菊花茎叶清除自由基动力学特性及抗氧化活性成分的在线筛选

目的本研究对菊花茎叶抗氧化活性和清除自由基动力学特性进行考察,在线筛选与清除自由基相关的活性成分。方法采用DPPH法和ABTS法观察菊花茎叶提取物的抗氧化活性,比较了样品浓度、反应温度和反应时间等影响因素对自由基清除率的影响,测定了菊花茎叶清除自由基活性的半数清除率(IC50)。以木犀草素葡萄糖醛酸苷、木犀草苷和咖啡酸等黄酮成分、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、B、C等酚酸成分为指标,采用HPLC法对反应前后菊花茎叶进行了含量测定,计算上述成分的消耗率。结果菊花茎叶的样品浓度、反应温度和反应时间均对其对清除DPPH自由基和ABTS自由基清除率有影响;菊花茎叶清除DPPH和ABTS自由基的IC50分别为0.395 mg·mL^(-1)、2.039 mg·mL^(-1)。与DPPH和ABTS自由基反应后,菊花茎叶样品中上述测定成分的含量均明显下降,推测上述成分可能是菊花茎叶抗氧化的活性成分。结论菊花茎叶具有较好的清除自由基活性,本研究初步明确其动力学特性,在线筛选出了抗氧化活性成分,为今后菊花茎叶的综合开发提供实验依据。

中国英语学习者对粘着词根的识别加工研究

英语派生词的词根可分为自由词根和粘着词根,前者可独立成词,后者不能。实验1采用词汇判断任务,探索汉语为母语的英语学习者是否具有粘着词根意识。实验比较了英语学习者对粘着词根(如clude)和仅一个字母之差的非词(如blude)的反应是否不同。实验2旨在探查英语学习者对自由词根与粘着词根的加工是否存在差异。相比无关的非词启动词(如breffer),含粘着词根的启动非词(如breclude)是否能促进目标词(如CONCLUDE)的识别;与自由词根(如relegal-ILLEGAL)条件相比,两者是否存在差异。两个实验结果均表明英语学习者与母语者相似,存在粘着词根表征,英语学习者对粘着词根的加工与对自由词根的加工没有显著差异。

脂肪干细胞及其衍生物促慢性创面愈合的研究进展

慢性创面一直是临床治疗中十分棘手的难题。脂肪干细胞(Adipose-derivedstemcells,ADSCs)因来源丰富,分离简单且容易扩增,多次传代后仍能保持其生物学特性等优点,已成为近年组织修复与再生研究的热点,利用ADSCs促进创面愈合也已被证明是一项十分具有前景的治疗策略。本文对ADSCs及其无脂肪细胞衍生物促慢性创面愈合的研究现状进行综述,以期为今后深入研究和临床应用提供参考。

不同方法及术后干预对翼状胬肉患者舒适度及疗效的影响

目的:探讨不同球结膜移植术及术后干预对翼状胬肉患者舒适度及疗效的影响。方法:选取2017年1月—2019年12月样本医院收治的200例(200眼)翼状胬肉患者作为研究对象,按随机数表法分为A、B、C、D 4组,每组50例(50眼)。A、B组采用切除术联合自体游离结膜瓣移植术,C、D组采用切除术联合角膜缘干细胞移植,B、D组术后佩戴角膜绷带镜。观察对比4组患者术后眼部不适、视力、角膜上皮愈合时间、治愈率及复发率情况。结果:4组患者术后均出现不同程度的眼部不适,3 d后缓解,2周后基本消失。术后1 d、3 d、7 d B组患者眼部不适较A组轻,D组患者眼部不适较C组轻,而A组与C组、B组与D组之间比较,差异无统计学意义(F=0.083,P>0.05);术后1 d、3 d 4组患者的裸眼视力均有不同程度的下降。术后1 d、3 d B组患者视力较A组高,D组患者视力较C组高,差异有统计学意义(F=3.026、3.088,P<0.05);4组患者术后角膜上皮愈合约需4~6 d,B组角膜上皮愈合时间较A组短,D组较C组短,差异有统计学意义(F=35.800,P<0.05);4组患者术后治愈率和术后翼状胬肉复发情况比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.632、1.031,P>0.05)。结论:切除术联合角膜缘干细胞移植对翼状胬肉患者治疗效果显著,复发率较低。佩戴角膜绷带镜可减轻术后眼部不适,有利于角膜上皮愈合和早期视力的稳定,对翼状胬肉的治疗具有积极意义。

甘薯脱毒及种薯(苗)繁育技术研究

中国是世界上最大的甘薯生产国,然而由于病毒病的存在,严重制约了甘薯产业的发展,建立通用的脱毒组培体系、高灵敏度的检测体系及高效的种薯(苗)繁育体系对甘薯产业发展具有重要意义。对12个主栽品种进行茎尖脱毒处理,建立了通用的脱毒组培体系MS+2 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,大多数品种的再生率在58%以上;获得SPFMV、SPCSV、SPLV、SPCFV和SPVG这5种病毒的特异性引物,该引物对病毒检测极限依次为10^(-6)、10^(-1)、10^(-4)、10^(-3)和10^(-3),具有较高的灵敏性;对脱毒品系进行筛选,获得优良脱毒株系甘12和粉薯2-2;建立脱毒种薯(苗)的三级繁育体系,即组培苗(一级)扩繁,温网室基质苗(二级)扦插扩繁和网棚大田苗(三级)繁育生产用种;进行洗苗速率(带根和不带根)对比试验,移栽方式(带根和不带根)与每孔移栽棵数(1~3棵)的双因素试验,结果表明不带根处理可显著提升洗苗速率,育苗前期每孔移栽棵数(1~3棵)在株高、茎粗、节间数方面无显著差异,带根处理前期生长具有优势,但二者成活率无显著差异,并不影响育苗结果。因此,该研究有利于甘薯病毒病防治、脱毒种薯(苗)推广和育苗成本的降低。

具有抗氧化能力的人脐带间充质干细胞制备及评价策略研究

目的:从人脐带中分离制备一种具有抗氧化能力的间充质干细胞(antioxidant mesenchymal stem cell,AO-MSC)并评价其细胞生物学特性。方法:采用无血清培养体系,结合胶原酶消化培养法以及胶原酶消化组织块培养法,从人脐带华通氏胶组织分离培养MSC。使用0.2%Ⅱ型胶原酶消化,未完全消化的组织块贴壁培养收获AO-MSC。以常规消化培养法为对照。成纤维细胞集落形成实验检测MSC集落形成能力;CCK-8检测MSC增殖能力;流式细胞术及免疫荧光染色检测MSC表面标志物;体外诱导分化评价MSC成脂成骨能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨和成脂关键转录因子的表达差异;RT-qPCR检测MSC抗氧化还原物质SOD-1、GSH、GAT、NQO1的表达情况。结果:本策略分离的AO-MSC在18 d汇合率为80%-90%,细胞呈漩涡状生长。流式细胞术及免疫荧光染色检测结果显示,AO-MSC高表达CD73、CD29、CD105、CD90,低表达CD31、CD45、HLA-DR;胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC自我更新及分化能力强于对照组MSC;对照组MSC体外成脂成骨能力强于胶原酶消化组织块培养法所得AO-MSC;RT-qPCR检测结果显示,胶原酶消化组织块培养法收获的AO-MSC其表达的抗氧化还原物质水平高于对照组。结论:成功制备了基于无血清体系的具备抗氧化能力的人脐带MSC。

RAP无激素方案治疗异基因造血干细胞移植后中重度闭塞性细支气管炎综合征的单中心回顾性分析

目的:回顾性分析RAP无激素方案--“芦可替尼、阿奇霉素、吡非尼酮”治疗异基因造血干细胞移植(allogeneic he⁃matopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后中重度闭塞性细支气管炎综合征(bronchiolitis obliterans syndrome,BOS)的临床疗效及影响因素。方法:纳入2018年1月1日至2023年12月31日于电子科技大学附属医院·四川省人民医院血液科行allo-HSCT并发生中重度BOS的患者14例,回顾性分析RAP无激素方案--“芦可替尼、阿奇霉素、吡非尼酮”的临床疗效及影响因素。结果:①有效率:3、6和12个月治疗总反应率分别为50.0%、57.1%和50.0%。治疗有效的8例患者在6个月时出现1秒用力呼气量(FEV1)%预测值(t=2.187,P=0.033)、6 min步行测试(t=2.338,P=0.023)、ECOG体能状态评分(t=2.681,P=0.013)和慢性移植物抗宿主病(chronic graft-versus-host disease,cGVHD)严重程度(Z=2.155,P=0.032)的明显改善。②生存:中位随访13(5,64)个月,5例(35.7%)死亡,死因为重症肺炎并发症。单因素分析提示RAP疗程延长与生存改善趋势相关(Wald值=2.892,P=0.089)。③激素暴露:14例均有长期糖皮质激素使用史,8例(57.1%)1个月内停用,2例(14.3%)减量50%以上。④安全性良好,主要不良反应为3级以下胃肠道反应及血液学毒性。结论:RAP无激素方案治疗allo-HSCT后中重度BOS显示良好疗效,允许快速停用糖皮质激素,提高患者生活质量和长期生存。但限于小样本量和回顾性设计,有待前瞻性研究进一步验证。

CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

FVFG术与髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死的临床价值比较

目的对比分析吻合血管游离腓骨移植(FVFG)术、髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死(ONFH)的临床价值。方法收集南阳文和骨科医院2021年3月至2023年5月103例ONFH患者临床资料,依照手术方案差异分为两组,对照组(51例)行髓芯干细胞植入术治疗,研究组(52例)行FVFG术治疗,比较两组围术期情况、术后并发症发生率以及术前、术后3个月Harris髋关节功能评分、血液流变学指标、骨代谢指标。结果研究组手术时间为(98.41±10.37)min,长于对照组(47.62±5.19)min(P<0.05);术后3个月,研究组血清25羟基维生素D3[25-(OH)D3]、Harris髋关节功能评分、血清骨碱性磷酸酶(BAP)分别为(24.16±2.55)ng/mL、(91.28±4.57)分、(0.75±0.12)pg/mL,均高于对照组(20.38±2.14)ng/mL、(88.51±6.02)分、(0.64±0.09)pg/mL,全血高切黏度、血清Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)、血浆黏度、全血低切黏度分别为(4.27±0.65)mPa·s、(132.71±18.69)ng/L、(1.84±0.52)mPa·s、(7.36±1.80)mPa·s,均低于对照组(4.80±0.71)mPa·s、(161.80±21.43)ng/L、(2.16±0.47)mPa·s、(8.94±1.72)mPa·s(P<0.05);研究组术后并发症发生率5.77%较对照组19.61%低(P<0.05)。结论与髓芯干细胞植入术比较,FVFG术治疗ONFH的手术时间较长,但对患者髋关节功能、血液流变学指标、骨代谢指标水平的改善效果更好。

茎尖脱毒生姜组培苗病原检测研究

利用PCR技术及扫描电镜技术对茎尖脱毒生姜组培苗进行病原检测。用细菌16SrRNA通用引物对生姜组培种苗根部和固体培养基混合提取的基因组DNA作为模板进行16SrRNA扩增,不能扩增出16S rRNA;Trizol提取生姜组培苗根部和茎段RNA经凝胶电泳检测无明显RNA目的条带;生姜组培苗茎段组织经扫描电镜观察组培苗茎段中无呈球形、杆状、卵圆形、丝状、冠状及蝌蚪形等规则形状的病毒颗粒,只见表皮、微管等组织。研究认为,PCR、RT—PCR和扫描电镜是茎尖脱毒生姜组培苗病原检测的有效手段。

人参茎叶多糖对大鼠血清自由基清除能力及抗疲劳能力的影响

研究人参茎叶多糖营养干预对大鼠血清自由基的清除能力的影响以及对大鼠抗疲劳能力的影响.以SD大鼠为对象,随机分为5组:安静对照组(A),运动对照组(B0),运动给药组(B1、B2、B3),每组12只.每天灌胃给药1次,灌胃剂量分别为0.8,1.2,1.6g·kg-1,A、B0组给予等量生理盐水.5周大强度训练后进行一次性力竭,测定大鼠力竭时间及血清SOD,CAT,MDA,BUN等指标.结果显示:B1、B2、B3组力竭时间长于B0组(P<0.01);SOD高于B0组(P<0.05);CAT高于B0组(P<0.05);B2、B3组MDA和BUN均高于B0组(P<0.05).提示通过人参茎叶多糖营养干预能够帮助消除大鼠由于大强度运动产生的自由基,推迟运动疲劳的出现时间,能够防止运动过程中机体对蛋白质的过度利用.

红薯梗中清除自由基活性成分的研究

本实验将红薯梗以甲醇粗提后,再用有机溶剂梯度萃取,并测定了各组分清除DPPH·以及O2-·自由基的活性。实验结果表明,红薯梗各提取物对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH·)和O2-·自由基有程度不同的清除作用。对两种自由基的清除均以乙醚组分效果最好,其中清除DPPH·的活性为同浓度茶多酚的1.6倍。提纯后的乙酸乙酯的主要组分,经紫外、可见分光光度计法的测定推测,其结构类型应为二氢黄酮类。

地黄脱毒技术研究

从地黄种茎育出的无菌幼苗上切取下的茎尖,用组织培养方法可诱导成去病毒幼苗。本试验还研究出适宜地黄茎段苗消毒的消毒剂为0.05％HgCl_2。适宜于茎段苗生长的MS培养基的琼脂浓度为0.7％,pH为7。诱导茎尖成苗的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L。繁殖脱毒苗所用的MS培养基为1/4大量元素+1/2微量元素,并用1/2食用白砂糖代替蔗糖,可使快繁成本降低48.7％。

大蒜茎尖脱毒技术及组织培养研究

采用山西栽培的５个地方名蒜茎尖离体培养，获得了无病毒蒜种。结果表明，茎尖大小为０．２～０．５ｍｍ，不定芽增殖培养基以Ｂ５或ＭＳ．附加１～２ｍｇ／Ｌ细胞分裂素和０．０１～０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，效果最佳。根系诱导在原培养基中加入０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，出根率可达９０％以上。成苗后于１２月份移栽到节能日光温室，成活率达９０％以上。经对脱毒苗形态观察和染色体检测，没有发生异常变化，植株生长健壮，遗传性稳定，产量高。

香石竹茎段培养无菌芽及微繁研究

以香石竹茎段为外植体,研究了不同品种、不同激素组合对4个香石竹品种无菌芽发生的影响,并以“玛丽”品种为试验材料,研究了不同激素种类及组合对试管苗增殖和生根的影响。结果表明:香石竹茎段诱导无菌芽的培养基为:MS+6-BA 1 mg/L,诱导率为83.3%;试管苗继代增殖的培养基为:MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.05 mg/L,增殖系数可达7.57;试管苗生根的培养基为:1/2 MS+IAA 0.1 mg/L,生根率为93.3%。试管苗移栽到珍珠岩和蛭石等比例配成的基质中,成活率达90%以上。

山药茎尖脱毒试管苗分化培养基的筛选

[目的]筛选山药茎尖脱毒苗分化培养基配方。[方法]选用MS为基础培养基,6-BA、2,4-D、NAA为激素处理因素和不同激素浓度处理水平的3因素3水平的试验设计,进行了山药茎尖脱毒苗分化培养基的筛选研究。[结果]MS+2.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D+3.0mg/LNAA为山药茎尖脱毒苗最佳分化培养基。[结论]该培养基能达到山药茎尖离体脱分化与分化之间的一种良好的平衡,是一种进行山药茎尖脱毒苗培养适宜的分化培养基。

无饲养层培养人胚胎干细胞方法的建立

人胚胎干细胞(humanembryonicstemcell,hES细胞)是当前医学研究的热点之一.然而hES细胞培养条件苛刻,通常需要采用鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryonicfibroblast,MEFs)饲养层来维持其未分化状态,成为目前hES细胞研究的瓶颈之一.本实验成功地将hES细胞接种在细胞外基质包被的六孔板上培养,传代20次后细胞仍然保持良好的未分化状态,各种hES细胞生物学特性(如表面标志物SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,OCT-4,碱性磷酸酶及体内外分化潜能等)均无改变;其冻存、复苏效果与生长在饲养层上的hES细胞无明显差异.因此,该无饲养层培养体系可以用于培养hES细胞,并为hES细胞转基因研究及大规模培养打下良好的基础.

甘薯茎尖脱毒技术研究进展

综述了甘薯病毒病的种类、危害、症状及传播方式 ,甘薯茎尖脱毒的生物学原理及进展 ;介绍了甘薯的茎尖培养、病毒检测及脱毒苗快繁技术 ;

人肺腺癌细胞系中肿瘤干细胞的分离培养及鉴定

目的：从人肺腺癌细胞系A549及H1299中分离富集含肿瘤干细胞的细胞王拉并鉴定其生物学特性。方法：用无血清悬浮培养的方法从人肺腺癌A549及H1299细胞株中富集得到肿瘤细胞珠。将肿瘤细胞球传代扩增，体外利用CCK-8法、平皿克隆以及Transwell小室实验，研究细胞球的增殖情况、自我更新和侵袭转移能力；通过RT-PCR检测干细胞特异性转录因子Oct4、Nanog基因表达情况；体内利用裸鼠移植瘤形成实验研究肺癌细胞球的成瘤能力。鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性。结果：在无血清悬浮培养下，A549及H1299细胞株3-6天后能形成稳定传代的肿瘤悬浮球，悬浮球的体外自我更新、克隆形成和侵袭转移等能力均高于其亲本细胞（P〈0．05）；干细胞核心基因Oct4和Nanog的mRNA表达水平明显升高（P〈0．05）；A549悬浮球可以明显提高裸鼠体内成瘤能力。结论：通过无血清悬浮培养法可有效富集A549及H1299细胞系中的干细胞成分，该法可成为快速易行构建肺腺癌干细胞模型的方法。

人大细胞肺癌干细胞样细胞的富集及其功能研究

背景与目的目前国内外还没有确切的、得到公认的肺癌干细胞的筛选标记分子、指标和方法,常用方法为通过流式细胞技术,借鉴其他肿瘤干细胞分选标记来分选肺癌干细胞,但其筛选特异性低、工作量巨大。本研究采用无血清悬浮培养法富集肺癌干细胞,对肺癌干细胞的筛选方法进行探索。方法采用添加生长因子的无血清培养基对人大细胞肺癌细胞株L9981进行悬浮培养,获得肺癌细胞球体。对含血清培养贴壁L9981细胞和无血清培养成球后的L9981细胞,通过显微镜下观察比较二者的生物学形态,应用Vi-cell细胞活力分析仪计数细胞并绘制生长曲线比较二者的增殖能力,通过Transwell实验研究它们的侵袭能力差异,并通过接种裸鼠观察二者在体内的成瘤性来研究肺癌细胞球体的生物学功能。结果与血清贴壁培养L9981细胞相比,无血清培养L9981细胞成球形生长,贴壁L9981和L9981球体细胞的倍增时间分别为(56.05±1.95)h和(33.00±1.44)h,球体细胞的侵袭和成瘤能力分别为贴壁L9981细胞的5倍和20倍。结论通过无血清悬浮培养的L9981细胞可以形成肺癌球体细胞群,L9981球体细胞的侵袭和成瘤能力均明显高于贴壁L9981细胞,显示L9981球体细胞中富集了肺癌干细胞样的细胞。无血清悬浮培养肺癌球体细胞可作为富集肺癌干细胞样细胞的一种候选方法。