本研究旨在对水牛固醇携带蛋白2(sterol carrier protein 2,SCP2)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在水牛不同组织中的表达。以黄牛SCP2基因(登录号:NM_001033990.3)为种子序列成功克隆了水牛SCP2基因完整CDS区,该序列长1 632bp,...本研究旨在对水牛固醇携带蛋白2(sterol carrier protein 2,SCP2)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在水牛不同组织中的表达。以黄牛SCP2基因(登录号:NM_001033990.3)为种子序列成功克隆了水牛SCP2基因完整CDS区,该序列长1 632bp,可编码543个氨基酸;其与黄牛、绵羊、山羊、白鲸、人、家犬和家猫的同源性分别为95.9%、93.4%、92.4%、89.4%、88.3%、86.3%和86.9%,说明SCP2基因CDS区在不同物种间具有较高的保守性。聚类分析则表明水牛与黄牛的分子进化关系最近;氨基酸序列分析表明,SCP2蛋白的分子式为C_(2602)H_(4131)N_(709)O_(774)S_(298),分子质量为58.66ku,理论等电点(pI)为8.59,不稳定系数为27.94,平均亲水性为-0.215,属于碱性、稳定、亲水蛋白质;二级结构分析表明水牛SCP2蛋白由α-螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,其中α-螺旋占35.54%,无规则卷曲占48.99%,延伸链占15.47%,与三级结构预测结果一致;亚细胞定位分析表明,水牛SCP2蛋白分布在细胞质(43.5%)、过氧化物酶体(21.7%)、线粒体(17.4%)、细胞核(13.0%)和细胞骨架(4.4%);跨膜结构和信号肽预测分析表明,水牛SCP2蛋白不含跨膜结构和信号肽;磷酸化位点分析发现,水牛SCP2蛋白有13个Ser、3个Thr和2个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化位点;蛋白质结合位点预测结果显示,水牛SCP2蛋白含有12个蛋白质结合位点和1个多核苷酸结合位点;实时荧光定量PCR结果表明,水牛SCP2基因在肝脏中表达量最高,其他组织中表达量从高到低依次为乳腺、淋巴、肾脏、大肠、胃、肺脏、脾脏、卵巢、垂体、大脑和心脏。本试验为今后进一步探讨SCP2基因的功能奠定了基础。展开更多
目的:探讨升清胶囊对人肝细胞氧化损伤模型中胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)和固醇携带蛋白2(SCP2)m RNA及蛋白表达的影响。方法:选用人L-02肝细胞,分为正常组、模型组、空白血清组及升清胶囊组。采用H2O2诱导建立氧化损伤模型,空白血清组和...目的:探讨升清胶囊对人肝细胞氧化损伤模型中胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)和固醇携带蛋白2(SCP2)m RNA及蛋白表达的影响。方法:选用人L-02肝细胞,分为正常组、模型组、空白血清组及升清胶囊组。采用H2O2诱导建立氧化损伤模型,空白血清组和升清胶囊组每孔分别加入2 m L含10%血清或含药血清的RPMI-1640培养液,培养24 h后采用real-time PCR法和western-blot法分别检测各组肝细胞CYP7A1和SCP2 m RNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组CYP7A1 m RNA及蛋白表达降低,SCP2 m RNA及蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,空白血清和升清胶囊组CYP7A1m RNA及蛋白表达升高,SCP2 m RNA及蛋白表达降低(P<0.01);与空白血清组比较,升清胶囊组CYP7A1 m RNA及蛋白表达增强,SCP2 m RNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论:升清胶囊可以通过下调SCP2 m RNA及蛋白表达来减少肝细胞分泌胆固醇入胆汁,同时上调CYP7A1 m RNA及蛋白表达来加速胆汁酸生成,从而防止胆固醇结晶析出,达到降低胆结石形成的作用。展开更多
文摘本研究旨在对水牛固醇携带蛋白2(sterol carrier protein 2,SCP2)基因进行克隆及生物信息学分析,并检测其在水牛不同组织中的表达。以黄牛SCP2基因(登录号:NM_001033990.3)为种子序列成功克隆了水牛SCP2基因完整CDS区,该序列长1 632bp,可编码543个氨基酸;其与黄牛、绵羊、山羊、白鲸、人、家犬和家猫的同源性分别为95.9%、93.4%、92.4%、89.4%、88.3%、86.3%和86.9%,说明SCP2基因CDS区在不同物种间具有较高的保守性。聚类分析则表明水牛与黄牛的分子进化关系最近;氨基酸序列分析表明,SCP2蛋白的分子式为C_(2602)H_(4131)N_(709)O_(774)S_(298),分子质量为58.66ku,理论等电点(pI)为8.59,不稳定系数为27.94,平均亲水性为-0.215,属于碱性、稳定、亲水蛋白质;二级结构分析表明水牛SCP2蛋白由α-螺旋、无规则卷曲和延伸链构成,其中α-螺旋占35.54%,无规则卷曲占48.99%,延伸链占15.47%,与三级结构预测结果一致;亚细胞定位分析表明,水牛SCP2蛋白分布在细胞质(43.5%)、过氧化物酶体(21.7%)、线粒体(17.4%)、细胞核(13.0%)和细胞骨架(4.4%);跨膜结构和信号肽预测分析表明,水牛SCP2蛋白不含跨膜结构和信号肽;磷酸化位点分析发现,水牛SCP2蛋白有13个Ser、3个Thr和2个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化位点;蛋白质结合位点预测结果显示,水牛SCP2蛋白含有12个蛋白质结合位点和1个多核苷酸结合位点;实时荧光定量PCR结果表明,水牛SCP2基因在肝脏中表达量最高,其他组织中表达量从高到低依次为乳腺、淋巴、肾脏、大肠、胃、肺脏、脾脏、卵巢、垂体、大脑和心脏。本试验为今后进一步探讨SCP2基因的功能奠定了基础。
文摘目的:探讨升清胶囊对人肝细胞氧化损伤模型中胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)和固醇携带蛋白2(SCP2)m RNA及蛋白表达的影响。方法:选用人L-02肝细胞,分为正常组、模型组、空白血清组及升清胶囊组。采用H2O2诱导建立氧化损伤模型,空白血清组和升清胶囊组每孔分别加入2 m L含10%血清或含药血清的RPMI-1640培养液,培养24 h后采用real-time PCR法和western-blot法分别检测各组肝细胞CYP7A1和SCP2 m RNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组CYP7A1 m RNA及蛋白表达降低,SCP2 m RNA及蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,空白血清和升清胶囊组CYP7A1m RNA及蛋白表达升高,SCP2 m RNA及蛋白表达降低(P<0.01);与空白血清组比较,升清胶囊组CYP7A1 m RNA及蛋白表达增强,SCP2 m RNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论:升清胶囊可以通过下调SCP2 m RNA及蛋白表达来减少肝细胞分泌胆固醇入胆汁,同时上调CYP7A1 m RNA及蛋白表达来加速胆汁酸生成,从而防止胆固醇结晶析出,达到降低胆结石形成的作用。
