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Affinity Purification of Insulin by Peptide-Ligand Affinity Chromatography
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作者 董晓燕 付丽棠 俞海青 《Transactions of Tianjin University》 EI CAS 2007年第5期313-317,共5页
The affinity heptapeptide(HWWWPAS)for insulin,selected from phage display library,was coupled to EAH Sepharose 4B gel and packed to a 1-mL column.The column was used for the affinity purification of insulin from prote... The affinity heptapeptide(HWWWPAS)for insulin,selected from phage display library,was coupled to EAH Sepharose 4B gel and packed to a 1-mL column.The column was used for the affinity purification of insulin from protein mixture and commercial insulin preparation.It was observed that the minor impurity in the commercial insulin was removed by the affinity chromatography.Nearly 40 mg of insulin could be purified with the 1-mL affinity column.The results revealed the high specificity and capacity of the affinity column for insulin purification.Moreover,based on the analysis of the amino acids in the peptide sequence,shorter peptides were designed and synthesized for insulin chromatography.As a result,HWWPS was found to be a good alternative to HWWWPAS,while the other two peptides with three or four amino acids showed weak affinity for insulin.The results indicated that the peptide sequence of HWWWPAS was quite conservative for specific binding of insulin. 展开更多
关键词 affinity chromatography insulin purification peptide ligand ligand design
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SYNTHESIS OF INTERFERON-α_A MONOCLONAL ANTIBODY PACKING MATERIAL IN HIGH-PERFORMANCE AFFINITY CHROMATOGRAPHY AND PURIFICATION OF RECOMBINANT HUMAN INTERFERON-α_A
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作者 Wen Ke FENG Xin Du GENG Laboratory of Modern Separation Science, Department of Chemistry Northwest University, Xi’an 710069 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 1991年第5期383-386,共4页
A new way for the synthesis of human interferon—α_A monoclonal antibody (IFN-α_A-McAb) bound to silica gel packing material in high-performance affinity chromatography (HPAFC) has been developed. The high coupling ... A new way for the synthesis of human interferon—α_A monoclonal antibody (IFN-α_A-McAb) bound to silica gel packing material in high-performance affinity chromatography (HPAFC) has been developed. The high coupling efficiency and specific activity of IFN—α_A-McAb can be obtained by activated diol-silica gel with activating agent. After purification using this packing material in HPAFC, the specific activity of recombinant human interferon-α_A (rIFN-α_A) rose up to 1.03×10~7IU/mg protein and the purification efficiency is appoximately 100 times. 展开更多
关键词 IFN SYNTHESIS OF INTERFERON A MONOCLONAL ANTIBODY PACKING MATERIAL IN HIGH-PERFORMANCE affinity chromatography AND purification OF RECOMBINANT HUMAN INTERFERON
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Separation and Purification of Thrombin-like Enzymes by Affinity Adsorbents 被引量:2
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作者 杨青 Xu Xiaoming +4 位作者 Hu Xuejun Gao Xiaorong Dong Xinyan Su Zhiguo An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2001年第4期13-15,共3页
An affinity adsorbent, benzamidine Sepharose 4B, was used to separate and purify thrombin like enzymes. The p aminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombin like... An affinity adsorbent, benzamidine Sepharose 4B, was used to separate and purify thrombin like enzymes. The p aminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombin like enzyme-defibrase was used as a model in order to evaluate the efficiency of this biospecific affinity adsorbent. The homogeneity of the enzyme preparation was comfirmed as one band on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. 展开更多
关键词 affinity chromatography LIGAND Benzamidine purification Thrombin like enzyme
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Expression,purification and identification of LBD domain of human PPARδ in E.coli
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作者 Liu Hua Li Changqing +1 位作者 Ling Baodong Zhou Qinxin 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2009年第2期76-83,共8页
Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are ligand-activated transcription factors known to play a pivotal role in regulations of metabolism. In order to yield soluble ligand binding domain of PPARδ (P... Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) are ligand-activated transcription factors known to play a pivotal role in regulations of metabolism. In order to yield soluble ligand binding domain of PPARδ (PPARδLBD) for screening ligands, the cDNA was amplified using total RNA from HepG2 cells by RT-PCR. Then the enzyme-digested product was inserted . downstream of the malE gene in the vectorpMAL-p2x, which encoded maltose-binding protein (MBP), resulting in the expression of an MBP-PPARδLBD fusion protein. The recombinant plasmid was transformed into E. coli TBI that was cultured shakily at 30 ℃, 200 r/min and induced by 0.4 mmol/L IPTG for 6 h. The cells were harvested by centrifugation and broken by sonication. The expressed fusion protein was soluble and accounted for 0.31 of the total protein in the supernatant. Western blot analysis showed that the expressed MBP-PPARδLBD could bind to anti-MBP-antibody. The MBP-PPARδLBD fusion protein of 77 kDa and the PPARδLBD protein of 34 kDa were obtained by amylose-resin affinity chromatography without or with digestion of Factor Xa. They were both homogeneity, judged by SDS-PAGE. The recombinant MBP-PPARδLBD and PPARδLBD protein with high purity is obtained, which provides the necessary material for screening and researching PPARδ ligands. 展开更多
关键词 PPAδLBD Maltose-binding protein Soluble expression purification affinity chromatography
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Purification and characterization of human anti-HBsAg Fab fragment produced by genetic engineering technology
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作者 罗荣城 尤长宣 +2 位作者 韩焕兴 胡栋平 王传斌 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2000年第4期292-294,共3页
Objective: To obtain pure human monoclonal antibody (mAb) Fab fragments against HBsAg with good biological activity by genetic engineering technology. Methods: The specific anti-HBsAg phagemid was selected from establ... Objective: To obtain pure human monoclonal antibody (mAb) Fab fragments against HBsAg with good biological activity by genetic engineering technology. Methods: The specific anti-HBsAg phagemid was selected from established combinatorial library and transfected into E. coil XL1-blue. Its expression was induced by isopropyl β-D- thiogalactopyranoside (IPTG). The crude Fab supernatant was obtained after E. coli cells were frozen at - 20℃ and thawed repeatedly along with centrifugation. The goat anti-human IgG Fab was prepared by immunizing the goat with purified human IaG Fab. The affinity chromatography column with goat anti-human IgG Fab and GammaBind Plus Sepharose was obtained. The crude Fab super- natant was purified with affinity chromatography and the purity was assessed with SDS-PAGE and Western-blot, and biological activity was evaluated by Dot-blot test. Results: SDS-PAGE of the purified Fab displayed a side band, verified to be the Fab band by Western-blot test. Dot-blot test demonstrated that the purified Fab fragments posses good affinity to HBsAg. Conclusion: The success in purification of human anti-HBsAg Fab fragments with good biological activity makes it possible to be used as future therapeutic agents. 展开更多
关键词 HBsAg FAB affinity chromatography purification HUMAN
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色谱技术在抗体分离纯化中的应用进展
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作者 刘家玮 唐长伟 +1 位作者 夏一然 白泉 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期533-543,共11页
抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体... 抗体作为一类重要的生物药物,在疾病诊断和治疗等方面拥有广阔的前景。抗体药物的需求逐年上升,生产规模不断扩大,下游抗体纯化已经成为抗体药物生产的瓶颈。色谱技术具有选择性好、分离效率高等优点,在抗体纯化领域占据主导地位。抗体分离纯化流程一般包括样品的粗提、粗提物精制和抗体精纯3个步骤,每个步骤都涉及色谱分离技术。目前已有多种色谱技术(如亲和色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱、混合模式色谱以及新型的温敏色谱等)应用于抗体的分离纯化。本文介绍了近年来国内外各种色谱技术在抗体分离纯化方面所取得的研究进展,并对抗体色谱分离技术的未来发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 抗体 色谱技术 分离纯化 亲和色谱 混合模式色谱 温敏色谱 综述
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Ca^(2+)-亚氨二醋酸金属离子亲和色谱法吸附内毒素(英文) 被引量:1
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作者 André Moreni LOPES Jorge Sánchez ROMEU +4 位作者 Rolando Páez MEIRELES Gabriel Marquez PERERA Rolando Perdomo MORALES Adalberto PESSOA Lourdes Zumalacárregui CáRDENAS 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1194-1202,共9页
Endotoxins(also known as lipopolysaccharides(LPS)) are undesirable by-products of recombinant proteins,purified from Escherichia coli.LPS can be considered stable under a wide range of temperature and pH,making their ... Endotoxins(also known as lipopolysaccharides(LPS)) are undesirable by-products of recombinant proteins,purified from Escherichia coli.LPS can be considered stable under a wide range of temperature and pH,making their removal one of the most difficult tasks in downstream processes during protein purification.The inherent toxicity of LPS makes their removal an important step for the application of these proteins in several biological assays and for a safe parenteral administration.Immobilized metal affinity chromatography(IMAC) enables the affinity interactions between the metal ions(immobilized on the support through the chelating compound) and the target molecules,thus enabling high-efficiency separation of the target molecules from other components present in a mixture.Affinity chromatography is applied with Ca2+-iminodiacetic acid(IDA) to remove most of the LPS contaminants from the end product(more than90%).In this study,the adsorption of LPS on an IDA-Ca2+ was investigated.The adsorption Freundlich isotherm of LPS-IDA-Ca2+ provides a theoretical basis for LPS removal.It was found that LPS is bound mainly by interactions between the phosphate group in LPS and Ca2+ ligands on the beads.The factors such as pH(4.0 or 5.5) and ionic strength(1.0 mol/L) are essential to obtain effective removal of LPS for contaminant levels between endotoxin' concentration values less than100 EU/mL and 100 000 EU/mL.This new protocol represents a substantial advantage in time,effort,and production costs. 展开更多
关键词 immobilized metal affinity chromatography(IMAC) lipopolysaccharides(LPS) endotoxin removal recombinant proteins isotherms protein purification
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二化螟体内乙酰胆碱酯酶的分布及纯化方法 被引量:26
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作者 彭宇 王荫长 +2 位作者 韩召军 陈长琨 李国清 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期209-214,共6页
研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰... 研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰胆碱酯酶的活性最低 ,显著低于头部和腹部。成虫体内AChE的活性明显高于幼虫。在亚细胞的分布上 ,乙酰胆碱酯酶主要位于膜上 (86 % ) ,近 46 %的活性存在微粒体中。在 3种纯化乙酰胆碱酯酶的方法中 ,以 3 羧基苯基 乙基二甲基铵作配体的亲和层析法纯化效果最佳 ,乙酰胆碱酯酶的最高纯化倍数为 5 36 0 5倍 ,产率 30 46 %。 展开更多
关键词 二化螟 乙酰胆碱酯酶 分布 纯化方法 亲和层析
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凝血酶的亲和层析纯化技术 被引量:10
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作者 王海亭 修朝阳 +2 位作者 丁彩凤 王贵武 董宏伟 《青岛科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第3期225-228,共4页
以新鲜猪血为原料 ,采用离心、激活、沉淀等技术提取出粗凝血酶 ,利用化学方法将分子量范围在 6KD左右的肝素连接到经溴化氰活化的 Sepharose CL- 6B树脂上 ,制成亲和树脂 ;采用亲和方法 ,从粗酶中纯化得到猪凝血酶。活性测定表明 ,在... 以新鲜猪血为原料 ,采用离心、激活、沉淀等技术提取出粗凝血酶 ,利用化学方法将分子量范围在 6KD左右的肝素连接到经溴化氰活化的 Sepharose CL- 6B树脂上 ,制成亲和树脂 ;采用亲和方法 ,从粗酶中纯化得到猪凝血酶。活性测定表明 ,在保持酶的底物专一性的同时 ,凝血酶的比活上升了 32 .5倍左右。计算总活力回收率约 5 0 .6%。同时对肝素亲和层析柱的制备以及洗脱方法进行了探讨。 展开更多
关键词 凝血酶 亲和层析 纯化技术 分离 肝素 亲和树脂 制备
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亲和层析法分离纯化链激酶 被引量:3
10
作者 刘晨 赵芳 +2 位作者 金灿煌 袁敏伟 史炳照 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期241-242,共2页
采用自制的酰基化-Plg-Sepharose4B亲和层析分离纯化链激酶,NPGB作为酰化剂,8mol/L尿素进行洗脱,纯化约9倍,收率90%以上,比活为74000U/mg蛋白质,SDS-PAGE显示链激酶分子量为47... 采用自制的酰基化-Plg-Sepharose4B亲和层析分离纯化链激酶,NPGB作为酰化剂,8mol/L尿素进行洗脱,纯化约9倍,收率90%以上,比活为74000U/mg蛋白质,SDS-PAGE显示链激酶分子量为47000,未发生降解。NPGB酰化稳定,一次酰化后可反复使用20余次。 展开更多
关键词 链激酶 分离 纯化 亲和层析
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抗核糖核酸酶抑制因子抗体的制备与纯化 被引量:9
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作者 舒晓宏 李传刚 +4 位作者 张海涛 陈俊霞 田余祥 于丽华 崔秀云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期572-574,共3页
目的 :制备并纯化抗核糖核酸酶抑制因子 (RI)的抗体。方法 :从人胎盘中提取RI,经亲和层析纯化后免疫家兔制备RI抗体。用rProteinASepharoseFastFlow层析对抗RI抗体进行纯化 ,并用SDS PAGE、ELISA及Westernblot等进行鉴定。结果 :制备并... 目的 :制备并纯化抗核糖核酸酶抑制因子 (RI)的抗体。方法 :从人胎盘中提取RI,经亲和层析纯化后免疫家兔制备RI抗体。用rProteinASepharoseFastFlow层析对抗RI抗体进行纯化 ,并用SDS PAGE、ELISA及Westernblot等进行鉴定。结果 :制备并纯化了抗RI抗体 ,经SDS PAGE分析达到了电泳纯。结论 :获得了效价高、特异性强、稳定性好的抗RI抗体 。 展开更多
关键词 核糖核酸酶抑制因子 抗体 亲和层析 纯化
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亲和色谱法的进展 被引量:6
12
作者 张津辉 蒋中华 +1 位作者 陈惠鹏 马立人 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期253-256,共4页
概述了亲和色谱法分离机理、色谱填料及其应用的新进展,着重介绍了亲和固定相中配基发掘的新途径。全文包括66篇文献。
关键词 亲和色谱法 配基 分离纯化 填料 固定相
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IDA型Cu^(2+)-螯合亲和膜色谱法对牛肝过氧化氢酶纯化的研究(英文) 被引量:8
13
作者 杨利 贾凌云 +2 位作者 邹汉法 孔亮 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期292-295,共4页
首次采用以改性纤维素为基质、亚氨二乙酸(IDA)为取代配基的铜离子螯合膜色谱法对牛肝过氧化氢酶(BLC)的分离纯化进行了研究。缓冲液的pH值对BLC与螯合配基的结合影响显著。在选定的色谱条件下,BLC粗酶液经IDA型... 首次采用以改性纤维素为基质、亚氨二乙酸(IDA)为取代配基的铜离子螯合膜色谱法对牛肝过氧化氢酶(BLC)的分离纯化进行了研究。缓冲液的pH值对BLC与螯合配基的结合影响显著。在选定的色谱条件下,BLC粗酶液经IDA型Cu2+-螯合膜色谱柱一步纯化,比活性平均提高4.7倍,回收率为67.7%。金属螯合膜色谱柱可用含0.2mol/L的咪唑或50mmol/LEDTA-1mol/LNaCl的缓冲液再生,反复使用,后者比前者对柱子的再生效果更好。 展开更多
关键词 亲和色谱法 金属螯合膜 过氧化氢酶 纯化 牛肝
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鸡血浆纤维连接蛋白的提纯及酶联免疫吸附检测方法的建立 被引量:6
14
作者 梁礼成 刘建华 +2 位作者 赵继勋 金久善 王刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期324-329,共6页
利用纤维连接蛋白 (FN)与明胶特异结合的特点 ,用明胶亲和层析结合电泳裁胶的方法提纯鸡血浆FN并制备了兔抗鸡FN抗血清。纯化的FN经凝胶电泳鉴定为一条蛋白带且与人FN在同一位置上 ,亚单位分子量约 2 3 0KDa ;经免疫鉴定 ,提纯鸡血浆FN... 利用纤维连接蛋白 (FN)与明胶特异结合的特点 ,用明胶亲和层析结合电泳裁胶的方法提纯鸡血浆FN并制备了兔抗鸡FN抗血清。纯化的FN经凝胶电泳鉴定为一条蛋白带且与人FN在同一位置上 ,亚单位分子量约 2 3 0KDa ;经免疫鉴定 ,提纯鸡血浆FN与兔抗人FN抗体有交叉反应性。用兔抗鸡FN抗体包被捕捉抗原 ,建立了检测鸡血浆FN的双抗体酶联免疫吸附法(ELISA) ,此法具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点 ,适用于鸡血浆FN的检测。鸡血浆FN的提纯及其检测方法的建立 ,为FN在兽医领域的进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 纤维连接蛋白 明胶亲和层析 提纯 检测方法 酶联免疫吸附法 血浆型 电泳凝胶
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IDA型固定化镍离子金属螯合亲和膜色谱对人血清白蛋白的分离纯化 被引量:11
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作者 杨利 贾凌云 +1 位作者 邹汉法 张玉奎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期74-77,共4页
采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳... 采用自制的固定化镍离子亚氨二乙酸(IDA)型复合纤维素金属螯合膜色谱对药用人血清白蛋白的进一步纯化进行了研究。考察了pH对HAS吸附效果的影响。经一步纯化,商品药用HSA中的许多杂蛋白可被除去,经毛细管电泳分析,纯度与Sigma公司的电泳纯HSA相当,回收率可达85%以上。纯化蛋白液中的镍离子经过自制的N,N,N′三羧甲基乙二胺(TED)型螯合柱处理后可较好地除去。 展开更多
关键词 亲和色谱 人血清白蛋白 金属螯合 分离 纯化
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大豆凝集素的分离纯化及活性鉴定 被引量:7
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作者 车东升 刘飞飞 +3 位作者 穆成龙 张海全 孙泽威 秦贵信 《吉林大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1041-1044,共4页
以D-半乳糖胺为配基、FF-sepharose 4B为固定相,制备大豆凝集素亲和层析填料.分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白,测定其纯度、免疫原性和凝集活性,并与美国Sigma公司的标准品比较.结果表明:每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10... 以D-半乳糖胺为配基、FF-sepharose 4B为固定相,制备大豆凝集素亲和层析填料.分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白,测定其纯度、免疫原性和凝集活性,并与美国Sigma公司的标准品比较.结果表明:每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10 mg大豆凝集素;纯化获得的大豆凝集素分子量为30 000;SDS-PAGE测定纯度大于98%;Western blot结果为阳性;1 mg/mL SBA血集效价为1/210;其纯度、免疫原性和凝集活性等指标与大豆凝集素标准品相同,与理论值相符. 展开更多
关键词 大豆凝集素 纯化 亲和层析
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亲和色谱纯化蛋白质新进展 被引量:12
17
作者 韩金玉 那平 元英进 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期447-450,共4页
通过对35篇文献的综述。
关键词 亲和色谱法 蛋白质 纯化
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亲和层析法分离纯化纳豆激酶 被引量:11
18
作者 刘柳 李南薇 郭勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第16期58-61,共4页
目的:以纳豆激酶的作用底物纤维蛋白为配基制备亲和层析胶,分离纯化纳豆激酶。方法:纳豆杆菌发酵液经硫酸铵分段盐析、透析得粗酶,在4℃条件亲和层析法分离纯化,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacry... 目的:以纳豆激酶的作用底物纤维蛋白为配基制备亲和层析胶,分离纯化纳豆激酶。方法:纳豆杆菌发酵液经硫酸铵分段盐析、透析得粗酶,在4℃条件亲和层析法分离纯化,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对酶纯度进行检验。结果:经亲和层析得纳豆激酶为电泳纯,纯化倍数为8.3,回收率43.9%。纯酶的最适pH值和温度分别为pH7.0~9.0、50℃;温度高于60℃纤溶酶活性迅速下降;在pH6.0~10.0范围内稳定性好;Mg2+对其有微弱激活作用,Cu2+有显著抑制作用。结论:以琼脂糖包埋纤维蛋白制备的层析胶可用于纳豆激酶的快速分离纯化。 展开更多
关键词 纳豆激酶 分离纯化 亲和层析 纤维蛋白 酶学性质
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万古霉素的磁性亲和吸附分离 被引量:7
19
作者 郭立安 朱宝泉 陈代杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期584-586,共3页
A new kind of magnetic affinity microspheres (MAMS),whose ligand is D\|Ala\|D\|Ala,was prepared using agarose as matrix.By using this new MAMS vancomycin was purified directly from crude fermentation liquor with only ... A new kind of magnetic affinity microspheres (MAMS),whose ligand is D\|Ala\|D\|Ala,was prepared using agarose as matrix.By using this new MAMS vancomycin was purified directly from crude fermentation liquor with only one step.The purity and the mass recovery of vancomycin measured by reverse\|phase HPLC were 97% and 87%,respectively.The characteristic of this method was simpler,faster,cheaper and more effective than that of currently used ones. 展开更多
关键词 万古霉素 纯化 磁性分离 亲和色谱 吸附 分离
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金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究 被引量:13
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作者 李淑娟 孙永亮 +2 位作者 胡道道 陈超 崔亚丽 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期941-946,共6页
以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Seph... 以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2+的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。 展开更多
关键词 羧甲基天冬氨酸 CO^2+ 金属螯合亲和层析 纯化 多聚组氨酸融合蛋白
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