人胃癌细胞端粒酶RNA组分hTR基因片段的克隆及其正反义真核表达载体的构建

目的克隆人胃癌细胞端粒酶RNA组分(hTR)基因片段并构建其正义和反义真核表达载体,为以端粒酶为靶目标的肿瘤基因治疗奠定基础。方法采用RT-PCR方法从人胃癌细胞株MKN-45中扩增出人hTR部分cDNA序列。将该片段插入pEF6/V5-His-TOPO载体后构建人端粒酶RNA组分(hTR)基因正义真核表达载体(pEF-hTR)。随后采用EcoRV和SpeⅠ从pEF-hTR上切下该目的基因片段并反向插入pBluescriptⅡKS载体上的EcoRV/SpeⅠ酶切位点上。最后采用KpnⅠ和NotⅠ从pBluescriptⅡKS载体上切下该目的基因片段并正向插入pEF-hTR的KpnⅠ/NotⅠ酶切位点上从而构建出人端粒酶RNA组分(hTR)基因反义真核表达载体(pEF-ahTR)。对所构建的载体均进行酶切鉴定和测序确认。结果所克隆的基因片段其碱基序列与文献报道完全一致,且插入载体的方向完全正确。结论本实验已成功克隆了人端粒酶RNA组分(hTR)基因的部分序列并成功构建其正义、反义真核表达载体,从而为研究反义抑制人胃癌细胞端粒酶活性对胃癌细胞生物学行为的影响奠定了基础。

HSP60和CD_(44)V_6在胃腺癌中的表达及其意义

目的研究热休克蛋白60(HSP60)、CD_(44)V_6在人胃癌组织中的表达.方法对60例非癌胃粘膜病变及50例胃腺癌组织手术及内镜活检石蜡标本,应用抗人 HSP60,CD_(44)V_6单克隆抗体,以免疫组织化学检测方法检测 HSP60,CD_(44)V_6的表达.结果 HSP60在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃腺癌的阳性率为30%,65%,70%,76%,过表达率为10%,25%,35%,58%.CD_(44)V_6在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃腺癌的阳性率为5%,25%,30%,78%,HSP60,CD_(44)V_6在肠上皮化生、不典型增生及胃腺癌中的阳性率和过表达率均明显高于慢性浅表性胃炎(P<0.05);HSP60在胃腺癌组织的过表达率高于肠上皮化生和不典型增生(P<0.05).HSP60在高、中、低分化胃腺癌中的阳性表达率为64.7%,77.7%,75.0%.HSP60在不同分化程度胃腺癌中表达无明显差异(P>0.05),而 CD_(44)V_6在高、中、低分化胃腺癌中的阳性表达率为64.7%,66.2%,91.7%,CD_(44)V_6在低分化胃腺癌的表达明显高于高、中度分化胃腺癌(P<0.05).结论 HSP60,CD_(44)V_6在人胃癌及癌前情况或病变中过度表达,可能与胃腺癌的发生、发展有关,还可能有助于预测胃腺癌的分化程度.

HP、hTERT在胃癌及癌前病变中的表达及相关性研究

目的:探讨幽门螺杆菌(HP)、端粒酶基因(hTERT)在胃癌及癌前病变中的表达及相互关系。方法:采用特殊染色方法和原位杂交方法分别检测130例石蜡包埋标本中HP感染和hTERTmRNA的表达情况。结果:HP感染在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、非典型增生(DYS)和胃癌(GC)中表达率分别为40%、60%、70%和72.5%。GC与对照组(CSG)相比有显著性差异(P<0.05);hTERTmRNA在CSG、CAG、DYS及GC中表达率分别是0、10%、30%、78.75%。GC与CSG、CAG、DYS分别相比有显著性差异(P<0.05);HP感染阳性的胃癌组hTERTmRNA阳性的表达明显高于HP阴性的胃癌组(P<0.01)。结论:HP感染在CSG→CAG→DYS→GC这一演变过程中起着重要作用;胃癌的发生与端粒酶活性有密切关系;HP感染与端粒酶活性呈正相关。

不同胃粘膜病变组织端粒酶活性表达

1 材料和方法1.1 材料胃粘膜组织标本72例来自1998-10/1999-10我院内镜胃粘膜活检标本.每例患者在胃粘膜相邻部位取6块粘膜组织.2块立即放入经处理的试管中后置入液氮中,然后送-80℃低温冰箱保存待检.4块作病理检查.胃粘膜标本72例经病理证实胃腺癌(GC)33例,胃粘膜重度异型增生8例,轻度异型增生5例,胃粘膜肠上皮化生(ICM)7例,慢性浅表性胃炎(CSG)19例.1.2 方法1.2.1 组织提取物制备取冰冻活检组织30mg～50mg 置入消毒过的玻璃匀浆器中,于冰水浴中匀浆,加入 200μL冷裂解液,于0℃冰水中孵育30min 后20 000 r/min 高速离心20min,

复发转移性胃癌患者HER2基因扩增、蛋白表达及预后的关系

目的探讨复发转移性胃癌肿瘤原发灶HER2基因扩增与蛋白表达的相关性,及与临床病理特征和预后的关系。方法收集237例复发转移性胃或胃食管交界处腺癌肿瘤原发灶标本,分别应用荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测HER2基因扩增和蛋白的表达。结果 FISH检测HER2基因扩增18.1%(43/237);IHC检测HER2蛋白表达-、1+、2+、3+分别为160例(67.5%)、34例(14.3%)、17例(7.2%)和26例(11.0%)。HER2总体阳性率(FISH+或IHC 3+)为19.0%(45/237)。FISH与IHC方法总的符合率较好,达92.4%(219/237),呈显著正相关(r=0.696,P<0.01)。HER2更常见于胃食管交界处腺癌、肠型胃癌及分化较好的胃癌。胃癌HER2阳性表达与肝、肺等广泛的转移相关。对215例接受全身化疗的患者进行生存分析显示,HER2阳性状态与较差的生存时间相关。结论胃癌HER2基因扩增及蛋白表达具有较好的一致性。胃癌HER2的表达与预后差相关。

生长抑素类似物对裸鼠人胃癌种植瘤Hpa和bFGF表达的影响

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽对裸鼠人胃癌种植瘤Hpa和bFGF表达的影响并探讨其作用机制。方法:采用SGC7901人胃癌细胞株建立裸鼠人胃癌种植瘤模型,分别给予奥曲肽、5FU、奥曲肽+5FU、生理盐水干预6周后,免疫组化测定种植瘤组织内Hpa、bFGF的表达。结果:Hpa在奥曲肽组、5FU组、联合治疗组和对照组中的弱阳性表达率分别是25%、41.7%、25%和16.7%;强阳性表达率分别是16.7%、33.3%、8.3%和75%。曲肽组和联合治疗组的阳性率均显著低于对照组,χ2值分别为9.32和12.42,0.025<P<0.05和0.005<P<0.01;5FU组的阳性率与对照组(χ2=2.61,0.25<P<0.5)及联合治疗组(χ2=3.64,0.25<P<0.5)比较,差异无统计学意义。bFGF在奥曲肽组、5FU组、联合治疗组和对照组中的弱阳性表达率分别是33.3%、25%、25%和16.7%;强阳性表达率分别是16.7%、25%、8.3%和83.3%。曲肽组、5FU组和联合治疗组的阳性率均显著低于对照组,χ2值分别为10.46、9.10和15.60,0.01<P<0.025、0.025<P<0.05和P<0.005。相关分析显示,Hpa与bFGF之间存在强的正相关,r=0.893,P=0.000。结论:奥曲肽能够抑制裸鼠人胃癌种植瘤的侵袭和转移,奥曲肽联合5FU具有协同作用,其机制可能与下调Hpa和bFGF的表达有关。

突变型p53与胃癌多重耐药基因表达的相关性研究

目的研究突变型p 53与M DR-1基因间相互关系,探讨p 53途径对防治肿瘤细胞多重耐药的意义。方法取胃癌组织切片,采用免疫组化方法检测组织切片p53蛋白和M DR-1基因蛋白产物Pg糖蛋白,分析突变型p 53与M DR-1基因表达产物的相互关系。将突变型p 53、sv40T ag(封闭p 53)导入胃癌细胞株中,观察胃癌细胞株中M DR-1基因mRNA表达的变化。结果46例胃癌组织中p53蛋白阳性率为60.9%,Pg蛋白阳性率为73.9%。在28例p53蛋白阳性表达中有23例(82.1%)Pg蛋白表达阳性。18例p53蛋白阴性表达中9例(50.0%)为Pg蛋白表达阳性。p53和Pg蛋白之间的相关性有显著性意义(P<0.05)。导入突变型p 53细胞组的M DR-1基因mRNA表达比导入突变型p 53+sv40T ag细胞组、对照组M DR-1基因mRNA表达增强。结论突变型p 53可能促进肿瘤细胞M DR-1基因表达,使肿瘤细胞更易产生耐药。

胃癌GST-π,P-gp,Top-Ⅱ和nm23H1表达的意义

目的探讨 GST-π的表达变化与胃癌生物学行为、P-gp,Top-Ⅱ和 nm23H1表达的相关性.方法应用免疫组织化学(IHC)-催化信号放大(CSA)系统法检测66例胃癌组织 GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和 nm23H1的表达.结果其 GST-π、P-糖蛋白、Top-Ⅱ和 nm23H1的阳性检测率分别为82%,77%,50%和58%.GST-π和 Top-Ⅱ表达与胃癌组织学类型密切相关(x^2=6.45和 x^2=5,P<0.05);GST-π和nm23H1表达与淋巴结转移密切相关,GST-π呈正相关(x^2=10.048,P<0.01),nm23H1呈负相关(x^2=24.78,P<0.001);GST-π和 P-gp 高表达与<3 a 生存期相关(x^2=9.506,P<0.01和 x^2=8.439,P<0.01),nm23H1高表达与≥3a 生存期相关(x^2=10.89,P<0.01).结论 GST-π与 P-糖蛋白、Top-Ⅱ一样可作为肿瘤耐药的标志物,还可作为肿瘤分化程度,淋巴结转移和患者预后差的标志物.

p16及增殖细胞核抗原的表达与胃癌临床病理的关系

目的 :研究胃癌中p16蛋白、PCNA表达与胃癌临床病理的关系。方法 :应用免疫组化SP法对5 2例胃癌组织中p16蛋白、PCNA进行检测。结果 :5 2例胃癌组织中p16蛋白、PCNA表达阳性率分别为 4 4 .2 %、71.2 %。p16蛋白随着肿瘤分化程度的降低、恶性程度的增高和浸润深度的加深 ,其表达的阳性率逐渐降低 ,而PCNA的表达则相反。p16蛋白、PCNA表达与胃癌预后有关。结论 :p16蛋白、PC NA的检测可作为判断胃癌恶性程度。

基质金属蛋白酶-7mRNA在胃癌组织中表达的研究

目的 :检测基质金属蛋白酶 -7(MMP 7)基因在胃癌组织及癌旁组织中的表达 ,探讨MMP 7在胃癌发生发展中的作用。方法 :应用逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测胃癌组织及相应癌旁组织中MMP 7基因的表达。结果 :3 0例胃癌组织中有 2 3例表达MMP 7基因 ,阳性率为 76 7% ,相应的 3 0例癌旁组织均未检测到MMP 7基因表达。统计学分析表明 ,MMP 7基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异有统计学意义 ,χ2 =3 7 2 97,P <0 0 0 1。结论 :胃癌组织中MMP 7基因具有高表达率 ,且表达具有高度肿瘤特异性 ,提示MMP

胃癌中α-及β-连接素联合表达

目的 :探讨α 及β 连接素 (catenin)联合表达与胃癌侵袭转移间的关系。方法 :应用ABC染色法在同一胃癌术后标本上进行α 及β catenin抗体染色 ,计数胃癌组织中阳性细胞所占的比例。 结果 :正常胃黏膜上皮细胞全部表达α 及 β catenin。 38例胃癌组织中α 及 β catenin阳性表达率分别为2 8 9% (11/ 38)和 5 0 % (19/ 38)。存在淋巴结转移的胃癌其α 及 β catenin的阳性表达率分别为 8 7%及 2 6 1% ,均远低于无淋巴结转移者 (P <0 0 1)。α 与 β catenin共同阳性表达占 30 % ,共同阴性表达占 36 9%。α catenin(- ) / β catenin(- )表达者最易发生淋巴结转移 ,α catenin(+ ) / β catenin(- )表达者易发生肝转移。结论 :检测α ,β

利用组织芯片技术对全数淋巴结检查的胃癌Survivin及p53表达的研究

目的:探讨有全数淋巴结检查的胃癌组织中Survivin和p53蛋白高表达与病理学指标及预后的关系及两者的关系。方法:经溶脂法检查140例胃癌标本全数淋巴结,连续切片、常规HE染色和免疫组化染色,确定有无淋巴结转移。构建胃癌组织微阵列,免疫组织化学染色检测Survivin和p53蛋白(DO7)在胃癌组织中的表达情况。结果:组织微阵列利用率为87.1%(122/140)。122例中共检出淋巴结7813枚,平均64.4枚/例。其中转移淋巴结1695枚。Survivin阳性率为53.3%(65/122),p53阳性率为25.4%(31/122)。Survivin与UICC淋巴结分期(χ2=8.69,P=0.03)及组织学分型(χ2=4.41,P=0.04)有关;与p53及预后无关。p53与组织学分型(χ2=6.35,P=0.01)及年龄(χ2=5.80,P=0.02)有关,与预后无关。Cox模型回归多因素分析,UICC淋巴结分期与预后相关(χ2=4.85,P=0.028)。结论:胃癌Survivin蛋白高表达与淋巴结转移相关而与生存无关,尚不能成为推测胃癌预后的分子标志物。胃癌Survivin蛋白高表达与p53蛋白高表达无关,两者在胃癌发生和发展中无协同作用。UICC胃癌淋巴结分期是重要的预后指标。

Cx26基因修饰对人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨Cx26基因对人胃癌MGC-803细胞的生长、细胞周期及迁移的影响。方法将重组表达质粒p Bud CE4.1-Cx26转染至人胃癌MGC-803细胞(转染组),另设空白组(未经任何特殊处理)和对照组(空载质粒组)。收集40例胃癌组织及对应癌旁正常组织。通过RT-PCR和Western blot法测定细胞及组织中的Cx26 mRNA及蛋白表达水平。划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能。采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase 3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化。结果 Cx26基因mRNA和蛋白在人胃癌组织中的表达量低于癌旁组织,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Cx26基因修饰人胃癌MGC-803细胞后,转染组与对照组和空白组比较,Cx26 mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05),细胞传递的荧光强度亦升高(P<0.01)。转染后48 h、72 h细胞增殖均受到抑制(均P<0.01)。转染24 h后,转染组MGC-803细胞穿膜数低于对照组和空白组(均P<0.01),细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase 3表达均增加(均P<0.01),Bcl-2表达各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染后48 h,转染组MGC-803细胞被阻滞在G2期(P<0.01)。结论转染Cx26基因对人胃癌MGC-803细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G2期。

胃癌组织中HSP70与Cyclin D1的表达及意义

目的:探讨热休克蛋白70 (heatshock protein 70,HSP70)与细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)在胃癌组织中的表达。方法:应用免疫组化SABC 与SP 法检测胃癌、不典型增生、萎缩性胃炎及浅表性胃炎组织中HSP70 与Cyclin D1 的表达。结果:HSP70与Cyclin D1 在浅表性胃炎、萎缩性胃炎、不典型增生和胃癌中的表达阳性率,随病变的进展而升高。HSP70 的表达阳性率分别为42. 9% (12/28)、57. 1%(24/42)、64. 3%(9/19)和77 .1%(37/48),其中萎缩性胃炎、不典型增生及胃癌与浅表性胃炎相比,差异有统计学意义,P<0 .05。Cyclin D1 的表达阳性率分别为7 .1% ( 2/28 )、19 .0% ( 8/48 )、35 .7%(5/14)和52. 1% (25/48),其中不典型增生、胃癌与萎缩性胃炎相比,差异有统计学意义,P<0. 05。大多数受检胃癌组织中,HSP70与Cyclin D1的表达有相关性。结论:HSP70与Cyclin D1 过度表达,在胃癌的产生过程中可能起重要作用。

PTEN抑癌基因在人胃癌组织中的表达及意义

目的探讨抑癌基因PTEN在胃癌组织中的表达水平及与其生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学EnVision法检测116例胃癌组织,35例癌旁异型组织,56例癌旁正常黏膜组织中的PTEN蛋白表达情况。结果胃癌组织中PTEN阳性率为53.4 %(62/116),显著低于异型增生、癌旁正常黏膜组织中的阳性率71.4 %(25/35)、100 %(56/56)(P<0.001)。在各组织学类型中,高中分化腺癌PTEN蛋白阳性表达率最高(72.7 %,32/44),显著高于印戒细胞癌(29.2 %,7/24),P<0.001。PTEN蛋白的表达与淋巴结转移、侵袭程度密切相关(P<0.05)。结论PTEN基因的异常改变与胃癌的发生发展密切相关,可能是胃癌进一步恶化的标志之一,可作为胃癌生物学行为的参考指标,为胃癌的基因治疗提供参考依据。

姜黄素对人胃癌BGC－823细胞增殖及MMP－9、COX－2mRNA表达的影响

目的研究姜黄素在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人胃癌BGC-823，MTr法检测姜黄素在相同浓度下，不同时间对于胃癌细胞增殖的影响，并计算Ic蚰值；RT-PCR法检测其对COX-2、MMP-9mRNA表达的影响。结果MTlr结果显示：相同干预浓度姜黄素抑制人胃癌细胞增殖，其24、48、72h的IC50分别为：（62．192±7．802）μmol／L、（46．365±8．991）μmol／L和（45．503±9．126）μmol／L；Rt—PCR结果显示：正常对照组及姜黄素干预组的人胃癌细胞BGC－823MMP-9mRNA灰度值分别为：0．704±0．045，0．147±0．052（P〈0．05）；COX-2mRNA灰度值分别为：0．721±0．060，0．190±0．027（P〈0．05）。结论姜黄素抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9mRNA的表达来抑制胃癌细胞增殖。

胃癌中β-catenin和GSK-3β的表达及临床意义

目的探讨β—catenin和糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）在胃癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色检测胃组织芯片（包括48例胃癌和对应正常胃组织及24例癌旁组织）中β-catenin和GSK-3β的表达。结果β-catenin和GSK-3β在胃癌组织中的表达率分别为66．7％、35．4％；β—catenin在癌组织中的阳性表达率明显高于正常组织（χ2=65．455，P〈0．05）；与pTNM分期、分化程度、组织学类型、淋巴结转移和癌侵犯神经有关（χ2=4．713，8．242，13．662，11．658，4．550，P〈0．05或P〈0．01）；GSK-3β在癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织（χ2=26．968，P〈0．05），并与分化程度、组织学类型和淋巴结转移有关（χ2=3．868，9．665，9．872，P〈0．05或P〈0．01）；β-catenin与GSK-3β表达则呈负相关（r=-0．493，P=0．001）。结论β—eatenin和GSK-3β在胃癌的进展、分化、浸润和转移中起重要作用，是判断胃癌生物学行为的良好指标。

MMP-9在胃癌组织中表达及其临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与胃癌临床病理特征的关系及其临床意义.方法 应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（SP）,检测正常胃黏膜组织、癌旁组织、胃癌组织中MMP-9的表达水平,并分析与临床病理特征的关系.结果 胃癌组织中MMP-9阳性表达较正常胃黏膜组织、癌旁组织显著提高（x2=86.66,P＜0.01）.MMP-9在胃癌中的阳性表达与组织分化程度、TNM分期、浸润程度、淋巴结转移有关（x2 =7.76,P＜0.05;x2=12.94,54.37,11.16,P＜0.01）.结论 MMP-9可能参与了胃癌的发生发展,且与侵袭转移密切有关.