粪便菌群移植通过调节Th17/Treg平衡发挥对帕金森小鼠的保护作用

目的:探讨粪菌移植对Th17/Treg平衡的调控及帕金森病(PD)小鼠的神经保护作用。方法:将18只小鼠均分为正常对照组、粪菌移植对照组及粪菌移植组,后两组采用—方法建立PD模型;粪菌移植组小鼠在建立PD模型后、以正常对照组小鼠的粪便菌悬液灌胃,粪菌移植对照组和正常对照组予生理盐水灌胃;爬杆实验评价小鼠的行动能力,牵引实验评价小鼠肌肉力量及平衡能力;Real-time PCR、Western blot检测小鼠黑质致密部(SNpc)RORγt、Foxp3 m RNA及蛋白表达;免疫荧光双染检测小鼠SNpc中Th17细胞(RORγt+CD4+)及Treg细胞(Foxp3+CD4+)的表达;ELISA检测小鼠纹状体中DA、5-HT的表达以及外周血与SNpc中IL-17A、IL-22、TGF-β、IL-10的表达。结果:与粪菌移植对照组比较,粪菌移植组小鼠爬杆实验中返回到杆底部的时间明显缩短(P<0.01),牵引实验中得分明显增加(P<0.01),小鼠SNpc中RORγt m RNA和蛋白的表达明显下调(P<0.01),粪菌移植组小鼠Foxp3 m RNA及蛋白表达明显上调(P<0.01),小鼠纹状体内DA及5-HT的含量明显升高(P<0.01),小鼠外周血与SNpc中IL-17A与IL-22的含量明显下调(P<0.01),IL-10与TGF-β明显上调(P<0.01),小鼠SNpc中Th17细胞(RORγt+CD4+)的数量有所下调,而Treg细胞(Foxp3+CD4+)的数量有所上调。结论:粪便移植对PD小鼠有神经保护作用,其机制可能与调节Th17/Treg平衡、DA与5-HT含量有关。

磁共振成像辅助帕金森病诊断的临床研究

目的通过磁共振成像对帕金森病(PD)患者黑质相关部位的测量,探讨磁共振在PD早期诊断中的应用价值。方法利用1.5T磁共振成像系统对8例PD者和8例正常对照组进行T2加权成像(T2WI)的常规扫描,在T2WI上测量黑质致密带(SNc)的宽度、中脑直径、黑质体积和黑质信号值,计算SNc的宽度与中脑直径的比值,比较PD患者和正常对照组之间的差异;用统一帕金森评定量表(UPDRS)和修订Hoehn-Yahr分级量表对PD患者进行病情评定,分析PD患者SNc的宽度、中脑直径、SNc宽度与中脑直径比值、黑质体积和黑质信号值与病情的关系。结果 PD组SNc宽度、SNc宽度与中脑直径比值低于正常对照组(P<0.05),而PD患者中脑直径、黑质体积和黑质信号值与正常对照组无差异(P>0.05),PD患者SNc的宽度、中脑直径、SNc宽度与中脑直径比值、黑质体积和黑质信号值与PD患者病情无相关性。结论常规磁共振成像有望成为PD诊断的辅助方法。

帕金森病研究进展分析

帕金森病(Parkinson′s disease,PD)严重危害人类健康。本文从PD发病率、临床症状、病理改变、发病机制及治疗等几方面出发,讨论了PD的研究进展,提出兼顾改善症状和神经保护作用的新药和治疗方法是今后研究的方向。

成年与老年大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元形态学研究

目的研究大鼠中脑黑质致密部多巴胺能神经元随年龄老化的形态学变化规律，探讨其退行性变的形态学依据。方法SD大鼠16只，雄性，分为成年组（4-5月龄）和老年组（≥18月龄）。取中脑黑质，常规制片，连续冠状切片，分别进行焦油紫染色和TH免疫组化染色，用图像分析仪分别对Nissl染色细胞、TH免疫组化染色阳性神经元进行计数，透射电镜观察神经元的超微结构变化。结果老年大鼠中脑黑质神经元数量减少（P〈0．05），TH阳性神经元也同时减少（P〈0．05），且在超微结构上老年大鼠多巴胺能神经元出现内质网扩张及多量脂褐素形成。结论老年黑质退行性病变可能与中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量减少有关。

老年大鼠黑质致密部多巴胺能神经元的变化

目的探讨老年大鼠黑质致密部多巴胺(DA)能神经元的变化。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹法、免疫组化染色和电镜技术,观察老年大鼠(≥24月龄)黑质致密部DA能神经元酪氨酸羟化酶(TH)mRNA、蛋白表达水平和TH阳性神经元数及其超微结构,并与成年大鼠(4～5月龄)比较。结果老年组大鼠黑质致密部THmRNA水平(0.66±0.12)明显低于成年组(1.09±0.08)(P<0.05);TH蛋白水平及TH阳性神经元数与成年组差异均无统计学意义(均P>0.05);老年组大鼠黑质致密部尾侧段TH阳性神经元数比成年组明显减少(P<0.05),其超微结构显示细胞器少、脂褐素多、核固缩、线粒体形态异常且数量减少。结论老年大鼠黑质致密部DA能神经元THmRNA水平下降,尾侧DA能神经元明显减少,并呈衰老性改变,这可能是老年黑质纹状体功能降低的生物学基础。

一种改良帕金森大鼠模型的制作

目的建立一种改进的帕金森(PD)大鼠模型制作方法,并对模型进行综合评价。方法选取Wistar大鼠60只,分别制作右侧中脑黑质致密部(SNc)和中脑内侧前脑束(MFB)两点6-OHDA毁损传统PD大鼠模型及中脑内侧前脑束(MFB)单点6-OHDA毁损改良PD大鼠模型;检测大鼠行为及黑质多巴胺(DA)能神经元变化。结果改良组大鼠死亡率低于传统组和对照组,行为学检测和免疫组化检测与传统组差异无显著性(P>0．05),与对照组比较注射侧黑质多巴胺能神经元显著减少(P<0．01)。结论本实验方法可快速简便地建立稳定的PD大鼠模型。

6-OHDA诱导大鼠不同脑区星形胶质细胞反应差异的研究

目的:观察大鼠不同脑区中的星形胶质细胞对6-羟多巴(6-OHDA)局部注射反应的差异。方法:将6-OHDA局部注入大鼠脑内黑质致密部(SNc)、纹状体(CPu)、腹侧被盖区(VTA)和额叶联合皮层(FrA),用免疫组织化学方法观察这些脑区中星形胶质细胞的变化。结果:6-OHDA注入1d后各脑区星形胶质细胞反应较轻,7d后反应明显,并持续至14d;各组相比较以SNc组和VTA组反应明显,而CPu组和FrA组反应较轻。结论:大鼠不同脑区中的星形胶质细胞对6-OHDA局部注射后的反应存在差异。

光遗传技术对帕金森病大鼠治疗效果研究

目的观察光遗传技术对帕金森病(PD)的治疗效果。方法将健康成年雄性Sprague Dawley大鼠随机分为实验组、病毒组、模型组和空白组,每组20只。模型组和实验组大鼠分别在右侧黑质致密部(SNc)和中脑腹侧被盖区(VTA)注射鱼藤酮建立单侧完全损毁的PD大鼠模型,实验组大鼠造模成功后注射腺相关病毒,病毒组大鼠不建立PD模型,仅注射腺相关病毒,空白组大鼠不给予任何干预措施。然后,各组大鼠在SNc植入光电极进行光刺激,采集各组大鼠光刺激前、中、后的脑电信号,采用LZ复杂度分析脑电信号的变化。结果PD大鼠与正常大鼠脑电信号各波段LZ复杂度与比较差异较大,光遗传学技术对导入病毒的实验组和病毒组大鼠脑电信号有较明显的影响,对未导入病毒的模型组和空白组大鼠脑电信号无明显影响;实验组大鼠光刺激时脑电信号θ波更趋近于空白组大鼠。结论光遗传技术对PD大鼠有治疗作用。

基于改进U-Net的人脑黑质致密部分割

人脑黑质致密部分割能够为帕金森病的诊断提供一定依据。黑质致密部在人脑核磁共振成像中像素占比低、类间差异小,为提高计算机辅助诊断系统对人脑黑质致密部的分割精度,提出一种基于改进U形神经网络(U-Net)的人脑黑质致密部分割方法。为了提取更多有效的多尺度图像语义特征,结合U-Net的跨连接结构并采用多头注意力机制,同时融合基于Transformer编码器的高维语义编码模块以提取高维语义特征,避免浅层噪声对特征造成的影响。建立多任务模型并设计基于二维高斯核权重掩膜的损失函数,解决神经网络分割模型因多次下采样造成的不连续分割误差问题。构建包括140个帕金森病患者以及48个健康对照者的高精度核磁共振脑成像数据集进行实验,结果表明,相较常用的医疗影像分割方法 R2U-Net、HANet等,该方法的多任务分割效果取得明显提升,戴斯相关系数和AUC指标分别达到0.869 1和0.943 9,消融实验结果也验证了改进编码器和改进损失这2个模块的有效性。

神经细胞黏附分子在正常老化大鼠黑质致密部多巴胺能神经细胞的表达

目的:观察神经细胞黏附分子(NCAM)和酪氨酸羟化酶(TH)在大鼠黑质致密部(SNc)多巴胺(DA)能神经细胞表达的变化,探讨其发生机制。方法:健康雄性SD大鼠24只,分为成年组(4～5月龄)和老年组(≥24月龄),取中脑黑质,分别进行TH和NCAM的免疫组织化学染色及免疫印迹检测蛋白表达,显微镜下计数免疫组化染色阳性神经细胞,灰度分析电泳条带。结果:SNc的DA能神经细胞几乎都表达NCAM,老年大鼠SNc TH阳性细胞总数及蛋白量均无减少(P>0.05),但尾侧段TH阳性细胞减少(P<0.05);NCAM在阳性细胞总数及蛋白量均减少(P<0.05),但各段阳性细胞的减少无统计学意义(P>0.05)。结论:正常老化后大鼠的SNc DA能神经细胞DA合成降低,并且NCAM可能参与了这种DA的合成下降。