2 9细胞由圆形变成成纤维细胞样生长,细胞发生游走、扩散,HT -2 9细胞间黏附减弱,而对HUVECs的黏附增强(P <0 .0 5 )。而10 0nmol/LPMA和10 0nmol/LSP联合处理HT 2 9细胞,可见细胞成片生长,HT- 2 9细胞间黏附增强,而对HUVECs的黏附则降低(P <0 .0 5 )。Westernblot分析结果提示,培养液对照组细胞可较高水平表达E Cad、LnR ,而低水平表达αCatenin、αCatenin。10 0nmol/LPMA作用细胞可诱导HT- 2 9细胞LnR表达水平增强,而E Cad表达水平轻度减弱,对αCatenin、α- Catenin表达水平无作用。而SP可拮抗PMA的作用,使LnR表达水平降低,E Cad表达水平增强,而对α- Catenin和α- Catenin的表达亦无影响。结论 PKC激活剂佛波酯PMA可促使肿瘤细胞间的同质性黏附能力减弱,与HUVECs间?

敏感和抗性的白血病HL60细胞对staurosporine诱导凋亡的不同反应(英)

用对蛋白激酶具有强烈抑制、作用广泛的抑制剂staurosporine（Sta），研究敏感和抗三尖杉酯碱的人白血病HL60细胞中凋亡和多药抗药性的关系．Sta均能诱导2种细胞发生典型的凋亡，但抗性细胞发生凋亡需更长的时间，凋亡的细胞数减少．Sta增加柔红霉素在抗性细胞内的积聚，说明其能逆转多药抗药性．在抗性细胞凋亡过程中，mdrl基因表达没有变化，c-myc基因表达稍有增加．结果显示：Sta能诱导敏感和抗三尖杉酯碱的HL60细胞发生凋亡，mdrl基因表达与凋亡过程无关．

Staurosporine诱导RGC-5细胞分化作用的研究

目的观察Staurosporine是否可以诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)的分化。方法正常培养RGC-5细胞,应用500nmol/L Staurosporine诱导RGC-5细胞分化,并在诱导后不同时间段连续观察细胞形态的变化。应用免疫荧光检测视网膜神经节细胞(RGCs)阳性标志因子Thy-1和Brn-3的表达,应用Western Blot、RT-PCR分别定量检测诱导分化后RGC-5细胞中的Thy-1和Brn-3蛋白表达及mRNA的转录情况。结果应用500nmol/L Staurosporine诱导后的RGC-5形态上表现出增生停止,胞体周围纤长轴突生长,轴突末端可见类似突触结构。500nmol/L Staurosporine可以诱导RGC-5细胞中RGCs阳性标志因子Thy-1和Brn-3转录及表达上调。结论500nmol/L Staurosporine可以有效地诱导RGC-5细胞向成熟RGCs分化。

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine与脑膜瘤细胞增生的相互关系

目的研究蛋白激酶C信号传导系统在人体外低代培养脑膜瘤细胞增生中的调节作用。初步探讨蛋白激酶C抑制剂对培养的脑膜瘤细胞增殖的影响及其作用机制。方法选取手术切除的新鲜脑膜瘤组织,常规早期传代细胞培养方法。观察蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对细胞增殖的抑制率与基础磷脂酰肌醇(PI)转换率,比较分析上述两者间的相互关系。结果低代培养脑膜瘤细胞的增殖对蛋白激酶C抑制剂Staurosporine表现出剂量依赖性抑制效应。蛋白激酶C抑制剂对细胞增殖的抑制率与基础PI转换率之间存在正相关,r=0.58,P<0.01。结论蛋白激酶C信号传导系统介入人体外低代培养脑膜瘤细胞增生的调节。

Staurosporine诱导心肌细胞氯通道电流的电生理学特性

目的探讨staurosporine(STS)诱导乳鼠心肌细胞凋亡的早期,凋亡性容积减少(AVD)发生时,是否有氯通道电流的产生及其电生理学特性。方法分别采用低渗组的灌流液和含STS的等渗组灌流液处理原代培养的SD乳鼠心肌细胞,以膜片钳全细胞记录法记录电流。结果①以低渗灌流液处理的心肌细胞时,可记录到氯通道电流。该电流呈现类似容积敏感性氯通道电流(volume-sensitive chloride channel current,ICl,Vol)的电生理学特性:即外向整流性、高电位刺激下的时间依赖性失活及对氯通道阻断剂4,4′-异二硫氮氐2,2′-二磺酸(DIDS)的敏感性。②以含4μmol/L STS的等渗液灌流心肌细胞时,也可记录到类似低渗诱导产生的氯通道电流,具有ICl,Vol的电生理学特性,且用氯通道阻断剂500μmol/L DIDS后,在+40 mV、+60 mV、+80 mV及+100 mV时,能够明显电压依赖性地阻断该电流。结论首次应用STS在培养乳鼠心肌细胞中记录到类似容积敏感性氯通道电流。

M-CSF和STAUROSPORINE促进小鼠腹腔巨噬细胞巨涎蛋白摄取OX-LDL

目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和蛋白激酶C抑制剂(STA)对小鼠腹腔巨噬细胞 (MPM)巨涎蛋白摄取氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)的影响。方法:M-CSF与蛋白激酶C抑制剂STA预处理MPM后制备膜蛋白,开展SDS-PAGE电泳及配体印迹试验,测定不同条件下巨涎蛋白结合[125I]OX-LDL的值。结果:MPM 膜蛋白经唾液酸酶预处理后,巨涎蛋白与[125I]OX-LDL的结合值为(2．45±0．46)ΜG/G细胞蛋白,显著低于对照组的 (58．38±1．78)ΜG/G细胞蛋白。用M-CSF与STA预处理MPM后,处理组与对照组巨涎蛋白结合配体[125I]OX-LDL 呈现一趋向饱和的浓度曲线,经线性回归得两类似平行的直线,M-CSF组BMAX(453．59±15．39)ΜG/G蛋白,显著高于对照组的BMAX(322．77±12．54)ΜG/G蛋白,而KD值变化不大。STA处理组BMAX(362．40±15．31)ΜG/G蛋白,KD值为 (15．10±2．67)MG/L,对照组BMAX为(264．76±11．29)ΜG/G蛋白,KD值为(17．43±2．98)MG/L。结论:巨涎蛋白接受M- CSF和STA的上调作用,通过增加其在MPM表面数目而促进对OX-LDL的摄取,促进泡沫细胞的形成。

Staurosporine对CMK细胞增殖和分化的影响

目的 :探讨Staurosporine(ST)对原始巨核细胞白血病细胞系 (CMK)的增殖分化作用。方法 :采用MTT分析方法及流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :ST呈浓度依赖性地抑制CMK细胞的增殖 ,IC50 为 5 0nmol L ;ST可将CMK细胞阻抑在G1 期 ,从而减少S和G2 M期的细胞 ;以巨核细胞分化特异性膜表面抗原CD41为指标 ,80nmol L的ST可使CMK细胞CD41抗原表达率明显增加。结论 :ST可抑制CMK细胞的增殖 ,诱导其分化 ,ST作为一种新的抗肿瘤因子具有与其他抗肿瘤药物不同的作用机制。

蛋白激酶C抑制剂staurosporine对人结肠癌COLO320细胞周期的影响

目的探讨蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)抑制剂staurosporine(STS)对人结肠癌细胞株COLO320的增殖抑制、凋亡诱导及对细胞周期的影响。方法在培养的COLO320细胞中,加20、60及100ng/mLSTS和100ng/mL佛波酯(PMA),作用24h后,用MTT法测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化。结果STS抑制COLO320细胞生长,24h的IC50为55ng/mL。20、60及100ng/mLSTS分别作用细胞24h后,发现G0/G1期细胞分别为(47.30%±1.53%)、(49.50%±1.54%)和(51.60%±2.12%),G2/M期细胞分别为(30.45%±1.32%)、(34.50%±1.23%)和(37.70%±1.82%);100ng/mLPMA组G0/G1期细胞为(57.10%±1.89%),G2/M期细胞为(24.70%±0.35%);空白对照组G0/G1期细胞为(50.60%±1.69%),G2/M期细胞为(1.85%±0.78%)。20、60及100ng/mLSTS组与100ng/mLPMA组及空白对照组比较,STS使细胞G0/G1期均减少(P<0.05)及G2/M期均明显增加(P<0.01)。STS作用24h后细胞的G1期前出现明显的凋亡峰。结论STS通过抑制PKC的活性,使细胞被阻滞于G2期,从而抑制COLO320细胞的增殖及诱导细胞凋亡。

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对HeLa细胞周期的影响

用蛋白激酶C的抑制剂Staurosporine(10nmol/L)处理HeLa细胞,明显抑制HeLa细胞的增殖。这种抑制作用不是由于引起细胞死亡,而是因为细胞被阻断在G2期。这种阻断作用伴随着HeLa细胞多倍体的形成,提示Staurosporine抑制了HeLa细胞蛋白激酶C活性后引起的细胞阻滞,对细胞核的周期运转没有影响。进一步的探讨发现这种抑制作用可能是通过干扰细胞骨架的正确分布形成的,表明蛋白激酶C对于HeLa细胞由G2到M期正确过渡起重要作用。

蛋白激酶C抑制剂staurosporine对HeLa细胞周期的影响

蛋白激酶Ｃ抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ对ＨｅＬａ细胞周期的影响石法武＊任洪波张兆山＊＊王会信周廷冲（军事医学科学院基础医学研究所，＊＊生物工程研究所，北京１００８５０ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅｏｎｔｈｅｃｅｌｃｙｃｌｅｏｆＨｅ...