血塞泰对缺血性脑卒中大鼠STIM1、Orai1蛋白表达的影响

目的研究血塞泰对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)大鼠基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,Orai1)的影响。方法选取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术组10只、造模组50只,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(medial cerebral artery occlusion,MCAO)模型。采用随机数字表法将造模成功的41只大鼠分为模型组、血塞泰低剂量组(12.6 g/kg)、血塞泰中剂量组(25.2 g/kg)、血塞泰高剂量组(50.4 g/kg)和阿司匹林肠溶片组(18 mg/kg),其中血塞泰低剂量组9只,其余每组各8只;假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。每组连续干预7 d。采用改良神经功能损伤评分(modified Neurological Severity Score,mNSS)评估各组大鼠神经功能损伤情况,TTC染色法检测大鼠脑组织的梗死面积,ELISA法测定大鼠血清中的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,RT-PCR检测脑组织中STIM1、Orai1 mRNA的表达,免疫共沉淀检测脑组织STIM1、Orai1的蛋白相对表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠mNSS评分增加(P<0.01),脑梗死率增加(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平和蛋白相对表达水平升高(P<0.01)。与模型组相比,血塞泰各剂量组和阿司匹林肠溶片组大鼠mNSS评分下降(P<0.05),血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.01);血塞泰中、高剂量组和阿司匹林肠溶片组大鼠脑梗死率下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1的蛋白相对表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与阿司匹林肠溶片组相比,血塞泰低剂量组脑梗死率增加(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平增加(P<0.05);血塞泰中剂量组血清IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.05,P<0.01);血塞泰高剂量组脑梗死率下降(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量明显下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。与血塞泰低、中剂量组相比,血塞泰高剂量组mNSS评分下降(P<0.05,P<0.01),脑梗死率下降(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.01)。结论血塞泰能够抑制STIM1、Orai1的表达及结合,减轻炎症反应,改善MCAO大鼠神经功能缺损与降低神经元损伤,从而发挥抗IS的作用。

连续性血液净化治疗脓毒症患者血清STIM1、sP-selectin水平变化及与预后的关系

目的探究连续性血液净化(CBP)治疗脓毒症患者血清基质相互作用分子1(STIM1)、可溶性P选择素(sP-selectin)水平变化及与预后的关系。方法收集我院2021年6月—2023年6月收治的150例CBP治疗的脓毒症患者作为观察对象(CBP组),根据28 d预后情况,将患者分为预后良好组113例和预后不良组37例,同时选取在我院健康门诊体检的健康者136例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中STIM1、sP-selectin水平,多因素Logistic回归分析CBP治疗脓毒症患者预后不良发生的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清STIM1、sP-selectin水平对CBP治疗脓毒症患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,CBP组血清STIM1、sP-selectin水平显著升高(P<0.05);预后不良组CBP时间、活化部分凝血酶原时间(APTT)、C反应蛋白(CRP)、STIM1、sP-selectin水平显著高于预后良好组(P<0.05);APTT、STIM1、sP-selectin是影响CBP治疗脓毒症患者预后不良发生的独立危险因素(P<0.05);STIM1、sP-selectin水平和二者联合预测发生预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.795、0.761、0.886,二者联合预测价值优于单独预测(Z=2.169、2.881;P=0.030、0.004)。结论脓毒症患者血清中STIM1、sP-selectin水平升高,与患者CBP治疗预后不良发生有关,可作为CBP治疗脓毒症患者病情和预后评估的标志物。

SCOE关键蛋白Stim1和Orail在肿瘤中的研究进展

钙离子(Ca^(2+))是参与细胞信号转导重要的第二信使,Ca^(2+)失调可能会导致病理变化。钙池操纵Ca^(2+)内流(SOCE)是一种胞外-胞内信号转导的独特方式,可以调控细胞内外Ca^(2+)的动态平衡,异常的钙信号与恶性肿瘤细胞上皮-间充质转化、肿瘤血管生成、侵袭迁移及肿瘤免疫密切相关。钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)是一种参与SOCE的Ca^(2+)通道,在SOCE激活过程中Orai1主要受基质相互作用分子(Stim)蛋白尤其是Stim1的调控,在几种细胞类型的Ca^(2+)稳态中起关键作用。Stim1异常表达不仅可导致包括恶性肿瘤在内的多种疾病发生,还与恶性肿瘤发生耐药的机制息息相关,有望为肿瘤的临床治疗提供新靶点。

血清基质交感分子1、视黄醇结合蛋白4水平对高血压肾病患者的诊断价值研究

目的探讨基质交感分子1(matrix sympathetic molecule 1,STIM1)、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)在高血压肾病患者血清中的表达水平,分析其诊断价值。方法选取2020年3月至2021年3月三二〇一医院收治的高血压肾病患者88例为高血压肾病组,单纯高血压患者88例为高血压组,另外选取同期体检健康者88名为健康组。采用酶联免疫法检测血清STIM1和RBP4水平;Pearson法分析血清STIM1和RBP4水平的相关性及其与血压、肾功能指标的相关性;Logistic回归分析高血压肾病的影响因素;受试者工作特征曲线分析血清STIM1、RBP4水平对高血压肾病的诊断价值。结果高血压肾病组尿素氮[(8.26±3.37)mmol/L比(5.46±2.31)mmol/L、(5.63±2.54)mmol/L]、尿酸[(375.53±71.41)μmol/L比(342.80±59.75)μmol/L、(352.68±65.24)μmol/L]、血肌酐[(105.34±34.19)μmol/L比(68.31±20.19)μmol/L、(71.63±22.55)μmol/L]显著高于健康组和高血压组(P<0.05),估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)显著低于健康组和高血压组(P<0.05);健康组、高血压组、高血压肾病组血清STIM1[(30.61±6.25)μg/L、(36.63±8.27)μg/L、(48.10±11.06)μg/L]、RBP4[(42.26±5.23)ng/mL、(51.98±8.70)ng/mL、(66.61±13.79)ng/mL]水平显著依次增高,两两比较差异有统计学意义(P<0.05);高血压肾病组血清中STIM1、RBP4的水平呈正相关;高血压肾病组血清STIM1、RBP4水平与尿素氮、尿酸、血肌酐呈正相关,与eGFR呈负相关(P均<0.05);Logistic多因素回归分析得知STIM1高表达、RBP4高表达、血肌酐、eGFR是影响高血压患者发生高血压肾病的独立危险因素(P<0.05);血清STIM1、RBP4诊断高血压患者发生高血压肾病的曲线下面积为0.798、0.744,二者联合诊断高血压肾病的曲线下面积为0.852,灵敏度为75.29%,特异度为88.21%,二者联合优于血清STIM1、RBP4各自单独诊断(Z联合vsSTIM1=2.219、Z联合vsRBP4=3.385,P均<0.05)。结论血清STIM1、RBP4水平在高血压肾病患者中呈现高表达,二者联合对于高血压肾病具有一定诊断价值。

基质相互作用分子1/钙通道蛋白1在哮喘气道高反应性中的上皮表达和作用

目的 探讨基质相互作用分子1(STIM1)/钙通道蛋白1(Orail)在哮喘气道高反应性(AHR)中的上皮表达和作用。方法 将小鼠分为对照组、鸡卵清蛋白(OVA)组和OVA+sh-STIM1组,每组12只。除对照组外,其余组建立OVA诱导的小鼠急性哮喘模型。OVA+sh-STIM1组通过鼻内给予sh-STIM1进行干预。通过免疫荧光染色检查肺组织中STIM1表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平。分析在人气道平滑肌细胞(HASMC)中,STIM1敲低对气道平滑肌(ASM)细胞的收缩力和钙离子(Ca2+)流入的影响。结果 STIM1主要在支气管上皮中表达,鼻内给予sh-STIM1可减轻小鼠的AHR和炎症。体外实验中,STIM1敲低通过阻断Oria1介导钙库操纵的钙内流来抑制HASMC细胞收缩。结论 上皮细胞中STIM1调节气道平滑肌收缩和AHR,其作用机制与激活Oria1介导的钙内流有关。

绿原酸通过基因编码基质相互作用分子/钙释放激活钙调节蛋白通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化的机制

目的探讨绿原酸(CGA)通过基因编码基质相互作用分子1(Stim1)/钙释放激活钙调节蛋白1(Orai1)通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、CGA组,每组各10只。采用高脂饲料饲养加腹腔注射50 mg/kg的链脲佐霉素(STZ)建立糖尿病AS小鼠模型,对照组采用普通饲料+等量生理盐水,CGA组建立模型后给予CGA干预,模型组给予等量生理盐水。HE染色、油红O染色观察动脉斑块情况;CCK-8检测主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖活力;qPCR检测Stim1、Orai1表达水平。结果CGA组、模型组的斑块沉积面积大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的斑块沉积面积小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的VSMCs增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的VSMCs增殖率低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的Stim1、Orai1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的Stim1、Orai1水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CGA能够改善糖尿病AS及VSMCs增殖,其机制可能与调节Stim1/Orai1通路有关。

基质交感分子1和骨保护素对急性冠脉综合征合并2型糖尿病患者经皮冠状动脉介入治疗术后支架内再狭窄的影响研究

目的探讨基质交感分子1(STIM1)和骨保护素(OPG)对急性冠脉综合征(ACS)合并2型糖尿病(T2DM)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后支架内再狭窄(ISR)的影响。方法选取2012年10月—2013年10月河北医科大学第三医院心内科收治的100例ACS合并T2DM患者为研究对象,均成功行PCI术。于术后8个月复查冠状动脉造影,根据是否存在ISR,分为ISR组35例和对照组65例。记录100例患者的性别、年龄、高血压、吸烟等一般资料;在PCI术前,测定患者的高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血脂、血糖等生化指标;在PCI术后,测定患者的STIM1和OPG水平。结果两组的年龄、性别、吸烟率、高血压患病率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者的总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖(FPG)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);hs-CRP、STIM1、OPG水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,hs-CRP、STIM1、OPG对PCI术后发生ISR的影响有统计学意义(P<0.05)。结论 STIM1、OPG是ACS合并T2DM患者PCI术后发生ISR的危险因素。

动脉平滑肌细胞STIM1过表达上调Akt/mTOR通路并促进细胞增殖

目的观察基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在肺动脉高压组织中的表达,并探讨STIM1对动脉平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法一次性腹腔注射野百合碱(MCT)建立肺动脉高压大鼠模型;实时定量PCR和蛋白印迹分别测定肺动脉高压大鼠肺组织STIM1 mRNA和蛋白的表达;采用基因转染技术建立STIM1瞬时高表达的动脉平滑肌A7R5细胞模型;用CCK-8法测定细胞增殖能力;用蛋白印迹测定Akt/m TOR通路分子的表达。结果与对照组相比,MCT组的右心室收缩压(RVSP)和右心重量指数(RVMI)均明显增高(P<0.01),形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小;MCT组大鼠STIM1 mRNA和蛋白表达量分别是对照大鼠的2.19和1.66倍;STIM1瞬时过表达的动脉平滑肌细胞与对照组相比,生长速度加快;STIM1过表达可明显增加Akt、m TOR、p70-S6K和4E-BP1的磷酸化水平,而对它们的蛋白水平没有影响。结论肺动脉高压发病中存在STIM1的过表达,STIM1可促进动脉平滑肌细胞增殖,其机制与上调Akt/mT OR信号转导通路相关。

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率>80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P<0.05)。结论:STIM1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。

PCI术后血清S1P和STIM1含量对支架内再狭窄的预测价值及其与血管新生、炎症反应的相关性

目的:研究经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后血清S1P和STIM1含量对支架内再狭窄的预测价值及其与血管新生、炎症反应的相关性。方法:选择在我院接受PCI治疗的130例患者并根据PCI术后6~24个月复查冠状动脉造影的结果判断是否发生支架内再狭窄,分为再狭窄组和非再狭窄组。检测PCI术后24小时的血清S1P、STIM1、血管新生分子、炎症反应分子的含量。结果:再狭窄组患者血清中S1P、NO、VEGF、Angptl2、Angptl4的含量均显著低于非再狭窄组,STIM1、IFN-γ、IL-18、VCAM-1、P-选择素、L-选择素的含量均显著高于非再狭窄组;STIM1降低的再狭窄患者血清中NO、VEGF、Angptl2、Angptl4的含量均显著高于STIM1正常的再狭窄患者;S1P降低的再狭窄患者血清中IFN-γ、IL-18、VCAM-1、P-选择素、L-选择素的含量均显著高于S1P正常的再狭窄患者。结论:PCI术后血清S1P含量降低、STIM1含量升高对支架内再狭窄具有预测价值并且与血管新生障碍、炎症反应激活密切相关。

血清STIM1及Adropin含量对PCI术后心血管事件和再狭窄的预测价值研究

目的:研究血清基质交感分子1(STIM1)及Adropin含量对经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心血管事件和再狭窄的预测价值。方法:选择在广东省高州市人民医院接受PCI的单支冠状动脉病变病患者进行研究,筛选PCI术后6个月时支架内狭窄超过50%的45例纳入ISR组、支架内狭窄未超过50%的85例纳入NISR组,测定两组血清STIM1、Adropin、NO含量以及外周血中内皮祖细胞含量、内皮微粒数目。结果:ISR组血清中STIM1的含量高于NISR组且STIM1含量与管腔狭窄程度呈正相关,ISR组血清中Adropin的含量低于NISR组且Adropin含量与管腔狭窄程度呈负相关;ISR组外周血中内皮祖细胞含量、血清中NO含量少于NISR组,外周血中内皮微粒数目多于NISR组;血清STIM1含量与外周血中内皮微粒数目呈正相关、与外周血中内皮祖细胞含量呈负相关,血清Adropin含量与外周血中内皮微颗粒数目呈负相关、与外周血清中NO含量呈正相关。结论:血清STIM1含量升高、Adropin含量降低与PCI术后心血管事件和再狭窄的发生相关,两类分子主要影响内皮细胞功能和内皮祖细胞归巢。

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的探讨基质相互作用分子1（STIM1）基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用。方法原代培养血管平滑肌细胞，用构建好的大鼠STIM1干扰腺病毒载体（Ad—si／rSTIMl）和人重组STIM1腺病毒载体（Ad-hSTIM1）进行转染，Western blot检测细胞STIM1表达，^3H胸腺嘧啶核苷（^3H—TdR）掺入法和细胞计数测定细胞增殖，激光共聚焦检测细胞内钙变化。结果Ad—si／rSTIM1转染后48h后细胞STIM1表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低（P〈0．05），细胞内钙浓度也明显下降（P〈0．05），细胞增殖被显著抑制（P〈0．05）；Ad—hSTIM1共转染后48h细胞STIM1表达恢复到正常水平；细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平。结论STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度，并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。

RNA干扰沉默STIM1表达对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的应用RNA干扰抑制肺动脉平滑肌细胞(pulmonary aretery smooth muscle cells,PASMCs)基质交感分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)基因表达,探讨STIM1表达抑制后对PASMCs缺氧增殖反应的影响。方法采用离体培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,设对照组、阴性siRNA组(SiNT)及阳性siRNA组(SiSTIM1),低氧(3%O2)培养24 h,Western blot法检测PASMCs中STIM1基因表达变化,MTT比色法及[3H]-TdR掺入法检测PASMCs的增殖情况,流式细胞仪检测PASMCs的细胞周期变化。结果 Western blot检测SiSTIM1组STIM1蛋白相对灰度值为(0.355±0.008),显著低于对照组(0.624±0.017)和SiNT组(0.618±0.021)(P<0.05)。MTT比色实验及[3H]-TdR掺入实验显示低氧培养24 h后,对照组和SiNT组PASMCs较常氧组增殖显著(P<0.05),而SiSTIM1组PASMCs增殖活性较对照组和SiNT组显著降低(P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明低氧培养24 h后,对照组和SiNT组PASMCs G0/G1期细胞比例较常氧组显著降低(P<0.05),而SiSTIM1组G0/G1期细胞比例则显著高于对照组和SiNT组(P<0.05)。结论 RNA干扰介导STIM1基因沉默可明显抑制低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。

冷应激对高血压大鼠交感神经活性及脑干基质交感分子1表达的影响

目的观察冷应激对自发性高血压(SHR)大鼠交感神经活性及脑干基质交感分子1(Stim1)表达的影响。方法选择雄性SHR及正常大鼠各10只,将正常大鼠随机分为正常对照组、单纯冷应激组各5只,SHR大鼠随机分为SHR模型组、SHR冷应激组各5只。正常对照组及模型对照组均置于24℃的代谢笼中6 h,单纯冷应激组及SHR冷应激组均置于4℃代谢笼中6 h进行诱发冷应激。应用Panlab NIBP System无创血压测量系统测量各组大鼠尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP);采用代谢笼法收集各组大鼠尿液,高效液相色谱仪检测尿去甲肾上腺素(NE)排泄量。取脑干组织,采用实时定量PCR法检测脑干Stim1 mRNA表达,Western blotting法检测脑干Stim1蛋白表达。结果单纯冷应激组SBP、DBP和尿NE排泄量均高于正常对照组;SHR冷应激组SBP、DBP和尿NE排泄量均高于SHR模型组和单纯冷应激组;SHR冷应激组脑干Stim1 mRNA及蛋白表达均低于SHR模型组和单纯冷应激组(P均<0.01)。结论冷应激下,Stim1可能为调控交感神经活性的关键基因。

血管疾病治疗新靶标:STIM1和Orai1

钙离子（Ca^2＋）是常见的第二信使，不同于其它第二信使，其主要位于细胞外或存储于内质网（endoplasmicreticulum，ER）等细胞器内。静息状态下细胞内游离Ca^2＋浓度（intracellular Ca^2＋ concentra．tion，[Ca^2＋]i）约为细胞外的1／20000，受体激活或生物信号刺激可通过改变[Ca^2＋]i进一步发挥生物放大效应。[Ca^2＋]；

TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);在四种不同处理作用下,TRPC1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);与Control组、TRPC1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);TRPC1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下作用增强。结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成。

钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用

目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。

STIM1及其相关蛋白在脂筏介导的细胞内钙信号中的作用机制

脂筏是膜脂双层内富含特殊脂质(胆固醇和鞘脂)和蛋白质的微区,脂筏作为独特的信号转导平台不仅可以为内部分子提供一个"交流"的环境,也有助于加快信号传递。Ca2+作为重要的信号分子,参与调控细胞许多生理功能。细胞内Ca2+浓度受各种信号分子,钙泵和钙池操纵的Ca2+内流等多种因素调节。最新研究发现:瞬时受体电位通道的一些成员、基质相互作用分子1以及Orai1在钙池操纵的钙通道介导的Ca2+内流过程中发挥着重要的作用。大量Ca2+通道和蛋白质(包括钙信号途径的关键蛋白)在脂筏微区集聚,脂筏功能越来越受到人们的关注。

大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞过度增殖与基质交感分子1的关系研究

目的研究大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞中基质交感分子1(STIM1)的表达变化情况,揭示平滑肌细胞增殖的内在机制。方法采用大鼠颈动脉球囊损伤后血管再狭窄的动物模型,18只SD大鼠随机均分为3组:对照组、损伤7d组和损伤14d组。免疫组织化学染色和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测增生的血管平滑肌细胞中STIM1的表达变化,HE染色评价血管增生情况。结果正常大鼠颈动脉内膜与中膜面积比值(IA/MA)很小,损伤7d组IA/MA值显著高于对照组(P<0.05);损伤14d组IA/MA值显著高于7d组(P<0.05)。损伤后7d血管壁STIM1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05);损伤后14d血管壁STIM1 mRNA显著高于7d组(P<0.05)。免疫组化显示STIM1在血管壁的表达主要位于增殖的平滑肌细胞中,随损伤时间延长其表达量逐渐升高。结论颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖伴有STIM1表达的上调,STIM1可能参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。

STIM1对高糖环境下系膜细胞内钙和凋亡的影响

目的研究基质相互作用分子1(STIM1)在高糖诱导系膜细胞损伤中的作用及机制。方法以人肾小球系膜细胞作为研究对象,实验分为正常组(N组),高糖(high glucose)作用12小时及24小时组(HG12h及HG24h组),应用Real-time PCR及Western-blot方法分别检测在不同作用时间下高糖引起系膜细胞STIM1 mRNA及蛋白表达变化,通过激光共聚焦实验观察在高糖诱导下系膜细胞内钙变化,以及应用Tunel实验检测系膜细胞凋亡情况,观察应用STIM1siRNA基因转染对系膜细胞内钙及凋亡的影响。结果实验显示,HG12h组与N组比较STIM1mRNA含量及蛋白表达均明显增加(P<0.05),HG24h组与N组比较STIM1mRNA含量及蛋白表达显著增加(分别为P<0.01及P<0.05);激光共聚焦结果表明,HG12h组及HG24h组与N组比较,系膜细胞内钙明显升高(P<0.05);Tunel实验显示,HG12h组及HG24h组与N组比较,系膜细胞凋亡增加(P<0.01);STIM1siRNA基因转染组与未转染组相比系膜细胞内钙明显减少(P<0.05),细胞凋亡减轻(P<0.05)。结论高糖可以诱导系膜细胞内钙变化,细胞发生凋亡,STIM1在其中起着重要作用。