应激性高血压大鼠肾脏组织中CTGF、MMP-9、TNF-α的表达变化及其意义

目的通过检测应激性高血压(stress-induced hypertention,SIH)大鼠肾组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平变化,初步探讨CTGF、MMP-9、TNF-α在应激性高血压大鼠肾脏损伤中的作用。方法应用复合应激建立SIH的动物模型,放射免疫法检测血浆中醛固酮(aldosterone,ALD)、血管紧张素II(Angiotensin II,Ang II)含量的变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及免疫组化检测大鼠肾组织中CTGF、MMP-9、TNF-α的表达变化。结果与正常对照组相比,SIH大鼠血浆中ALD、Ang II的含量明显升高(P<0.05),差异有统计学意义;SIH组大鼠肾脏CTGF、MMP-9、TNF-α的蛋白表达水平较正常对照组相比明显升高(P<0.05);CTGF的mRNA水平较正常对照组显著升高(P<0.05),但MMP-9无明显变化,而TNF-α较正常对照组相比是下调的。结论CTGF、MMP-9、TNF-α可能是SIH大鼠所至肾损伤的重要原因。

复合应激因素对应激性高血压大鼠肾脏的损伤作用及意义

目的在复合应激因素作用下,成功建立应激性高血压(stress-induced hypertention,SIH)大鼠模型,探讨SIH大鼠模型肾脏损伤的机制在SIH发生、发展过程中的作用,为应激性高血压肾脏损伤的防治提供实验依据。方法建立应激性高血压大鼠模型,记录左颈总动脉血压值,放射免疫法检测血浆皮质醇及内皮素含量的变化;光镜下观察肾脏的形态学变化以及Masson染色结果;采用速率散射比浊法测定尿微量蛋白水平;利用免疫散射比浊法检测尿蛋白水平。结果(1)成功建立应激性高血压大鼠模型,与正常对照组相比,SIH模型组大鼠收缩压和舒张压均明显升高(P<0.05),应激相关激素皮质醇及内皮素含量明显升高(P<0.05)。(2)光镜结果显示,SIH模型组大鼠肾脏组织肾小球固缩,肾小囊间隙增宽;Masson结果显示,SIH模型组大鼠肾间质,肾小管及肾小球可见大量染成蓝色的胶原纤维;(3)24 h尿蛋白与尿微量蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论本研究成功建立了应激性高血压大鼠模型,应激性高血压大鼠出现肾脏损伤的病理改变。

中药缓压乐复方制剂对应激性高血压大鼠心肌组织受磷蛋白磷酸化水平的调节作用

目的探讨中药缓压乐复方制剂对应激性高血压(stress induced hypertension,SIH)大鼠心肌组织受磷蛋白(Phospholamban,PLB)磷酸化水平的调节作用。方法用复合应激因素建立SIH大鼠模型的基础上,以中药缓压乐复方制剂进行干预。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学方法分别检测SIH模型组、正常组、药物干预组和阴性对照组大鼠心肌组织内源性抑制剂1(endogenous inhibitor 1,I-1)基因mRNA表达以及PLB蛋白的磷酸化水平。结果与正常组相比,模型组大鼠心肌组织I-1基因mRNA表达水平明显下调(P<0.05),用药物干预后明显上调(P<0.05);与正常组相比,模型组大鼠心肌组织PLB蛋白磷酸化水平明显下调(P<0.05),而用药物干预后明显上调(P<0.05)。结论中药缓压乐复方制剂可能通过PLB磷酸化水平的上调,增强SERCA2a蛋白的活性,从而增加肌质网对Ca^2+的重吸收。

应激性高血压大鼠血管组织内质网应激与血管紧张素Ⅱ受体1型的关系及其意义

目的初步探讨应激性高血压(Stress-induced hypertension,SIH)大鼠血管组织内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)与血管紧张素Ⅱ受体1型(AngiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)的关系。方法通过复合应激建立SIH模型。对大鼠胸主动脉石蜡包埋组织进行HE染色,观察大鼠胸主动脉壁中层平滑肌层的形态学变化;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法﹑免疫组织化学(IHC)方法及Western印迹(WB)对大鼠胸主动脉组织进行grp78和at1r基因mRNA表达水平以及GRP78和AT1R的蛋白表达水平的检测。结果与正常组相比,SIH模型组中膜肌层血管平滑肌细胞(vescular smooth muscle cell,VSMC)肥大、动脉血管壁增厚、细胞排列较紊乱、弹性膜弯曲及紊乱;SIH模型组大鼠胸主动脉血管组织中at1r基因mRNA表达水平较正常组显著升高(P<0.05);与正常组相比,GRP78和AT1R在SIH模型组大鼠胸主动脉组织中高表达(P<0.05)。结论SIH模型组大鼠血管组织中有ERS的发生,ERS下游信号分子通过激活转录因子诱导血管组织中ATIR的高表达,从而引起血压的升高。

慢性复合应激诱发高血压动物模型的制备

目的:应用多重刺激手段,模拟上班白领族遭受的常见复合应激因素,制备慢性应激性高血压(SIH)大鼠模型,为进一步探讨SIH的发生、发展机制奠定基础。方法:健康成年Wistar大鼠30只随机分为传统模型组(n=10)、自建模型组(n=10)及正常对照组(n=10)。传统模型组接受足底电击结合工业噪声复合刺激,自建模型组应用不规则震荡、不良音乐、部分睡眠剥夺复合刺激法。正常对照组不接受应激刺激。建模时间为4周,在应激刺激0、7、14、21、28日(分别以D0、D1、D7、D14、D21、D28表示)测定各组收缩压及心率。第二十九日颈动脉插管取血4mL,分离血浆,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及皮质醇水平,高效液相色谱(HPLC)法测定血浆儿茶酚胺含量。结果:传统模型组收缩压在应激刺激第七天较基础值上升约15mmHg,在第十四天达高峰(140.6±4.3)mmHg,而后略下降,但仍维持在高水平直至第二十八天;自建模型组SBP变化趋势与传统模型组类似,但上升时间及达高峰时间均晚1周;在观察期,正常对照组收缩压平稳。传统模型组及自建模型组心率在应激刺激1周后即开始增加,自第二周开始维持心率在较高水平,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。传统模型组及自建模型组血浆血管紧张素Ⅱ、去甲肾上腺素、肾上腺素、皮质醇水平均显著高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用不规则震荡、不良音乐、部分睡眠剥夺复合刺激法可成功诱发实验大鼠产生SIH,成功制备SIH大鼠模型。