大鼠蛛网膜下腔出血后NLK在基底动脉壁的表达变化

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血（subamchnoidhemorrhage，SAH）后Nemo样激酶（nemo—likekinase，NLK）在基底动脉壁中的表达变化及其与脑血管痉挛（cerebralvasospasm，CVS）的关系。方法60只健康成年SD大鼠随机分为对照组（NS组）和SAH组，SAH组又分为1d、3d、5d、7d和14d5个亚组各10只大鼠。应用枕大池一次注血法制成SAH动物模型；通过HE染色光镜下观察基底动脉的病理学变化，测定血管壁厚度及血管腔内径，计算出不同时期的基底动脉血管腔横截面积，以此评价脑血管痉挛；并应用免疫组化法及Westernbolt评估大鼠基底动脉管壁NLK在不同时间点的表达。结果HE染色显示SAH组大鼠基底动脉管腔狭窄，内膜皱褶，平滑肌细胞肥大，3d时病理学变化最显著，管腔狭窄明显，血管腔横截面积约为对照组的43．5％，且管壁明显增厚，约为对照组的1．7倍，之后狭窄程度逐渐减轻，14dfl~接近正常。SAH后基底动脉壁NLK逐渐减少，表达低谷为注血后3d，随后开始表达增加，14d基本恢复至正常水平。结论通过构建大鼠枕大池一次注血模型，能够观察到基底动脉发生明显的细胞形态改变、管壁的增厚及管腔的狭窄，提示SAH后存在CVS；SAH后NLK在基底动脉壁的表达先下降后上调，并与CVS的时相基本一致，提示NLK可能参与CVS的病理过程。

蛛网膜下腔出血后大鼠脑组织中ERK5的表达研究

目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑组织中的分布和表达变化。方法成年雄性SD大鼠72只,分为对照组、SAH后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h共6组(每组12只)。通过建立大鼠SAH模型,于SAH后不同时间点,应用免疫印迹技术和免疫组化检测SAH后脑组织中ERK5的分布和表达变化。结果大鼠SAH后6 h脑组织中p-ERK5蛋白水平开始升高,24 h达到高峰,其后逐渐下降,72 h仍高于对照组。同时,对照组中p-ERK5主要定位于胞浆,SAH后p-ERK5胞核阳性增加,24 h达到高峰,其后胞核胞浆阳性都下降。结论大鼠SAH后早期伴有ERK5信号通路的激活,提示ERK5信号通路可能参与SAH后早期脑损伤中的病理生理改变。

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶9(MMP⁃9)的表达在蛛网膜下腔出血(SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞(HBMEC)株分为AngⅡ组、AngⅡ+SB203580组和对照组。其中AngⅡ组以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;AngⅡ+SB203580组以5μΜ的SB203580处理20 min后以100μg/L浓度AngⅡ处理90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入RPMI⁃1640培养液培养90 min、2 h、4 h、6 h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液MMP⁃9水平,并以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(5.81±1.72)μg/L,P<0.01]水平升高,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9[处理12 h:(4.21±1.36)μg/L比(3.64±1.45)μg/L,P<0.01]水平降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞上清液MMP⁃9水平降低(P<0.001)。与对照组比较,AngⅡ组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.538±0.071),P<0.05)]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.635±0.133),P<0.001]升高,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA[处理12 h:(0.422±0.057)比(0.375±0.066),P<0.05]和蛋白表达水平[(0.452±0.105)比(0.276±0.081),P<0.001]降低(P<0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+SB203580组细胞p38 MAPK的mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.001)。结论AngⅡ可能通过激活p38 MAPK信号通路上调MMP⁃9表达从而促进SAH发生发展。