基于GC-MS的血清代谢组学探究夏枯草茎叶酚酸抗慢性盆腔炎的作用机制

目的基于GC-MS的血清代谢组学探究夏枯草茎叶酚酸抗慢性盆腔炎的有效成分及其作用机制。方法本实验采用60只雌性大鼠,采用混合菌液加机械损伤对40只大鼠进行慢性盆腔炎造模处理,正常组10只大鼠不做处理,假手术组10只大鼠只做机械损伤。造模成功后,将模型大鼠分为模型组、康妇炎胶囊组、头孢克洛分散片组和夏枯草茎叶酚酸组,每组10只,连续给药21 d;取正常组、假手术组、模型组和夏枯草茎叶酚酸组、康妇炎胶囊组、头孢克洛分散片组大鼠血清进行代谢组学分析,并对筛选后的差异表达基因进行GO功能分析和KEGG通路富集分析。结果夏枯草茎叶酚酸能修复慢性盆腔炎组织病理损伤;代谢组学鉴定出47种代谢物,主要以糖类、氨基酸、有机酸、脂肪酸、多元醇等多种内源性物质为主;多因素分析表明,夏枯草可改善炎症大鼠血清代谢产物异常。主要差异代谢通路为氨基酸代谢、抗坏血酸和醛糖二酸代谢途径,主要差异代谢物为尿素、葡萄糖酸、D-葡萄糖醛酸、L-赖氨酸、甘氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸等,还影响机体苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,抗坏血酸和醛糖二酸代谢,苯丙氨酸代谢,花生四烯酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢。GO功能分析表明,对激素的反应、细胞对氮化合物的反应和磷酸化的正向调节等是主要参与的生物过程。KEGG通路富集结果显示,PI3K-Akt信号通路、甲状腺激素信号通路和内分泌抵抗等为主要富集的通路。结论夏枯草茎叶酚酸对慢性盆腔炎大鼠具有明显的治疗作用,其机制可能与作用于COBT、ADH1C、MAOB等靶点,干预PI3K-Akt信号通路、甲状腺激素信号通路和内分泌抵抗等信号通路,引起差异代谢物变化有关。

火焰原子吸收法测定夏枯草、桑叶、野菊花中十种微量元素

湿法消化样品 ,火焰原子吸收法测定三种草药中的 Mg、Ca、Zn、Mn、Co、Ni、Pb、Cd、Fe、Cu等 10种微量元素。回收率分别为 97.7%— 10 1.5 % ;96 .0 %— 10 5 .1% ;97.1%— 10 3.6 % ,相对标准偏差为 1.6 %—4 .5 % ;1.7%— 4 .7% ;1.7%— 4 .6 %。结果表明 ,三种草药均含有丰富的微量元素如 Mg、Ca、Zn、Mn、Fe、Cu等 ;为原料的开发和应用提供有效数据。

荧光猝灭法测定中药夏枯草、淡竹叶黄酮

通过能量转移建立了溶菌酶荧光猝灭法测定槲皮素。荧光猝灭法研究了不同外界因素如溶菌酶浓度、最佳反应时间、pH及温度对槲皮素猝灭溶菌酶荧光的影响。淡竹叶、夏枯草提取液对溶菌酶的荧光均可产生强猝灭作用,槲皮素对溶菌酶荧光猝灭呈线性关系;线性范围为8×10^(-7)~2×10^(-5)mol·L^(-1),相关系数R^2=0.9936检出限为1.31×10^(-6)mol·L^(-1)。并对夏枯草、淡竹叶两种样品黄酮含量进行分析。

基于比较转录组的夏枯草组织差异表达分析

目的分析夏枯草Prunella vulgaris果穗、茎、叶片转录组,挖掘夏枯草次生代谢产物生物合成的功能及调节基因。方法利用Illumina高通量测序技术对夏枯草不同组织进行转录组测序,并从差异表达的基因中鉴定次生代谢物生物合成的相关酶基因。结果在夏枯草的3个不同组织的转录本中,共有8 270个Unigenes在至少2个样品间差异显著。对不同组织差异表达的基因进行KEGG富集分析,结果表明,不同组织中苯丙素类生物合成的基因表达均有较大的变化。在夏枯草差异基因中分别搜索三萜类和酚酸类生物合成途径的关键酶,共鉴定到31个三萜类生物合成相关的Unigene,16个酚酸类生物合成相关的Unigenes,113个P450相关的Unigenes。结论本研究为后续发掘夏枯草次生物质代谢合成途径相关功能基因提供依据,也为夏枯草次生代谢物的生物合成调控研究奠定基础。

夏枯草茎叶总酚酸提取工艺优化及其化学成分研究

目的优化夏枯草茎叶总酚酸提取工艺,并分析其化学成分。方法以总酚酸的提取率为指标,在单因素考察的基础上运用Box-Behnken响应面试验设计原理进行3因素3水平的方案设计,得到最佳提取工艺。采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)对夏枯草茎叶总酚酸进行成分分析,通过高效液相色谱(HPLC)定量分析其主要成分咖啡酸和迷迭香酸含量。结果最佳提取工艺条件为:30倍水(V/m)、回流提取120 min、提取3次,总酚酸提取率为4.64%,总酚酸冻干粉得率为15.1%。通过UHPLC-QTOF-MS/MS鉴定出23个化合物,其中酚酸类成分8种。HPLC含量测定结果显示,咖啡酸含量为2.33 mg·g^(-1),迷迭香酸含量为7.37 mg·g^(-1)。结论响应面法优化得到的夏枯草茎叶总酚酸提取工艺简便可行,UHPLC-QTOF-MS/MS和HPLC定性定量分析方法快速灵敏,可为夏枯草茎叶的进一步研究奠定基础。