健脾中药诱导人胃癌细胞裸小鼠移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究健脾类中药复方四君子汤及以四君子汤等健脾药物为基础结合清热解毒、软坚散结中药组成的复方 SRRS 对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤的抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡的关系.方法采用人胃癌细胞 SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型.实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只:SRRS 方剂组,予240 g/L SRRS 煎剂0.5mL/d 灌胃;四君子汤组,予160 g/L 四君子汤煎剂0.5 mL/d 灌胃;对照组,予生理盐水0.5 mL/d 灌胃,共40 d.应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记法(TUNEL 法)、电镜,结合流式细胞仪分析技术,观察 SRRS 方剂及四君子汤的抑瘤作用与肿瘤细胞凋亡率及形态学改变,结果四君子汤、SRRS 方剂对人胃癌细胞裸小鼠移植瘤抑瘤率分别为34%,47%,TUNEL 法检测肿瘤细胞凋亡指数(AI)分别为:16%±3%,13%±3%,与对照组 AI:3%±1%比较,显著提高(四君子组 P<0.01;SRRS 方剂组 P<0.05,均为 t 检验);流式细胞分析示四君子汤组凋亡率:11%±6%,SRRS 方剂组:12%±6%,均较对照组:7%±1%提高(t 检验,P<0.05);但四君子汤和 SRRS 方剂组之间的凋亡率 TUNEL法和流式细胞分析均无差异.电镜下二中药治疗组见较多凋亡细胞和凋亡小体;对照组凋亡细胞和凋亡小体极少.结论中药四君子汤、SRRS 方剂在体内的抑瘤作用与诱导胃癌细胞凋亡有关,其诱导细胞凋亡作用可能主要与健脾药物有关.诱导肿瘤细胞凋亡可能是健脾药物抗癌作用的机制之一.

胃癌NET-1、Ki-67表达及意义

目的研究胃癌组织中NET-1和Ki-67表达与其预后的关系。方法分别应用免疫组化EnVision两步法检测86例胃癌组织中NET-1和Ki-67的表达,对两指标均阳性病例行免疫组化双标双染方法,原位检测两指标的表达特点和比邻关系。所有病例随访60月以上。结果胃癌组织中NET-1和Ki-67高表达分别为56.98%和74.42%,两指标阳性表达呈正相关(P<0.01)。两指标高表达分别与癌分化呈负相关(均P<0.01);与癌临床分期呈正相关(均P<0.05);与患者生存率呈负相关(均P<0.05),其3年、5年生存率均低于相应的低表达组或阴性组(P<0.05,P<0.01);NET-1表达还与癌淋巴结转移呈正相关(P<0.01)。结论NET-1、Ki-67基因蛋白高表达反映胃癌细胞群体增殖活性,上调癌进展,预后较差。

术前静脉术中腹腔化疗对胃癌手术影响的观察

目的 观察术前静脉化疗和术中腹腔化疗是否会延误手术时机 ,增加手术危险和术后并发症以及对术后恢复的影响。方法 对入院的进展期胃癌患者 ,在控制对观察结果影响较大因素的条件下 ,按入院顺序分为观察及对照两组比较。观察组术前静脉、术中腹腔用MMC、5 -Fu、CF(甲酰四氢叶酸钙 )化疗。对照组术前、术中不给化疗。记录术前住院日 ,术中失血、输血量和术后恢复情况 ,观察化疗的毒副作用。结果 观察组术前化疗后 2 4例出现毒副反应。术前住院日 ,术中失血、输血量 ,术后并发症和恢复情况 ,两组间无显著差异。结论 选用适当药物、剂量和疗程 ,术前静脉和术中腹腔化疗不延误手术时机 ,是安全可行的 ,但需严密监测化疗药物的毒副作用 ,采取相应的防治措施。

胃癌术后腹腔化疗疗效对比分析及评价

目的:评价胃癌术后腹腔化疗的疗效及其与胃癌生物学行为的相关性。方法:将1996年1月～2000年7月中国医科大学第一附属医院肿瘤科收治的进展期胃癌275例,分为根治切除组和姑息切除或探查组,再分别根据是否进行腹腔化疗分成实验组(128例)与对照组(147例),实验组行温热腹腔化疗,对照组未做腹腔化疗。应用Kaplan-Meier生存曲线分析两组各年生存率的差别,利用字2检验分析腹腔化疗对相同胃癌生物学行为类型病例近期生存率的影响。结果:Kaplan-Meier生存曲线显示腹腔化疗能有效提高胃癌根治性切除病例的1、3年生存率,分别提高13.8%和20.5%,中位生存期延长22个月,即使是生物学行为差的病例,腹腔化疗亦能提高其生存时间。本组晚期胃癌行姑息性切除术后病例的中位生存期提高了8个月,延长了生存时间。结论:腹腔化疗是进展期胃癌手术治疗后有效的辅助疗法。

阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨

目的 研究阿司匹林对 SGC- 790 1胃癌细胞生长的影响 ,并初步探讨其作用的分子机制。方法 采用 3H- Td R法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞 DNA合成及细胞周期的影响 ;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞 COX- 2表达的影响 ;Western blotting法及 EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c- fos表达及 AP- 1活化的影响。结果 胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后 ,其 3H- Td R掺入值明显降低 ,且与阿司匹林浓度呈高度负相关 ( r=- 0 .9,P<0 .0 5 )。细胞周期分析显示 ,阿司匹林主要作用于胃癌细胞 S期。免疫细胞化学染色显示 ,阿司匹林能下调胃癌细胞 COX- 2表达 ,且具有良好的量效关系。Western blotting检测表明 ,阿司匹林能降低胃癌细胞 c- fos蛋白的表达。EMSA分析显示 ,阿司匹林能有效抑制血清刺激的 AP- 1的 DNA结合活性。结论 阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长 ,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞 c- fos表达以及 AP- 1活化 ,进而抑制COX-

贲门癌患者血液凝固性变化以及茶多酚对其作用

目的：探讨恶性肿瘤时高凝状态的发病机制。方法：对贲门癌患者手术前后血小板数目、血小板聚集性、凝血因子活性进行了观察，并且施以氧自由基清除剂茶多酚，观察其对上述各指标的影响。结果：贲门癌患者血小板聚集率增高，聚集时间延长；凝血因子活性增加；与同期不服药组相比，术后服药组上述各项指标均有明显改善。结论：氧自由基在贲门癌患者高凝状态的形成中起着重要的作用，清除氧自由基可以减少并发症，延长病人的生存期。

老年病人胃癌术后呼吸道并发症的防治

目的探讨65岁以上老年胃癌病人胃癌术后呼吸道并发症的原因及预防治疗。方法回顾性分析1996年1月至2005年12月间我院行65岁以上胃癌切除术病人的临床资料。结果研究期间65岁以上老年胃癌病人行胃癌切除术共95例,术前合并呼吸道疾病者26例;术后并发急性气管支气管炎、肺炎、肺不张等共25例,术前有无呼吸道伴发病者分别为12例(46.2%),13例(18.8%),统计学差异有显著性意义。手术死亡1例,因胸腔积液和肺部感染死于呼吸功能衰竭。结论65岁以上合并有呼吸道疾病者胃癌术后急性气管支气管炎、肺部感染和肺不张发生率高,手术前后的呼吸道疾病的发生将增加手术风险,应重视围术期处理。

S100分子结合域缺失对钙周期结合蛋白生物学功能影响的研究

目的:探讨S100结合域的缺失对钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)生物学功能的影响。方法:构建野生型CacyBP/SIP及S100结合域截短突变的真核表达载体(分别为pFLAG-CacyBP和pFLAG-△S100),脂质体法转染至人胃癌细胞系MKN45,四唑盐(MTT)比色法观察细胞生长,平板克隆实验及裸鼠成瘤实验检测转染细胞的体外和体内成瘤性。结果:成功构建了野生型CacyBP/SIP及△S100截短突变的真核表达载体并转染MKN45细胞。野生型CacyBP/SIP及△S100截短突变的CacyBP/SIP均能抑制胃癌细胞MKN45的增殖,使MKN45细胞的体外及体内成瘤性降低,但是截短突变CacyBP/SIP抑制胃癌细胞增殖及成瘤性的作用更强。结论:CacyBP/SIP能够抑制胃癌细胞的恶性表型,而阻断S100分子与CacyBP/SIP的结合能增强CacyBP/SIP这种抑制作用。

奥沙利铂联合氟尿嘧啶类药物二线治疗晚期胃癌的临床研究

目的观察奥沙利铂联合氟尿嘧啶类药物二线治疗晚期胃癌的近期疗效和安全性。方法采用FOLFOX4方案,即奥沙利铂(L-OHP)85mg/m2静脉滴注2h,d1,四氢叶酸钙(CF)200mg/m2静脉滴注2h,d1、d2,注射后立即静脉推注氟尿嘧啶(5-FU)400mg/m2,d1、d2,5-FU600mg/m2持续静滴d1、d2;每二周重复,28天为一周期。或改良XELOX方案,即L-OHP85mg/m2静脉滴注2h,d1、d15,卡培他滨(Cap)1250mg/m2分两次口服d1～d14,28天为一周期。二个周期化疗结束后进行疗效评价。结果入组观察43例,总有效率为30.2%。其中FOLFOX4组有效率为31.6%,中位TTP为6个月;改良XELOX方案组总有效率为29.2%,中位TTP为5个月。两组总有效率和TTP比较差异无显著性。毒副反应主要为外周神经感觉异常,症状可逆。结论奥沙利铂联合氟尿嘧啶类药物二线治疗晚期胃癌疗效较高,毒副反应可耐受。

胃癌前组织和胃癌中Fas基因表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨胃癌前组织及胃癌中Fas基因表达状况及其与细胞凋亡的关系。方法 应用原位杂交和免疫组织化学技术检测 10例正常胃粘膜、72例慢性胃炎和 5 3例胃癌中Fas基因的表达 ,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较。结果 正常胃粘膜无Fas基因表达。FasmRNA在肠化生组织中的表达率为 75 .0 0 % ,显著高于萎缩性胃炎( 37.5 0 % ,P <0 .0 1)和胃癌 ( 5 2 .83% ,P <0 .0 5 )。Fas蛋白在肠化生组织中的表达率为 80 .5 6 % ,显著高于萎缩性胃炎 ( 37.5 0 % ,P <0 .0 1)、异型增生 ( 5 5 .0 0 % ,P <0 .0 5 )和胃癌 ( 4 5 .2 8% ,P <0 .0 1)。χ2 检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性。凋亡细胞原位检测结果显示 ,Fas蛋白表达阳性萎缩性胃炎、肠化生和胃癌组织中的凋亡细胞指数显著高于Fas蛋白阴性组 (P <0 .0 5及P <0 .0 1) ,Fas蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈正相关 (r =0 .393,P <0 .0 1)。结论 Fas基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有促进性调控作用 。

POSSUM评分预测高龄胃癌患者术后并发症和死亡风险的价值

目的评价POSSUM评分在预测高龄胃癌患者术后并发症和死亡风险中的价值。方法回顾性分析2010年1月-2014年12月收治的76例接受胃癌根治术的80岁及以上的高龄患者,以POSSUM评分预测术后并发症和死亡的发生率,并与实际情况相比较。结果以POSSUM评分预测术后并发症发生率(R1)为(61.2±19.8)%,实际发生率为59.2%,O/E值(观测值/预测值)为0.97。根据R1值高低分成4组,各组间并发症发生率无明显差异(P=0.676),低危组(<40%)O/E值为1.8,而极高危组(≥80%)O/E值为0.54。随着Rl值的升高,术后住院时间和住院费用均有上升的趋势,差异无统计学意义。POSSUM评分预测死亡率(R2)为(17.4±9.9)%,P-POSSUM评分预测死亡率(R3)为(7.6±6.0)%,而实际死亡率为2.6%,O/E值分别是0.15和0.34。结论 POSSUM评分适用于预测高龄胃癌患者术后并发症的风险,但同时存在低估和高估风险的可能。POSSUM评分和P-POSSUM评分都存在高估死亡率的风险。

PLS-ANN判别分析自体荧光光谱识别胃癌

本文对58例胃癌病人离体标本的癌浆膜和正常浆膜进行以308nm为激发光的自体荧光光谱检测,采用多因素分析法进行光谱信息提取,以识别胃癌。研究表明偏最小二乘法结合神经网络法(简称PLS-ANN)进行判别分析,诊断胃癌的灵敏度为86%,特异度为100%,准确率为93%,有望成为手术中快速识别胃癌在胃壁的浸润范围的有效方法。

应用组织芯片技术研究胃癌组织MVD、MLD和PTEN的表达及其意义

目的探讨PTEN在胃癌、癌旁组织中表达及微血管密度(microvessel density,MVD)、微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD),分析其表达水平与临床病理特征和生存期的关系。方法用组织芯片和免疫组化的方法检测189例胃癌组织、54例癌旁组织、32例正常胃黏膜中PTEN的表达及微血管密度、微淋巴管密度。结果胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织PTEN阳性表达率分别是50.8%(96/189)、85.2%(46/54)和96.9%(31/32),胃癌组织PTEN阳性表达率显著低于癌旁和正常胃黏膜组织(χ2=19.330,P=0.000;χ2=22.830,P=0.000)。PTEN阳性表达与有无淋巴结转移、分化程度和Lauren分型有关(P<0.05)。胃癌组织MVD和MLD分别显著高于癌旁组织和正常胃黏膜组织[MVD:(28.84±14.17)vs(17.02±8.54)、(16.69±7.21);MLD:(8.55±4.98)vs(4.05±2.48)、(3.99±1.56);P<0.01]。微血管密度与分化程度、Lauren分型及浸润深度密切相关(P<0.01);微淋巴管密度则与分化程度、Lauren分型及淋巴结转移密切相关(P<0.05);微血管密度、微淋巴管密度在PTEN阴性表达组显著高于阳性表达组[MVD:(31.37±15.14)vs(26.86±13.29),P=0.031;MLD:(9.37±4.23)vs(7.61±5.29),P=0.012]。PTEN的表达和MVD(r=-0.168,P=0.021)、MLD(r=-0.283,P=0.000)呈负相关关系。生存分析显示:低MVD较高MVD具有生存优势(χ2=4.224,P=0.040),MLD与生存无相关性(χ2=1.044,P=0.307),PTEN阳性表达具有显著的生存优势(P<0.05),是独立于胃癌分期、分级和分型的生存期预测因子。结论PTEN低表达参与胃癌的发生、发展和浸润转移,是胃癌发生的晚期事件。失表达的PTEN可增加胃癌组织MVD、MLD。PTEN的表达可以作为胃癌预后的独立指标。

纳米活性炭,纳米二氧化硅和纳米二氧化钛对人胃肿瘤BGC-823细胞的毒性作用

目的探讨不同化学组成的纳米颗粒对人胃癌BGC-823细胞的毒性作用及其机制。方法分别以纳米活性炭(ACNP)、纳米二氧化硅(SiO2)和纳米二氧化钛(TiO2)100,200,400,800和1600mg·L-1悬液作用BGC-823细胞24,48和72h,MTT法检测细胞增殖,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。ACNP100mg·L-1,纳米SiO2200mg·L-1,纳米TiO2200mg·L-1作用BGC-823细胞24h,透射电镜观察细胞形态及超微结构的影响。纳米SiO2和纳米TiO2100,200,400mg·L-1作用细胞24h后,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。ACNP、纳米SiO2和纳米TiO2100,200mg·L-1作用细胞48h后,用PI染色法检测细胞周期。结果 ACNP,纳米SiO2和纳米TiO2均能明显抑制BGC-823细胞的增殖,作用72h后的IC50分别为874.2,676.2和883.5mg·L-1。与正常对照组相比,纳米SiO2100～800mg·L-1组LDH漏出量均显著升高,并呈浓度依赖性(r=0.9751,P<0.01),而纳米TiO2100mg·L-1作用细胞24h,LDH漏出量与对照组相比没有显著差异,但随着作用浓度增加和作用时间延长,各组LDH漏出量明显高于对照组(P<0.05)。ACNP100mg·L-1作用24h后,细胞出现细胞质浓缩、细胞核固缩和裂解。纳米SiO2200mg·L-1和纳米TiO2200mg·L-1作用24h后均出现细胞坏死。纳米颗粒ACNP,SiO2和TiO2作用组均可见纳米颗粒进入细胞及线粒体损伤。纳米SiO2100mg·L-1和纳米TiO2100mg·L-1作用24h,细胞坏死率与正常对照组(4.59±1.20)%相比显著升高(P<0.01),分别为(39.40±1.72)%和(14.12±0.90)%(P<0.05);细胞凋亡率与对照组相比没有显著差异。ACNP,纳米SiO2和纳米TiO2100和200mg·L-1作用细胞48h后,S期细胞增多,G0/G1期细胞减少,细胞碎片增多;ACNP组亚二倍体细胞增多。结论 ACNP、纳米SiO2和纳米TiO2能够抑制BGC-823细胞的增殖。ACNP可诱导细胞凋亡。纳米SiO2和纳米TiO2能损伤细胞膜,造成以细胞坏死为主的毒性损伤。

通过组织芯片分析snail、claudin-1 mRNA表达与胃癌的关系

目的探讨snailmRNA和claudin-1mRNA在胃癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法制备组织芯片和cRNA探针,通过原位杂交检测snail和claudin1的mRNA在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达。结果胃癌和正常胃粘膜中snail和claudin-1的mRNA表达率差异明显。snailmRNA表达与胃癌的分化、TNM分期、脉管及淋巴结转移呈正相关;claudin1mRNA表达与TNM分期、浸润深度、脉管及淋巴结转移呈负相关。两者均有助于判断胃癌预后,claudin1mRNA还可作为判断胃癌预后的独立风险因素。结论snailmRNA与claudin-1mRNA的表达影响胃癌发展,是指导临床治疗及估计预后的有意义指标。

远端胃大部切除术后胃排空延迟低发生率分析

①目的 探讨远端胃大部切除术后胃排空延迟发生的可能机制。②方法 回顾性分析 2 0 0例胃癌远端胃大部切除术的手术方式及术后处理方法。③结果 手术后病人胃排空延迟发生率为 0。④结论 远端胃大部切除术后胃排空延迟发生的可能机制是术后早期炎性残胃及胃肠吻合口周围梗阻 。

胃癌患者EBV感染潜伏基因产物表达的研究

目的:研究EBV阳性胃癌中潜伏基因产物EBV编码的小RNA(EBER1)及潜伏膜蛋白LM P1的表达状况。方法:原位杂交法检测胃癌患者石蜡包埋组织标本中EBER1;免疫组化法检测EBV阳性胃癌中LM P1。结果:217例胃癌患者癌组织标本中检测到23例EBER 1;EBV阳性胃癌中无潜伏感染膜蛋白LM P1表达。结论:EBV阳性胃癌中缺乏潜伏感染膜蛋白LM P1的表达。

TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化与CD133表达研究

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)促进胃癌侵袭能力,诱导胃癌MKN-45细胞发生上皮间质转化(EMT)的机制及其与PI3K/Akt信号通路调控肿瘤起始细胞标志物CD133表达的关系。方法设空白对照,应用TGF-β1处理MKN-45细胞(TGF-β1处理组),观察其对细胞形态学的影响;Transwell检测细胞侵袭能力的改变;RT-PCR及Western blot检测细胞EMT相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin、p-Akt及CD133的表达水平;PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后再应用TGF-β1处理细胞(TGF-β1+LY294002处理组),检测p-Akt与CD133表达水平的变化;免疫磁珠分选CD133+与CD133-亚群细胞,检测CD133+组与CD133-组细胞EMT相关因子的表达差异。结果TGF-β1处理72h后,TGF-β1处理组细胞由上皮形态转化为间质形态。TGF-β1处理组Snail、N-cadherin mRNA、蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.05);而E-cadherin mRNA、蛋白表达水平均低于对照组(均P<0.05);Transwell检测发现TGF-β1处理组穿膜细胞数高于对照组(P<0.05);TGF-β1处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均高于对照组(均P<0.05);TGF-β1+LY294002处理组p-Akt蛋白与CD133 mRNA、蛋白表达水平均低于TGF-β1处理组(均P<0.05)。CD133+组Snail、N-cadherin mRNA、蛋白表达水平均高于CD133-组(均P<0.05),而E-cadherin mRNA、蛋白表达水平均低于CD133-组(均P<0.05)。结论TGF-β1诱导胃癌细胞发生EMT,并通过PI3K/Akt信号通路调控CD133表达从而增强胃癌MKN-45细胞的侵袭能力。

腹主动脉旁淋巴结清扫术治疗进展期胃癌的疗效观察

目的:比较D2+腹主动脉旁淋巴结清扫术(PAND)与D2根治术治疗进展期胃癌在疗效和安全性方面的差异。方法:纳入分析D2+PAND的胃癌根治术160例,为D2+PAND组,选择同期施行胃癌D2手术病人160例,作为对照组(D2组),比较两组并发症发生率和生存情况。结果:D2+PAND组和D2组平均手术时间分别为(329.9±102.4)min和(266.7±90.6)min,平均输血量分别为(564.7±752.5)m L和(459.3±473.4)m L,差异均有统计学意义(P<0.001)。两组并发症发生率比较差异无统计学意义。D2+PAND组和D2组平均生存期分别为(74.8±7.4)个月和(53.8±4.9)个月(P=0.105),中位生存期为36.4个月和23.4个月(P=0.123),无统计学差异。但是分层分析显示胃癌T4期病人D2+PAND组和D2组平均生存期分别为(28.1±4.6)个月和(17.2±2.8)个月,差异有统计学意义(P<0.05),对于合并第2站淋巴结转移的胃癌病人,平均生存期分别为(40.8±5.7)个月和(12.6±2.4)个月,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:D2+PAND可改善T4期和存在第2站淋巴结转移进展期胃癌病人的预后。

PLS-ANN分析血浆自体荧光光谱的二阶导数光谱识别胃癌

探讨偏最小二乘法结合神经网络法(简称PLS-ANN)分析血浆自体荧光光谱的二阶导数光谱识别胃癌的优势,对20例胃癌病人和23例健康人血浆进行以405nm为激发光的自体荧光光谱检测,采用PLS-ANN法分别对血浆自体荧光光谱和二阶导数光谱进行判别分析。PLS-ANN分析血浆的自体荧光光谱法诊断胃癌的灵敏度为75%,特异度为83%,准确率为79%,PLS-ANN分析血浆的二阶导数光谱法诊断胃癌的灵敏度为90%,特异度为96%,准确率为93%。结果表明PLS-ANN分析血浆的二阶导数光谱法识别胃癌,优于PLS-ANN分析血浆的自体荧光光谱法,有望成为快速识别胃癌的较理想方法。