银杉愈伤组织诱导植株再生的影响因素

[目的]探索银杉成熟胚愈伤组织诱导植株再生的影响因素,为阐明影响诱导银杉愈伤组织、不定芽等的机制提供帮助。[方法]以广西金秀和广西桂林2个种源的银杉成熟胚为试验材料,利用1/2 MS、DCR、P6培养基,分别添加0.5、1.0、1.5 mg·L^(−1)的6-BA,0.2、0.4、0.6 mg·L^(−1)的NAA和0.5、1.0、1.5 mg·L^(−1)的IBA,诱导银杉愈伤组织、不定芽和不定根,得到银杉再生植株;分析银杉种源、培养基、植物生长调节剂等对银杉愈伤组织、不定芽、不定根诱导率和增殖壮芽率的影响。[结果]广西桂林种源银杉愈伤组织、不定根诱导率和增殖壮芽率最大,分别为66.48%,21.43%和55.00%。广西金秀种源银杉不定芽诱导率最大,为73.33%。适合银杉愈伤组织诱导植株再生的培养基和植物生长调节剂对于愈伤组织为DCR+0.5 mg·L^(−1)6-BA,对于不定芽为DCR+1.5 mg·L^(−1)6-BA,对于不定根为1/2 MS+0.2 mg·L^(−1)NAA+0.5 mg·L^(−1)IBA,对于增殖壮芽为DCR+1.0 mg·L^(−1)6-BA+0.4 mg·L^(−1)NAA。[结论]广西桂林种源银杉整体诱导率和增殖率相比广西金秀种源高。DCR培养基对银杉愈伤组织和不定芽诱导具有显著促进效果,1/2 MS培养基对不定根诱导具有显著促进效果。6-BA既可诱导银杉愈伤组织和又可诱导不定芽,NAA和IBA组合可诱导出银杉不定根,6-BA和NAA组合可对银杉不定芽进行增殖壮芽。

现代月季(Rosa hybrida)叶片植株再生体系的建立

本试验对冰山、金秀娃、火球等24个现代月季(Rosa hybrida)品种再生体系进行了研究,结果表明:部分品种可从叶柄砧处直接再生出小苗;基因型、植物生长调节剂组合、暗培养时间及叶片的幼嫩程度对现代月季叶片的再生影响很大,暗培养和幼叶均有利于再生。24个现代月季品种中12个品种再生出了不定芽;现代月季品种冰山幼叶暗培养30 d后的再生率可从无暗培养的15.6％提高到45.6％;冰山顶生3片叶、中部叶片及基部叶片的再生率分别为46.5％、12.9％和0。适宜现代月季叶片不定芽再生的培养基为MS+6-BA 6.0 mg·L-1+ZT 6.0 mg·L-1+IBA 0.4 mg·L-1;芽伸长培养基为MS+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1;生根培养基为1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1+0.1％活性炭。

君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生

以君迁子(Diospyros lotus Linn.)休眠芽和叶片为外植体,研究基础培养基种类和外植体基因型对休眠芽初代培养的影响,比较叶片放置方式、TDZ浓度、ZT与TDZ不同浓度组合及暗培养时间对叶片愈伤组织形成和不定芽再生的影响;然后对再生芽进行生根。结果表明:君迁子休眠芽初代培养中,DKW培养基最适合其生长发育,休眠芽生长势最佳;初代培养中,不同基因型的外植体在DKW培养基中生长势基本相同,说明外植体基因型对其初代培养没有影响,但对继代培养影响较大。叶片下表面朝上放置在MS+ZT 0.1 mg/L+TDZ2.0mg/L中暗培养20d,愈伤组织形成率达100%,在(1/2N)MS+2.200 mg/L TDZ上愈伤组织形成率为81.4%;叶片下表面朝上放置在MS+ZT 1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L中暗培养0d,不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为34.4%和2.1±0.3。组培苗在1/2MS(1/2N)+IBA 1.0mg/L中培养5d后,转入1/2MS(1/2N)+1g/L活性炭培养20d,生根率为58.14%,平均根数为4条。

草莓叶片愈伤组织形成及再生芽分化的组织学研究

本文将草莓品系Ｍ１４的叶片分别在培养基ＣＫ（ＭＳ＋Ｂ５）、培养基Ａ（组成为ＭＳ＋Ｂ５＋ＴＤＺ１．０ｍｇ．Ｌ－１＋ＩＡＡ１．０ｍｇ．Ｌ－１）、培养基Ｂ（组成为ＭＳ＋Ｂ５＋ＴＤＺ２．５ｍｇ．Ｌ－１＋ＩＡＡ０．１ｍｇ．Ｌ－１）中培养，对细胞的脱分化、愈伤组织的形成、叶状体的产生及再生芽分化进行组织学观察。结果表明，激素可诱导叶表皮细胞、叶肉细胞及维管束周围的其他薄壁细胞脱分化；愈伤组织就是由后两类细胞脱分化形成分裂中心，进一步发育而成的；叶状体可由表皮细胞脱分化后直接分裂形成，不经愈伤组织阶段，但更普遍的是在愈伤组织表层产生；再生芽发生于叶状体上。

影响草莓叶片植株再生因素的研究

目前建立草莓的再生体系大多采用TDZ作为主要激素 ,本研究以广泛栽培的四个草莓品种为材料 ,系统地研究了不同基因型、叶龄、褐化、暗培养、基本培养基、不同激素组合、Ag+ 等诸多因素对叶片再生的影响 ,建立了不依赖于TDZ的弗吉尼亚草莓叶片外植体的不定芽再生体系。研究结果表明Ag+ 并不能促进草莓弗吉尼亚植株的再生 ,反而起到了抑制作用。以顶部充分伸展的 18～ 2 1d叶龄的无菌苗叶片为外植体 ,再生效果最好 ,将此类叶片放在以MS为基本培养基、附加 1.6～ 1.8mg/L 6 -BA ,0 .1mg/LNAA ,0 .4 - 0 .5mg/LKT ,0 .1mg/L2 ,4 -D的分化培养基上 ,14d后便可见到不定芽 ,经过愈伤组织阶段从叶片上分化产生 ,出现的高峰期在接种后的 2 0～30d ,芽分化率高达 6 0 %以上。该再生体系可作为基因转化的受体系统。

鼎湖山紫背天葵组织培养及植株再生

选用紫背天葵无菌苗叶片为外植体,建立了离体培养体系,并探讨其愈伤组织生长和不定芽诱导的适宜培养条件。通过研究得出:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+2,4-D 1.00 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+LH 200 mg/L+CH200 mg/L+YE 200 mg/L,愈伤组织诱导率为96.88%。不定芽诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+LH 200 mg/L+CH 200 mg/L+YE 200 mg/L,不定芽诱导率为77.3%。不定芽转至1/2MS培养基中均可100%生根并长成完整植株,小苗移栽成活率达到90%。

多年生黑麦草高频再生体系的建立及优化

从外植体预处理方式、基本培养基、激素浓度等方面着手,对多年生黑麦草愈伤组织诱导、继代、不定芽分化及再生过程中的影响因素进行了研究,提高了再生频率。结果如下：切取胚端半粒种子,经75%乙醇处理1min,0.1%HgCl处理15min,在经无菌水清洗4～6次后接种方式较好;愈伤组织诱导培养基以MS＋2,4—D 8.0 mg/L（或另添加甘露醇25 g/L）为佳;愈伤组织接种于MS＋2,4—D 8.0mg/L＋甘露醇25 g/L上进行1～2次继代后于NB＋6—BA2.0 mg/L上进行分化;不定芽转接至MS＋6—BA2.0 mg/L上进行扩繁或于1/2MS＋NAA0.5mg/L＋IAA0.5mg/L上进行生根。

库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立

【目的】建立库尔勒香梨叶片诱导再生的稳定高效再生体系。为梨的遗传转化研究奠定基础。【方法】以库尔勒香梨离体培养的继代30 d左右的无菌苗叶片为材料,1/2 MS为基本培养基,用TDZ与IBA或NAA分别组合设计配方,研究不同生长调节剂质量浓度组合对不定芽诱导过程中愈伤组织形成率和不定芽形成率的影响,选取最优配方附加不同质量浓度的AgNO_3,获得不定芽再生的最佳培养基。用IBA和NAA分别组合设计生根生长调节剂的配比,根据生根率、平均生根数以及平均生根长度筛选最适宜生根的生长调节剂的配比,建立生根的培养体系。【结果】库尔勒香梨叶片诱导不定芽再生的最佳培养基为1/2 MS+TDZ 1.0mg/L+IBA 0.5 mg/L+AgNO_3 0.5 mg/L,愈伤组织诱导率100%,不定芽形成率84.92%。最适宜香梨再生苗生根的培养配方为1/2 MS+0.5 mg/L IBA+0.9 mg/L NAA,结合前期暗培养7 d,生根率可达100%,平均生根条数为5.66,平均根长度为2.8 cm。【结论】建立了库尔勒香梨的再生体系。

印楝愈伤组织培养和植株再生

用印楝幼嫩枝条和叶片，在含有BA（0～0.5mg／L）和NAA（0～2mg／L）的MS培养基中，于25℃±2℃下暗培养15～25d，可诱导产生愈伤组织。愈伤组织生长出现2个生长峰，愈伤组织生长期和培养基中激素组成影响双峰产生时间，但不改变愈伤组织生长的双峰性质。在诱导不定芽培养基中，于25℃±2℃下光培养15～30d，愈伤组织产生不定芽分化。愈伤组织不定芽分化与愈伤组织来源和不定芽诱导培养基的激素及其组合有关，BA0．5mg／L，NAA0.1mg／L的MS培养基诱导产生的愈伤组织（M14）不定芽分化能力最强。BA0．5mg／L，NAA0．01mg／L的MS培养基是诱导不定芽分化的最适培养基。印楝小苗在无激素的MS培养基中光培养15～25d，可发育成完整植株。

TDZ和BA对金花梨和鸭梨叶片不定芽再生的影响

为了提高金花梨和鸭梨2个品种叶片不定芽再生能力,以其试管苗叶片为外植体,以NN69为基本培养基,研究了不同浓度TDZ和BA对2个品种梨叶片不定芽再生的影响。结果表明:BA对鸭梨叶片不定芽的再生比TDZ有效,TDZ未能诱导鸭梨叶片产生不定芽;BA对金花梨叶片不定芽再生率的影响与TDZ无显著差异,但TDZ比BA显著提高了金花梨叶片的平均每叶不定芽数。

骏枣叶片组织培养及植株再生技术研究

通过对骏枣叶片诱导愈伤组织、愈伤组织诱导不定芽、不定根的分化及再生植株移植的最佳条件的探讨,建立了稳定的骏枣叶片离体培养及再生植株体系。

蔓性蝴蝶草叶片的组织培养及植株再生

以蔓性蝴蝶草全展叶片为外植体,以MS为基本培养基,分别添加0.01、0.05、0.1mg/L浓度的TDZ及CPPU,研究TDZ及CPPU对分化芽的影响,并进行了最佳生根培养基的筛选。结果表明:不同浓度的TDZ和CPPU对蔓性蝴蝶草的芽分化影响不同,MS+TDZ0.1mg/L和MS+CPPU 0.05mg/L对外植体芽的分化的诱导效果最佳,达到100%;在1/3MS培养基上的生根效果最佳;移栽成活率在90%以上。

辣椒枣试管苗叶片再生植株研究

以辣椒枣(Ziziphus jujuba Mill.)组培苗叶片为试材,研究了不同培养方式、接种方式以及不同生长调节剂对离体叶片诱导不定芽再生的影响。结果表明,适当的暗处理有利于辣椒枣叶片愈伤组织的形成,并能促进愈伤组织尽快形成芽点,有利于缩短叶片再生培养时间;叶片反放便于愈伤组织及芽点的观察,褐化率低,最终的不定芽再生数高于叶片正放,是辣椒枣叶片再生培养的最佳放置方式。正交试验结果表明,基本培养基,TDZ,IBA和糖4个因子对辣椒枣叶片再生影响大小排序为:基本培养基>糖>TDZ>IBA;1/2 MS(大)为最优培养基,WPM不适合作为辣椒枣的叶片再生培养基;辣椒枣组培苗叶片再生的最优培养基为1/2 MS(大)+TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+糖20 g/L,平均每叶片再生不定芽能达到5.4个。

番茄子叶和下胚轴离体再生体系建立

以番茄无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究其在MS附加不同浓度6-BA和NAA的培养基上的分化情况。结果表明:在不同培养基上,番茄子叶和下胚轴均能诱导出淡绿色的愈伤组织和分化形成不定芽,但在不同的培养基上,番茄子叶和下胚轴的出愈率和不定芽诱导存在明显差别。诱导番茄愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基分别为:MS+6-BA2mg/L+IAA0.2mg/L和MS+6-BA2mg/L+IAA0.02mg/L,番茄不定芽生根培养基为:MS+IAA0.2mg/L。

龙牙楤木组织培养与不定芽再生植株

以龙牙木Araliaelate(Miq.)Seem的幼嫩茎、叶为外植体,在含有0.5mg LNAA+0.5mg LBA培养基上分别添加0.5mg L2,4-D、2mg L2,4-D时,茎、叶外植体出愈率最高.愈伤组织转入MA+(1-3)mg LBA+(0-0.5)mg LNAA后,形成了密布白色霜块状、绿色瘤状和黄褐色颗粒状三种类型的愈伤组织.其中,白色霜状愈伤组织在适宜的条件下可产生不定芽.生根培养基为1 2MA无激素培养基.

植物激素对黄瓜外植体器官分化及植株再生的影响

本文研究了6-BA、IAA、NAA、IBA不同浓度处理对黄瓜外植体器官分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA单独处理即可诱导外植体芽分化,浓度为0.5mg/L时分化率最高为33.3%,三种外植体中子叶远轴端无芽分化。IAA、NAA、IBA单独处理均可诱导外植体产生愈伤组织和不定根。两激素配比表明,MS+0.8mg/L 6-BA+0.10mg/L IAA最有利于子叶近轴端分化出芽,MS+0.8mg/L 6-BA+0.15mg/L IAA有利于下胚轴分化出芽,黄瓜植株再生率达30%。

马铃薯茎段和叶片再生体系建立

为建立最佳马铃薯茎段和叶片再生体系,以大西洋(Atlantic)脱毒苗为试验材料,筛选最佳激素浓度配比的培养基,构建马铃薯茎段和叶片再生体系.结果表明,茎段和叶片均可在不同浓度激素6-BA、NAA及GA3配比培养基上形成愈伤组织并能产生不定芽.茎段和叶片愈伤组织最佳诱导培养基分别为MS+0.25 mg·L^(-1)6-BA+0.40 mg·L^(-1) NAA和MS+5.00 mg·L^(-1)6-BA+0.30 mg·L^(-1) NAA,诱导率分别为96.67%和77.04%,生长状态较好,淡绿色,米粒状.茎段和叶片愈伤组织不定芽分化的最佳培养基均为MS+5.00 mg·L^(-1)6-BA+0.10 mg·L^(-1) NAA+10.00 mg·L^(-1) GA3,不定芽分化率均可达40%以上,分化出的芽多且较壮.

番茄子叶和下胚轴离体再生体系的建立

以‘09-22’番茄无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究了其在MS附加不同浓度6-BA和NAA/IAA的培养基上的诱导分化及不定芽生根情况。结果表明:IAA比NAA更利于该品种子叶的再生;在不同激素组合下,番茄子叶和下胚轴愈伤组织诱导率均达100%,但子叶的愈伤组织生长状态好于下胚轴,不定芽分化率也略高于下胚轴,然而,下胚轴来源芽的生根较快,且生根效果好于子叶来源芽。该研究筛选出‘09-22’番茄子叶和下胚轴不定芽再生的最佳培养基配方为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 0.5mg/L,最佳生根培养基配方为MS+IAA 0.1mg/L。

Thidiazuron等植物生长调节剂对水稻(Oryza sativa L.)愈伤组织不定芽分化的影响

建立高效的植株再生体系是遗传转化的重要基础。以北方主栽水稻品种为试材 ,将 Thidiazuron(简称TDZ)应用于水稻愈伤组织的不定芽分化研究 ,探讨了 TDZ等植物生长调节剂对水稻愈伤组织不定芽分化和生长的影响。结果表明 ,TDZ显著促进水稻愈伤组织的不定芽分化 ,其细胞分裂素活性均大大高于 KT和 6 - BA,最佳使用浓度仅为 KT和 6 - BA的 1/ 10～ 1/ 2 0。不同 TDZ浓度对不定芽的分化效率在不同品种上有差异 ,东农 4 2 1品种在浓度为 0 .10 m g· L- 1时诱导效率最高 ,平均芽数达到 7.7个 /块 ,诱导效率达到 5 5 8.30 % ;东农 92 - 11品种在浓度为 0 .2 0 m g· L- 1时效果最佳 ,平均芽数为 7.9个 /块 ,分化效率高达 5 5 3%。高浓度的 TDZ有一定的毒害作用 ,导致愈伤组织褐化 ,诱导的不定芽出现矮化、叶片卷曲。

红阳猕猴桃快速繁殖体系的建立

以红阳猕猴桃(Actinidia chinensis cv.Hongyang)茎段作为外植体进行愈伤组织诱导、不定芽分化和生根培养,建立高效的猕猴桃快速繁殖途径。结果表明,茎段极易产生愈伤组织,在MS+0.8 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA培养基中,愈伤组织诱导所需时间短、出愈率高,不定芽的出芽率高、生长健壮;以1/2 MS为基本培养基,添加0.5 mg/L IBA对不定芽生根较为有利,生根率达到93.33%。