益生菌固态发酵独活茎叶工艺的优化

试验旨在优化益生菌固态发酵独活茎叶工艺,提高独活茎叶中蛇床子素的含量。试验采用解淀粉芽孢杆菌SSYB发酵独活茎叶,在单因素试验的基础上,通过正交试验设计优化固态发酵工艺,采用高效液相色谱法测定发酵前后独活茎叶中蛇床子素的含量。结果显示,优化的独活茎叶发酵工艺为发酵时间72 h、发酵温度37℃、接种量5%、含水量65%。在该条件下,独活茎叶中蛇床子素含量为1.81 mg/g,比发酵前极显著提高了45.97%(P<0.01)。研究表明,通过优化解淀粉芽孢杆菌SSYB固态发酵独活茎叶的工艺,提高了独活茎叶中蛇床子素的含量。

不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮类成分的比较及其聚类分析

目的比较不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮的含量并对其进行聚类分析,为该药材资源的综合开发利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法建立黄芪中4种异黄酮的含量测定方法并对不同产地黄芪根、茎、叶中异黄酮类成分进行含量测定;通过IBM SPSS 19.0和R语言Pheatmap包对不同产地黄芪进行聚类分析。结果不同产地黄芪根、茎、叶中4种异黄酮含量差异较大;基于SPSS和R语言的聚类分析均支持20批次不同产地样品被分为2类,其中甘肃和陕西样品聚为一类,山西、黑龙江和内蒙古黄芪聚为另一类。结论所建立黄芪4种异黄酮成分含量测定及聚类分析方法可为黄芪药材的真伪鉴别和质量评价提供依据,也可为黄芪各个部位的综合利用提供一定的参考。

江油附子茎段和茎尖植株再生技术的初步研究

选择生长健壮、无病虫害的附子茎段和顶芽为外植体,接种到附加不同植物生长素的培养基上进行离体培养研究.结果表明:MS+6-BA 2 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1的培养基诱导无菌苗效果最佳,1/2MS+IBA 1 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1生根培养基,生根率达80%.利用该技术可以成功的建立附子再生植株的实验体系.

人参茎叶总皂苷和人参根总皂苷提取物特征图谱鉴定

采用高效液相色谱法鉴别人参根总皂苷和人参茎叶总皂苷。采用色谱柱Hypersil C18（4．6mm×250mm，5μm），流动相：A为乙腈，B为0．1％磷酸水溶液，梯度洗脱0～30min19％A，30～35min19％～24％A，35—60min24％-40％A。柱温：35℃，检测波长：203nm，流速：1．3mL/min。试验结果表明人参根总皂苷和人参茎叶总皂苷的特征图谱有明显区别，为人参皂苷提取物质量控制新模式的建立提供了依据。

太子参茎叶对断乳仔猪抗氧化和抗应激能力的影响

试验旨在研究太子参茎叶对断乳仔猪抗氧化和抗应激能力的影响。将60头杜-长-大断乳仔猪,随机分为4组,每组3个重复,每个重复5头。空白对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加0.5%、1%和1.5%的太子参茎叶粉,分别于50日龄和70日龄采血,检测血清抗氧化和抗应激指标。结果显示,太子参茎叶添加组试验猪与空白对照组相比,血清中MDA含量显著降低,GSH-Px和SOD活性显著升高,T3、T4和皮质醇含量显著升高。结果表明,太子参茎叶能够显著提高断乳仔猪抗氧化和抗应激能力。

黄芪营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量测定

目的：测定黄芪2年生和3年生营养生长期茎叶毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量。方法：采用HPLC,色谱条件为色谱柱C18（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长分别为250 nm,203 nm。结果：2年生黄芪营养生长期毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量变化范围分别为0.1853~0.2940,0.2337~0.5367 mg·g-1;3年生黄芪营养生长期毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量变化范围分别为0.2180~0.3830,0.2733~0.6150 mg·g-1。结论：毛蕊异黄酮苷和黄芪甲苷含量3年生高于2年生,随生长时间的延长含量也随之增加;本研究也改进了毛蕊异黄酮苷含量测定方法。

Profiling and identification of chemical components of Shenshao Tablet and its absorbed components in rats by comprehensive HPLC/DAD/ESI-MS^n analysis

Shenshao Tablet(SST),prepared from Paeoniae Radix Alba(PRA)and total ginsenoside of Ginseng Stems and Leaves(GSL),is a traditional Chinese medicine(TCM)preparation prescribed to treat coronary heart disease.However,its chemical composition and the components that can migrate into blood potentially exerting the therapeutic effects have rarely been elucidated.We developed an HPLC/DAD/ESI-MS^n approach aiming to comprehensively profile and identify both the chemical components of SST and its absorbed ingredients(and metabolites)in rat plasma and urine.Chromatographic separation was performed on an Agilent Eclipse XDB C_(18) column using acetonitrile/0.1% formic acid as the mobile phase.MS detection was conducted in both negative and positive ESI modes to yield more structure information.Comparison with reference compounds(t_R,MS^n),interpretation of the fragmentation pathways,and searching of in-house database,were utilized for more reliable structure elucidation.A total of 82 components,including 21monoterpene glycosides,four galloyl glucoses,two phenols from PRA,and 55 ginsenosides from GSL,were identified or tentatively characterized from the 70% ethanolic extract of SST.Amongst them,seven and 24 prototype compounds could be detectable in the plasma and urine samples,respectively,after oral administration of an SST extract(4 g×kg^(–1))in rats.No metabolites were observed in the rat samples.The findings of this work first unveiled the chemical complexity of SST and its absorbed components,which would be beneficial to understanding the therapeutic basis and quality control of SST.

蒙古黄芪茎叶多类型资源性化学成分分析与价值评价

通过分析和评价蒙古黄芪茎叶多类型资源性化学成分,为其资源化利用提供数据支撑。分别采用凯氏定氮法、过滤法、紫外-可见分光光度法对蒙古黄芪茎叶中粗蛋白、粗纤维、可溶性糖类成分进行分析;采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱串联(UPLC-TQ-MS)法对蒙古黄芪茎叶核苷类、氨基酸类、黄酮类及皂苷类成分进行分析。结合主成分分析对蒙古黄芪茎叶资源性成分质量差异进行综合评价。结果表明蒙古黄芪茎叶中粗蛋白、粗纤维、总多糖、还原糖平均质量分数分别为5.11%、30.33%、11.03 mg·g^(-1)、31.90 mg·g^(-1);检测出6种核苷类成分、15种氨基酸类成分、22种黄酮类成分和1种皂苷类成分,平均总量分别为1.49 mg·g^(-1)、6.00 mg·g^(-1)、1.86 mg·g^(-1)、35.67μg·g^(-1);不同采收期、不同生长年限蒙古黄芪茎叶各类型资源性化学成分含量差异显著;主成分分析结果表明宁夏产蒙古黄芪茎叶质量较优。研究结果可为蒙古黄芪茎叶资源化利用提供参考和依据。

不同产地蒙古黄芪茎叶UPLC指纹图谱建立及化学模式识别研究

目的建立蒙古黄芪Astragalus membranaceus茎叶UPLC指纹图谱及含量测定方法,并对不同产地多个批次蒙古黄芪茎叶样品进行比较分析,为蒙古黄芪茎叶资源的利用与质量控制提供参考。方法采用ACQUITYTMUPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长为350 nm,建立蒙古黄芪茎叶指纹图谱;采用电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF/MS)对共有峰进行鉴定;同时建立其含量测定方法。结合聚类分析和主成分分析法,对不同批次蒙古黄芪茎叶进行质量评价。结果建立了蒙古黄芪茎叶UPLC指纹图谱,共标定了25个共有峰,并鉴定了其中13个色谱峰,均为黄酮类成分;建立了异槲皮苷、紫云英苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷的含量测定方法;17批黄芪茎叶的相似度在0.933~0.987;通过聚类分析将样品分为2大类;主成分分析与聚类分析结果一致。结论通过UPLC指纹图谱结合化学模式识别方法,建立了一种快速、有效的蒙古黄芪茎叶品质评价方法,可为蒙古黄芪茎叶的资源化利用提供客观依据。

液质联用技术追踪生物碱类成分在川乌茎叶生长周期的动态变化规律

目的研究川乌茎、叶中生物碱类成分在不同生长期的含量变化。方法采用Phenomenex C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),质谱采用ESP多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式扫描;建立HPLC-MS/MS方法同时测定川乌茎叶中乌头碱、新乌头碱、印乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、尼奥林、附子灵、宋果灵、塔拉乌头胺、去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱14种生物碱的含量。结合主成分分析(PCA)追踪川乌茎叶在生长过程中不同生物碱的含量变化规律。结果 14种生物碱在各自浓度范围内线性关系良好(r^2>0.990 0),定量限为2.27～18.27 ng/mL,平均回收率在94.73%～104.50%。结果表明,川乌茎叶中均含有相当量的生物碱,且茎中生物碱总量高于叶,茎在5、6、7、8月的生物碱总量分别为0.087 1%、0.182 8%、0.141 0%、0.199 4%,呈现波浪形上升趋势,8月份到达峰值;叶在5、6、7、8月生物碱总量分别为0.074 7%、0.075 9%、0.0814%、0.0589%,呈现出先上升后下降的变化趋势,叶中生物碱的总量7月最高。结论 PCA发现茎、叶中生物碱含量在不同时期表现出不同的变化趋势。茎中生物碱在采收期达到峰值,生物碱含量可观,具有成为新药用资源的潜力与开发价值。

丹参茎叶提取物抗氧化活性物质基础与量效关系研究

目的以7月份和12月份采收丹参茎叶的水提物和醇提物为研究对象,评价丹参茎叶提取物的抗氧化效应,并探讨丹参茎叶提取物抗氧化活性的物质基础。方法采用超高效液相-三重四级杆质谱联用技术(UPLC-TQ/MS)对各提取物中化学成分进行定性定量分析,明确丹参茎叶提取物中主要丹酚酸类化合物(丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B),基于1,1-二苯基-2-三硝基苦肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法和铁还原/抗氧化能力(FRAP)法对丹参茎叶提取物进行抗氧化活性评价,同时以市售丹参(根及根茎)样品作对照。结果 7月份采收丹参茎叶水提物(SY-7)抗氧化活性最强,且总酚酸的量最高(75.663 mg/g),其次为7月份采收丹参茎叶醇提物(CY-7),市售丹参提取物抗氧化活性及总酚酸的量均低于7月份采收丹参茎叶提取物。丹酚酸单体化合物丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B均具有明显抗氧化、清除自由基能力,且表现出明显的量效关系。结论丹参茎叶水提物和醇提物具有较强的体外抗氧化活性,且含有丰富的丹酚酸类化合物,其中含有的丹参素、咖啡酸、迷迭香酸和丹酚酸B具有明显抗氧化活性。

丹参及丹参茎叶水提物UPLC指纹图谱研究与丹酚酸类成分定量分析

目的:建立并比较丹参、丹参茎叶水提物UPLC特征指纹图谱,同时分析评价7种丹酚酸类成分(丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A),以期为丹参资源的综合利用提供科学依据。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~1 min,5%A;1~3 min;5%A→10%A;3~7 min,10%A→15%A;7~11 min,15%A→21%A;11~15 min,21%A→33%A;15~17 min,33%A→70%A;17~18 min,70%A→80%A;18~20 min,80%A;20~21 min,80%A→5%A),流速0.4 m L·min^(-1);检测波长为280 nm。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"建立对照图谱和进行相似度评价,SPSS 19.0进行主成分分析和聚类分析。结果:丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A线性范围分别为1.145~229、0.81~162、0.95~190、1.265~253、1.285~257、1.055~211和0.87~174μg·mL^(-1),R^2为0.999 8以上;平均回收率在97.3%~103.5%之间,RSD均小于3%(n=6)。结论:主成分分析将丹参、丹参茎叶各聚为一类,聚类分析和相似度评价表明丹参及其茎叶水提物指纹图谱具有一定相似性,相似度最高可达0.981,共有化学成分主要为丹酚酸类成分。定量分析表明不同批次丹参、丹参茎叶中丹酚酸类成分含量存在一定差异,但丹酚酸类成分的种类组成相一致。

LC-MS/MS法同时测定参芍胶囊中人参皂苷和芍药苷的含量

目的:建立高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定参芍胶囊中人参皂苷Rb2、Rd、Re、Rg1和芍药苷的含量。方法:采用Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱(0~10 min,15%乙腈→40%乙腈;10~13 min,40%乙腈→70%乙腈),流速0.3 mL·min-1,柱温40℃;采用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)模式,负离子检测。结果:人参皂苷Rb2、Rd、Re、Rg1和芍药苷的线性范围分别为0.01~12.66μg·mL^(-1)(r=0.999 7)、0.01~10.34μg·mL^(-1)(r=0.999 6)、0.02~17.44μg·mL^(-1)(r=0.999 1)、0.02~17.29μg·mL^(-1)(r=0.999 1)和0.01~11.76μg·mL^(-1)(r=0.999 9),平均加样回收率(n=6)均在96.8%~100.1%范围内。3批样品中人参皂苷Rb_2、Rd、Re、Rg_1和芍药苷的含量测定结果分别为3.903~3.990、6.555~6.628、10.69~11.42、7.024~8.381和84.65~86.87 mg·g^(-1)。结论:所建立的方法可用于参芍胶囊的质量控制。