宁夏马铃薯僵顶植原体的分子鉴定

通过透射电子显微镜,在从宁夏回族自治区固原市彭阳县红河镇采集的表现叶片上卷、红叶、气生薯症状的马铃薯样品叶脉韧皮部筛管细胞内观察到大量直径为500~700 nm的球形植原体粒子。以提取的感病和健康马铃薯叶片总DNA为模板,应用植原体16S rRNA基因和rp基因通用引物进行PCR扩增,从感病样品中扩增得到了长度均约为1.2 kb的片段。对获得基因核酸一致性比较分析表明,马铃薯僵顶植原体宁夏株系16S rRNA基因与‘Candidatus Phytoplasma fragariae’槭树株系(MK501642)16S rRNA基因核酸一致性最高,为99.7%,rp基因与‘Ca.P.fragariae’云南马铃薯YN-2G株系(KJ144889)rp基因核酸一致性最高,为100%;基于16S rRNA基因和rp基因构建系统进化树发现,马铃薯僵顶植原体宁夏株系与16SrⅫ-E亚组成员聚在一起。基于透射电镜观察和基因序列比较分析,证明宁夏发生的马铃薯僵顶病与植原体侵染相关,该植原体在分类地位上属于植原体16SrⅫ-E亚组。

黄蒿丛枝病植原体的鉴定及其16SrDNA序列分析

黄蒿为菊科蒿属一、二年生草本植物,在医学和植物病害生物防治方面具有重要价值。植原体是一类重要的病原物,常引起丛枝、小叶、黄化、簇生等症状。从山东泰山山涧采集到表现丛枝症状的感病黄蒿植株,以叶片总DNA为模板,利用植原体通用引物对R16F2n/R2进行PCR扩增,获得了大小为1 244 bp的片段,与葡萄黄化(Stolbur)植原体(AF248959)和纸花黄化植原体(JX128698)一致性分别为99.4%和99.8%。系统进化树显示,黄蒿丛枝病植原体(登录号:KT899994)与葡萄黄化(Stolbur)植原体(AF248959)和纸花黄化植原体(JX128698)处于同一分支。植原体分类鉴定在线工具i Phy Classifier分析结果显示,所获得的片段与16Sr XII-A亚组代表性植原体(AF248959)相似系数为1.0,表明黄蒿丛枝病植原体归属于16Sr XII-A亚组。利用葡萄黄化(Stolbur)植原体特异性引物对STOL4f/r进行PCR扩增,获得大小为1 754 bp的片段,与葡萄黄化(Stolbur)植原体(AF248959)一致性为99.5%,i Phy Classifier分析结果显示,该片段(登录号:KU759570)与AF248959相似系数为1.0,验证了植原体通用引物对R16F2n/R16R2分析结果的可靠性。综上,将黄蒿丛枝病植原体的分类地位确定为16Sr XII-A亚组。