脂肪干细胞及其衍生物促慢性创面愈合的研究进展

慢性创面一直是临床治疗中十分棘手的难题。脂肪干细胞(Adipose-derivedstemcells,ADSCs)因来源丰富,分离简单且容易扩增,多次传代后仍能保持其生物学特性等优点,已成为近年组织修复与再生研究的热点,利用ADSCs促进创面愈合也已被证明是一项十分具有前景的治疗策略。本文对ADSCs及其无脂肪细胞衍生物促慢性创面愈合的研究现状进行综述,以期为今后深入研究和临床应用提供参考。

CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

FVFG术与髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死的临床价值比较

目的对比分析吻合血管游离腓骨移植(FVFG)术、髓芯干细胞植入术治疗股骨头坏死(ONFH)的临床价值。方法收集南阳文和骨科医院2021年3月至2023年5月103例ONFH患者临床资料,依照手术方案差异分为两组,对照组(51例)行髓芯干细胞植入术治疗,研究组(52例)行FVFG术治疗,比较两组围术期情况、术后并发症发生率以及术前、术后3个月Harris髋关节功能评分、血液流变学指标、骨代谢指标。结果研究组手术时间为(98.41±10.37)min,长于对照组(47.62±5.19)min(P<0.05);术后3个月,研究组血清25羟基维生素D3[25-(OH)D3]、Harris髋关节功能评分、血清骨碱性磷酸酶(BAP)分别为(24.16±2.55)ng/mL、(91.28±4.57)分、(0.75±0.12)pg/mL,均高于对照组(20.38±2.14)ng/mL、(88.51±6.02)分、(0.64±0.09)pg/mL,全血高切黏度、血清Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)、血浆黏度、全血低切黏度分别为(4.27±0.65)mPa·s、(132.71±18.69)ng/L、(1.84±0.52)mPa·s、(7.36±1.80)mPa·s,均低于对照组(4.80±0.71)mPa·s、(161.80±21.43)ng/L、(2.16±0.47)mPa·s、(8.94±1.72)mPa·s(P<0.05);研究组术后并发症发生率5.77%较对照组19.61%低(P<0.05)。结论与髓芯干细胞植入术比较,FVFG术治疗ONFH的手术时间较长,但对患者髋关节功能、血液流变学指标、骨代谢指标水平的改善效果更好。

4个品种草莓茎尖组培快繁体系的构建

以近年来生产上应用较广的草莓优良品种红颜、章姬、香野和粉玉为研究对象,系统开展不同品种脱毒组培快繁技术研究。以各品种的茎尖为外植体,研究了4个品种草莓茎尖的不定芽诱导、增殖及生根情况、移栽成活情况等。研究表明章姬和香野最适宜的茎尖不定芽诱导和继代增殖培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA;红颜和粉玉最适宜的茎尖不定芽诱导培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,不定芽继代增殖培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA。4个品种最佳生根培养基为1/2 MS培养基。用蛭石进行移栽,成活率均超过95%。

北五味子藤茎精油EP-SFME法提取工艺优化及精油主要成分和抗氧化活性测定

为了解决传统精油提取工艺时间长、效率低、耗能高和成本高等问题,采用酶解预处理联合无溶剂微波法(EP-SFME)提取北五味子藤茎精油,依据单因素实验和响应面法,优化获得最佳提取工艺,通过二次回归模型考察微波功率、酶解温度、微波时间对北五味子藤茎精油产量的影响,并进行试验验证。同时,对北五味子藤茎精油进行了成分组成、抗氧化以及乙酰胆碱酯酶抑制活性分析。结果表明:通过二次多项式回归模型,试验失拟项F值为1.29,P值为0.3916,表明该模型拟合良好。决定系数(R~2)为0.9833,预测R~2为0.8551,表明预测值与实际值相关度较高,模型可应用于分析和预测北五味子藤茎精油产量。在最优工艺条件(酶解温度为50℃,微波功率为480 W,微波时间为45 min,酶用量为2%,酶解时间为2 h)下,北五味子藤茎精油产量为(3.21±0.03)mg/g。气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析结果表明,新鲜北五味子藤茎精油的主要活性成分是橙花叔醇、β-榄香烯和4-萜醇。在EP-SFME法提取的精油中,这3种主要成分的相对质量分数最高,特别是橙花叔醇的相对质量分数是水蒸气蒸馏法(SD)的2.09倍。另外,EP-SFME法提取的精油中的含氧化合物峰面积占比为33.02%,比SD法(15.63%)高17.39%。与SD法相比,EP-SFME法提取新鲜北五味子藤茎精油具有更强的抗氧化活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性。EP-SFME是一种更具有优势的提取新鲜北五味子藤茎精油的方法。

不同无血清培养体系对人脐带间充质干细胞生物学功能的影响

目的 探讨3种不同无血清培养体系对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)体外培养的生物学功能的影响。方法 取3株脐带组织,各分3组实验组,经贴壁法分别置于3组不同无血清培养体系(A组:纯化学成分合成的无血清培养体系,B组:血小板裂解物+基础培养基的无血清培养体系,C组:纤维蛋白原包被+含重组人蛋白质的无血清培养体系)中培养至第3代,比较其细胞增殖能力、细胞表型、三系分化能力以及免疫调节功能。结果 3组实验组细胞均呈长而扁平的梭形,贴壁生长,大小均一。其增殖曲线趋势相似,A组和B组P2、P3代次的增殖能力优于C组(P均<0.05)。3组实验组细胞均符合国际干细胞协会对hUC-MSC细胞表面标志物鉴定的要求,A组和B组P3代次的CD29和CD90的表达量均高于C组(P均<0.05),并且3组实验组均具有三系分化能力。3组实验组中P3代次的T淋巴细胞增殖率、Th1和Th17细胞亚群分泌的细胞因子比例均低于对照组,调节性T细胞(CD4+CD25+FOXP3+)比例均高于对照组,而3组实验组之间两两比较差异无统计学意义(P均> 0.05)。结论 3种不同无血清培养体系的hUC-MSC均能保持其基本的生物学特性和免疫调节活性,纯化学成分合成的无血清培养体系和血小板裂解物+基础培养基的无血清培养体系的增殖能力和细胞表面标志物表达均优于纤维蛋白原包被+含重组人蛋白质的无血清培养体系。

不同强度修枝对杉木木材密度、硬度及无节材比例的影响

为揭示修枝对杉木木材密度、硬度及无节材比例的影响规律,采用随机区组设计,在4年生杉木林中开展4种不同修枝强度(分别修除树干直径6、8、10、12 cm位置以下的枝条)处理试验。在修枝后20 a,按照平均标准木法选择不同修枝强度和对照处理标准木进行不同指标测定,研究修枝强度对杉木木材密度、硬度、干形、无节材比例等指标的长期影响。结果表明:修枝强度对杉木木材尖削度有显著影响,未修枝杉木木材尖削度为1.05%,修枝杉木尖削度均小于0.92%,修枝后杉木干形更趋于通直,树干形率增大。不同修枝强度处理杉木木材指标存在差异,修枝降低了杉木木材密度、硬度,但显著提高杉木无节材的比例,不同修枝处理无节材比例比未修枝提高5%~15%。10 cm修枝强度能明显增加无节材比例,但对杉木生长的影响不明显,是值得杉木无节材培育中推广的修枝强度。

糖尿病皮肤慢性创面无细胞治疗的进展与问题

背景:糖尿病皮肤溃疡是糖尿病的难治并发症之一,发生后迁延不愈。以往研究发现,间充质干细胞具有组织修复和炎症免疫调节能力,并且相关研究表明间充质干细胞可能主要是通过旁分泌效应分泌各种细胞因子和外泌体等,发挥组织与创面修复作用。因而可使用生长因子、间充质干细胞条件培养基及外泌体等治疗糖尿病皮肤慢性创面,以直接或间接机制对伤口愈合产生积极影响。目的:总结生长因子、条件培养基和外泌体等促进糖尿病皮肤慢性创面修复的相关机制、应用效果,以及无细胞治疗在当前研究的局限性。方法:由第一作者检索PubMed及Web of Science数据库中收录的相关文献,检索词为“Diabetes,Diabetic foot,Diabetic foot ulcers,Chronic wound,Mesenchymal stem cells,Cell-free,Exosomes,Growth factors,Conditioned mediums,Wound healing,Tissue repair,Angiogenesis,Regeneration,Biomaterial”,文献检索时限为2005年1月至2022年2月,经过阅读并筛选整理,选择与综述内容相符的文献,最终确定整理出75篇文献进行综述。结果与结论:①间充质干细胞条件培养基、外泌体和生长因子可通过不同机制改善局部微环境,促进慢性创面的愈合;②通过条件培养基、外泌体和生长因子与新兴的组织工程生物学材料(如细胞支架、水凝胶等)相结合,可使其发挥更强的促进慢性创面愈合的作用;③基于间充质干细胞条件培养基、外泌体、生长因子的无细胞疗法是促进慢性创面修复的极有前景的治疗策略,要实现由临床前研究转化到临床研究,确保其用于患者治疗的安全性,还需要进行更多的研究,以查明相应的治疗作用机制。

紫茎泽兰脱毒腐解茎在云南松育苗中的应用研究

本文以云南松为研究对象,探讨了紫茎泽兰脱毒腐解茎施用量对云南松幼苗出土、生长和生物量的影响。结果表明:紫茎泽兰脱毒腐解茎施用量对云南松幼苗出土、生长及生物量均有显著或极显著的影响,云南松幼苗出土、生长及生物量与紫茎泽兰脱毒腐解茎施用量之间成显著或极显著的二次抛物线关系。云南松出苗率、出苗势、出苗速率达到最大值时的紫茎泽兰脱毒腐解茎最佳施用量分别为36.0、41.0、41.3 g/kg;云南松幼苗高度、地径和根长达到最大值时的紫茎泽兰脱毒腐解茎最佳施用量分别为40.3、43.5、44.0 g/kg;云南松幼苗总干重、根重、茎重和叶重达到最大值时的紫茎泽兰脱毒腐解茎最佳施用量分别为40.56、50.00、55.00、42.50 g/kg。脱毒腐解后的紫茎泽兰茎粉末可用于云南松育苗,但应采用最佳施用量。

脐带间充质干细胞无血清培养体系的筛选

目的:筛选培养脐带间充质干细胞的无血清培养基。方法:采集新生儿脐带标本,将脐带剪成组织碎块,随机分为A组、B组、C组,分别加入MesenCult、Ultraculture和AM-V 3种不同的无血清培养基进行培养。观察3组脐带原代细胞游出时间和细胞形态,检测细胞的增殖能力、分化能力和表面抗原的表达。结果:A组、B组、C组原代细胞从组织块长出的平均时间分别是17 d、6 d、7 d。显微镜下观察可见,从组织块游出的细胞散在分布,呈短梭形或多角形,形态饱满,折光性好,生长融合时A组和B组细胞呈旋涡状生长,细胞折光性好,大小均一,C组细胞细长,折光性稍差,无明显的旋涡状生长的特征。3组均表达CD105、CD90、CD73抗原,不表达CD34、CD45、HLA-DR抗原;3组各标志物的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。3组间充质干细胞均具有向成脂细胞、成骨细胞分化的能力,C组分化能力弱于A组和B组。结论:B组培养体系用时较短,干细胞特性保持较好,价格适宜,可以作为大规模培养人间充质干细胞的首选培养基。

HO1工程化无细胞提取液联合石墨烯远红外光促糖尿病溃疡修复的疗效及机制

目的探讨HO1工程化无细胞提取液(CE)联合石墨烯远红外光(FIR)在糖尿病溃疡创面修复中的疗效及机制。方法将40只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠建立正常创面模型(对照组,n=8)及糖尿病溃疡模型(n=32),其中将糖尿病溃疡模型小鼠随机分为糖尿病组、HO1BMSCs-CE组、FIR组、联合组。构建过表达血红素氧合酶1(HO1)的骨髓间充质干细胞(BMSCs),获取工程化富含HO1蛋白的无细胞提取液(HO1BMSCs-CE),运用Western blot、ELISA、RT-PCR、Masson染色、免疫组化等检测各组创面愈合率、组织修复情况、创面氧化应激及炎症水平等。结果Western blot及ELISA检测结果显示,HO1BMSCs-CE中HO1、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-β(TGF-β)表达水平显著高于BMSCs-CE(P<0.05)。治疗后第5、11天,联合组的创面愈合率均显著高于HO1BMSCs-CE组和FIR组(P<0.05)。与HO1BMSCs-CE组及FIR组相比,联合组在治疗后第3、7、11天创缘组织中Ca2+浓度较高,TNF-α、IL-6表达水平较低,而ROS水平仅在治疗后第3、7天较低(P<0.05)。治疗后第14天,联合组创面组织的表皮厚度较厚,真皮Masson染色胶原容积分数和VEGF免疫阳性信号OD值均显著高于FIR组和HO1BMSCs-CE组(P<0.05);治疗后第7天,联合组创面组织中凋亡相关蛋白Caspase-3表达水平显著低于FIR组和HO1BMSCs-CE组(P<0.05)。结论糖尿病溃疡创面中运用工程化富含HO1蛋白的HO1BMSCs-CE联合石墨烯FIR治疗可明显抑制局部组织氧化应激反应,减少炎症因子释放和细胞凋亡发生,加快创面区域皮肤组织上皮化形成、真皮胶原和血管增生,较HO1BMSCs-CE或FIR治疗的促愈疗效更为突出,为探索临床糖尿病难愈性创面的新型联合治疗提供了基础研究证据。

无血清悬浮球状培养方法在人源前列腺癌干细胞富集纯化中的应用

目的:通过无血清悬浮球状培养方法富集纯化人源前列腺癌干细胞并进行小鼠体内外实验验证。方法:采用前列腺癌DU145细胞系,通过无血清悬浮球状培养的方法分离富集、培养纯化出肿瘤干细胞微球(Tumor spheres)。通过流式细胞仪鉴定干细胞表型,并采用动物成瘤实验,将不同数量级的DU145细胞和Tumor spheres细胞接种到NOD/SCID小鼠双侧腋下,观察成瘤率和成瘤速度。对分离富集、培养纯化的Tumor spheres进行诱导分化、增殖水平、活性氧簇、细胞周期检测。为进一步明确Tumor spheres的肿瘤干细胞特性,采用Western blot法检测特异性蛋白的表达,RT-PCR法检测相关mRNA表达。结果:采用无血清悬浮球状培养的方法可使对数生长期DU145细胞分离富集形成Tumor spheres,培养3代可达到纯化的目的,流式细胞技术鉴定其表达前列腺癌干细胞表型CD44(+)CD24(-/low)比例为(63±1)%,明显高于DU145细胞[(33±4)%](P<0.05)。动物成瘤实验显示,接种Tumor spheres侧肿瘤成瘤速度和成瘤率均高于接种DU145细胞侧。Tumor spheres具有更强的自我更新能力和分化潜能,细胞周期检测发现Tumor spheres中(81.67±0.68)%处于细胞周期的G_(0)/G_(1)期(P<0.05),同时Tumor spheres具有更低水平的活性氧簇ROS水平(P<0.05)。Tumor spheres高表达肿瘤干细胞HES1蛋白(P<0.05),Tumor spheres高表达肿瘤干细胞相关Notch1、HES1、HIF-1α、Sox2、Jagged1的mRNA(P<0.05)。结论:无血清悬浮球培养分离纯化DU145肿瘤干细胞的方法简便易行、获取量大、成瘤率高,Tumor spheres具有明确的肿瘤干细胞特性,可作为前列腺癌肿瘤干细胞研究的良好实验模型。

茎尖脱毒生姜组培苗病原检测研究

利用PCR技术及扫描电镜技术对茎尖脱毒生姜组培苗进行病原检测。用细菌16SrRNA通用引物对生姜组培种苗根部和固体培养基混合提取的基因组DNA作为模板进行16SrRNA扩增,不能扩增出16S rRNA;Trizol提取生姜组培苗根部和茎段RNA经凝胶电泳检测无明显RNA目的条带;生姜组培苗茎段组织经扫描电镜观察组培苗茎段中无呈球形、杆状、卵圆形、丝状、冠状及蝌蚪形等规则形状的病毒颗粒,只见表皮、微管等组织。研究认为,PCR、RT—PCR和扫描电镜是茎尖脱毒生姜组培苗病原检测的有效手段。

红薯梗中清除自由基活性成分的研究

本实验将红薯梗以甲醇粗提后,再用有机溶剂梯度萃取,并测定了各组分清除DPPH·以及O2-·自由基的活性。实验结果表明,红薯梗各提取物对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH·)和O2-·自由基有程度不同的清除作用。对两种自由基的清除均以乙醚组分效果最好,其中清除DPPH·的活性为同浓度茶多酚的1.6倍。提纯后的乙酸乙酯的主要组分,经紫外、可见分光光度计法的测定推测,其结构类型应为二氢黄酮类。

人参茎叶多糖对大鼠血清自由基清除能力及抗疲劳能力的影响

研究人参茎叶多糖营养干预对大鼠血清自由基的清除能力的影响以及对大鼠抗疲劳能力的影响.以SD大鼠为对象,随机分为5组:安静对照组(A),运动对照组(B0),运动给药组(B1、B2、B3),每组12只.每天灌胃给药1次,灌胃剂量分别为0.8,1.2,1.6g·kg-1,A、B0组给予等量生理盐水.5周大强度训练后进行一次性力竭,测定大鼠力竭时间及血清SOD,CAT,MDA,BUN等指标.结果显示:B1、B2、B3组力竭时间长于B0组(P<0.01);SOD高于B0组(P<0.05);CAT高于B0组(P<0.05);B2、B3组MDA和BUN均高于B0组(P<0.05).提示通过人参茎叶多糖营养干预能够帮助消除大鼠由于大强度运动产生的自由基,推迟运动疲劳的出现时间,能够防止运动过程中机体对蛋白质的过度利用.

地黄脱毒技术研究

从地黄种茎育出的无菌幼苗上切取下的茎尖,用组织培养方法可诱导成去病毒幼苗。本试验还研究出适宜地黄茎段苗消毒的消毒剂为0.05％HgCl_2。适宜于茎段苗生长的MS培养基的琼脂浓度为0.7％,pH为7。诱导茎尖成苗的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L。繁殖脱毒苗所用的MS培养基为1/4大量元素+1/2微量元素,并用1/2食用白砂糖代替蔗糖,可使快繁成本降低48.7％。

大蒜茎尖脱毒技术及组织培养研究

采用山西栽培的５个地方名蒜茎尖离体培养，获得了无病毒蒜种。结果表明，茎尖大小为０．２～０．５ｍｍ，不定芽增殖培养基以Ｂ５或ＭＳ．附加１～２ｍｇ／Ｌ细胞分裂素和０．０１～０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，效果最佳。根系诱导在原培养基中加入０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ，出根率可达９０％以上。成苗后于１２月份移栽到节能日光温室，成活率达９０％以上。经对脱毒苗形态观察和染色体检测，没有发生异常变化，植株生长健壮，遗传性稳定，产量高。

香石竹茎段培养无菌芽及微繁研究

以香石竹茎段为外植体,研究了不同品种、不同激素组合对4个香石竹品种无菌芽发生的影响,并以“玛丽”品种为试验材料,研究了不同激素种类及组合对试管苗增殖和生根的影响。结果表明:香石竹茎段诱导无菌芽的培养基为:MS+6-BA 1 mg/L,诱导率为83.3%;试管苗继代增殖的培养基为:MS+6-BA 0.2 mg/L+IBA 0.05 mg/L,增殖系数可达7.57;试管苗生根的培养基为:1/2 MS+IAA 0.1 mg/L,生根率为93.3%。试管苗移栽到珍珠岩和蛭石等比例配成的基质中,成活率达90%以上。

山药茎尖脱毒试管苗分化培养基的筛选

[目的]筛选山药茎尖脱毒苗分化培养基配方。[方法]选用MS为基础培养基,6-BA、2,4-D、NAA为激素处理因素和不同激素浓度处理水平的3因素3水平的试验设计,进行了山药茎尖脱毒苗分化培养基的筛选研究。[结果]MS+2.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D+3.0mg/LNAA为山药茎尖脱毒苗最佳分化培养基。[结论]该培养基能达到山药茎尖离体脱分化与分化之间的一种良好的平衡,是一种进行山药茎尖脱毒苗培养适宜的分化培养基。

无饲养层培养人胚胎干细胞方法的建立

人胚胎干细胞(humanembryonicstemcell,hES细胞)是当前医学研究的热点之一.然而hES细胞培养条件苛刻,通常需要采用鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryonicfibroblast,MEFs)饲养层来维持其未分化状态,成为目前hES细胞研究的瓶颈之一.本实验成功地将hES细胞接种在细胞外基质包被的六孔板上培养,传代20次后细胞仍然保持良好的未分化状态,各种hES细胞生物学特性(如表面标志物SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,OCT-4,碱性磷酸酶及体内外分化潜能等)均无改变;其冻存、复苏效果与生长在饲养层上的hES细胞无明显差异.因此,该无饲养层培养体系可以用于培养hES细胞,并为hES细胞转基因研究及大规模培养打下良好的基础.