^(125)I-substance P测定家兔脑内P物质受体的新方法

目的建立一种125I-substanceP（SP）测定脑内SP受体的方法。方法15只家兔断头后取下丘脑和腹侧延髓，低温（0－4℃）离心法制备突触小体，考马斯亮兰蛋白测定剂检测匀浆受体蛋白含量，不同浓度的125I-SP与受体制品孵育后，离心法终止配体受体结合反应，最后以γ闪烁计数仪测出总结合量和非特异结合量，计算特异结合值，根据Scatchard公式求出SP受体总数Bmax，和平衡解离常数Kd。结果1．下丘脑：Bmax107．8±5．2foml／mg受体蛋白，Kd=0.0149±0．004nM；延髓：Bmax33．90±2．22foml／mg受体蛋白；Kd＝0．0141±0．006nM。2．125I－SP终浓度为1．56×10-7M时特异结合与非特异结合比值高于终浓度为3．12×10-7M（P＜0．05）；结论本方法简便，快速，特异结合信号较强，费用低；125I-SP的用量是影响其与SP受体特异结合的重要因素。