药品标准中替代对照品研究技术要求探讨

近年来,以标准物质为对照而建立的各种色谱技术在中药和天然药物分析方面有广泛的应用,但是对照物质的缺乏严重妨碍了中药及天然药物质量控制工作的顺利开展。研究并寻找适当的替代品是解决以上问题的有效途径之一。为了统一并规范药品标准中替代对照品的研究,本文对对照品替代法的应用情况及相关技术要求进行了探讨,以供开展此项研究工作参考。

替代对照品法同时测定前胡炮制品中主要香豆素成分

以白花前胡甲素为标准对照品,计算出白花前胡乙素和白花前胡E素的相对校正因子(f),建立HPLC替代对照品法含量测定方法同时测定前胡药材中白花前胡甲素、乙素和E素含量,并在此基础上考察不同前胡炮制品中主要香豆素类成分的含量变化,为前胡药材及炮制品质量标准的制定及其临床应用提供科学依据。采用Welch Materials Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。该条件下测得前胡中白花前胡乙素和白花前胡E素相对于白花前胡甲素的相对校正因子分别为0.787 2和0.969 0,通过对15批药材进行含量测定,结果证明,替代对照品法与外标法测定的结果无明显差异,说明本研究建立的替代对照品法测定含量,方法准确可靠,可用于前胡及其不同炮制品中主要香豆素的含量测定。用该法测定各炮制品中香豆素总含量均低于生前胡。

替代对照品法测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用替代对照品法,以橙皮苷为替代对照品,测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子,利用相对校正因子计算复方甘草口服溶液中甘草酸和甘草苷含量。色谱柱采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH至2.5)-乙腈(梯度洗脱),检测波长分别为276 nm(甘草苷)、284 nm(橙皮苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 m L/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵的进样量分别在0.033 2~0.498 3μg(r=0.999 5),0.049 3~0.740 2μg(r=0.999 2),0.443 0~6.495 1μg(r=0.999 3)范围内与峰面积线性关系良好;甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的相对校正因子分别为1.081 4和0.449 2;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.94%和99.19%(n=6)。结论该方法成本低,试验时间短,仪器噪音小,适用于测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量。

替代对照品法测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量

目的:建立替代对照品测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的方法。方法:以水杨酸为替代对照品,采用HPLC法,采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH值为2.3)(38:62)为流动相,在检测波长252 nm(甘草酸苷)/304 nm(水杨酸),柱温30℃的条件下,测定水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f),利用相对校正因子(f)计算复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量。结果:水杨酸与甘草酸苷分别在35.23~352.32μg·mL-1(r=0.9999)和55.42~554.20μg·mL-1(r=1.0000)浓度范围内与峰面积有良好的线性关系;甘草酸苷的平均回收率为100.47%;水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f)为1.7621。结论:以水杨酸作为替代对照品,用HPLC测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷的含量的方法经济、快速、可行,可作为复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的测定方法。

替代对照品法测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法。方法采用替代对照品内加入法,以橙皮苷为替代对照品,通过测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子(f值),利用f值计算甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量。色谱条件:Welch Ultimate C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH值为2.5)为流动相,梯度洗脱,检测波长为284 nm(橙皮苷)、276 nm(甘草苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵进样量分别为0.0332~0.4983、0.0493~0.7402、0.4330~6.4951μg,与其峰面积具有良好的线性关系(r=0.9995、0.9992、0.9993);甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的f值分别为1.0814、0.4492;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.96%、97.67%。替代对照品法样品含量测定数据与外标法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以橙皮苷为对照品,测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法具有成本低、实验时间短、操作过程和仪器噪音影响小等特点。

加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒聚合物

目的建立加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒中的聚合物。方法以头孢噻吩作为替代对照品,以紫外吸光系数比值法确定校正因子,以AKTA Prime LC高分子杂质分析仪测定聚合物含量;色谱柱:Sephadex G-10柱(14.0 mm×400 mm);流动相A:pH 8.0的0.2 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液[0.2 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液-0.2 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(61∶39)],流动相B:超纯水;检测波长:254 nm;流速:0.9 mL·min^(-1)。结果头孢噻吩对照品在50~1000 ng·mL^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991),校正因子为0.7804。结论本方法能较好分离头孢硫脒与其聚合物杂质,为加校正因子的替代对照品法在抗菌药物聚合物定量中的应用做了有益探索。

替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量

建立HPLC替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。采用资生堂CAPCELL PAK C_(18)色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(15∶35∶50)为流动相,柱温30℃,流速1.0 mL/min,丹皮酚的检测波长为274 nm,藁本内酯的检测波长为327 nm。以丹皮酚作为藁本内酯的替代对照品,在不同条件下测定相对校正因子,利用相对校正因子和替代对照品测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。结果显示,藁本内酯和丹皮酚进样量分别在0.106 4~2.129 0μg(r=0.999 9)和0.063 6~2.544 4μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得相对校正因子f为1.978 5,不同条件下相对校正因子的重现性良好,通过相对校正因子f计算得到当归腹痛宁滴丸中藁本内酯含量与外标法实测值之间无明显差异。本方法经济、实用、快速、高效,可用于当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏与不稳定而给含量测定带来的困难,极大降低了分析检测的成本。

中药标准物质替代测定法技术指导原则

中药标准物质替代测定法是符合中药特点的多指标质量控制的一种有效模式。为了指导该法的建立,统一并规范该法的研究及在国家药品标准中的应用,并证明采用的方法是否适合于相应的检测要求,探讨并提出本技术指导原则。本指导原则从该法的定义与分类、定量的原理与方法、色谱峰的定位与确认、技术要求四个方面进行论述。当中药指纹图谱(特征图谱)鉴别项或多指标含量测定项采用中药标准物质替代测定法时,按照本原则进行方法学验证研究。

对照提取物在中药整体质量控制中的应用

基于中医理论指导下的全面药效物质基础研究是中药质量标准体系构建的基石,对照提取物法为其提供了一种新的分析思路。本文综述了定性和定量对照提取物在中国药典2010年版、美国药典36版、欧洲药典8.0和日本药局方16版中的应用,提出了对照提取物的制备流程,分析了该方法在研究中存在的问题,并以大黄定性对照提取物和重楼总皂苷定量对照提取物为例,阐述了对照提取物在中药整体质量控制中的应用,为对照提取物法的后续研究及实现中药整体质量控制提供了有益的参考。

双标多测法Ⅰ-双标线性校正技术用于色谱峰的定性

目的:建立一种新的替代对照品模式的多指标含量测定技术——双标多测法,并应用于大黄及其制剂中5种蒽醌的分析。方法:在5台不同的高效液相色谱仪和14根不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定大黄中5种游离蒽醌的峰面积和保留时间,再进行数据分析。定量方面,以芦荟大黄素为参照物,测得与大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的相对校正因子。定性方面,以芦荟大黄素和大黄素甲醚2个成分,使用双标线性校正法预测保留时间。结果:定量方面,相对校正因子可耐受柱温、流速和流动相比例在一定范围内的变动。定性方面,14根色谱柱的验证结果表明,双标线性校正法的预测效果明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面有较好的实用价值和应用前景。

双标多测法Ⅲ—4种定性定量模式及紫外-可见光谱、质谱辅助定性

目的:以建立乳香中11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)和11-羰基-β-乳香酸(KBA)的含量测定法为例,探讨双标多测法的多种定性定量模式和色谱峰辅助定性方法。方法:使用HPLC-PDA色谱仪建立含量测定法,以AKBA为参照物考察不同检测波长、流动相比例和pH下KBA的相对斜率(相对校正因子的倒数)变异情况,考察在10根不同C18色谱柱上使用AKBA和乳香对照药材定性KBA的准确度。结果:含量测定方法的线性和回收率均良好。以AKBA为参照物,KBA的相对斜率平均值为0.920,且在不同条件下保持稳定。使用AKBA和乳香对照药材结合紫外光谱定性KBA色谱峰的准确度高。结论:建立的乳香双标多测法为乳香及含乳香制剂提供了一种有效且成本低廉的含量测定方法模式;4种不同的定性定量模式具有良好的实用性和可行性,扩展了双标多测法的适用范围。

替代对照品法在中药多指标含量测定中的应用与技术要求探讨

本文分析和归纳了替代对照品法的国内外应用情况及研究中存在的问题,定量方面提出相对校正因子为物质百分吸光系数之比,并以此为基础分析了影响定量准确度的因素,认为波长和对照品为影响定量的关键因素;比较了相对保留时间法和对照提取物定性法等7种定性方法的优缺点;在方法实用性方面,提出色谱仪校正和色谱柱相似度评价等可能的研究方向;为该法的后续研究提供参考。

黄芪异黄酮对照提取物的制备及其在黄芪药材含量测定中的应用

目的：制备黄芪异黄酮对照提取物，探讨选择对照提取物替代单体成分对照品测定黄芪药材中异黄酮类成分的可行性。方法：提取、制备黄芪异黄酮对照提取物，并进行毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4个异黄酮成分的定值；采用HPLC法测定黄芪药材中4个异黄酮成分的含量，使用色谱柱为PhenomenexC18（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈-0.3％甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱（0～20min，10％A→30％A；20—25min，30％A；25—35min，30％A→60％A；35～45min。60％A→10％A）。流速1．0mL·min^-1，检测波长260nm，柱温25℃。结果：黄芪异黄酮提取物中4个主成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素浓度分别在4．93—394．4μg·mL^-1（r=0．9997）、2．68—214．4μg·mL^-1（r=0．9992）、3．09～247．2μg·mL^-1（r=0．9999）、1．53～122．4μg·mL^-1（r=0．9999）范围内与色谱峰面积值呈良好的线性关系；平均回收率（n=6）分别为100．0％、99．8％、99．6％、100．1％，RSD均小于2．0％。结论：黄芪异黄酮对照提取物可替代相应的对照品，用以同时测定黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素4个黄芪异黄酮成分的含量。

银杏叶对照提取物中7种黄酮醇苷类化合物的定量研究

从银杏叶提取物中提取分离得到6种黄酮醇苷单体化合物,并对其进行标化,在4种分析条件下,用标定后的单体化合物,对2批银杏叶对照提取物中该6个化合物及芦丁进行标定。芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖-2-O-（6-O-对羟基反式桂皮酰）-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-O-（6-O-对羟基反式桂皮酰）-葡萄糖苷含量测定结果的RSD为1.1%~4.6%,槲皮素-3-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷的测定结果 RSD大于5%。结果表明,用银杏叶对照提取物替代相应的对照品,可用于同时测定银杏叶制品中芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖-2-O-（6-O-对羟基反式桂皮酰）-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-O-（6-O-对羟基反式桂皮酰）-葡萄糖苷5个黄酮醇苷成分的含量。因此使用对照提取物代替单体对照品测定银杏叶制品具有可行性。

双标多测法Ⅱ—检测波长选择对定量分析的影响

目的:为解决替代对照品法或一测多评法在相对校正因子法定量和相对保留时间法定性方面的误差有时偏大的问题,建立了一种新的替代对照品模式的多指标含量测定法—双标多测法。方法:在3台不同品牌的高效液相色谱仪和23种不同品牌和型号的C18色谱柱上,测定重楼中4个皂苷类成分的峰面积和保留时间,计算相应的相对校正因子和相对保留时间,再进行数据偏差的比较和分析。结果:定量方面,解释了检测波长和仪器波长偏移影响相对校正因子的机制,并据此提出了波长选择建议;定性方面,证明了梯度条件下,双标线性校正法预测保留时间的效果仍明显优于相对保留时间法。结论:双标多测法在中药多指标含量测定方面具有较好的实用价值和较广的应用前景。

对照品替代法用于贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素含量测定的研究

目的:研究对照品替代法在高效液相色谱法含量测定中的应用,建立以大黄素为替代物测定贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素含量的方法。方法:采用HPLC-DAD和HPLC-MS,通过定性和定量手段分别求得被测成分相对于替代物的计算因子,从而实现以大黄素为替代对照品,测定样品中金丝桃素的含量。色谱条件:色谱柱,Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相,10 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(以醋酸调pH 4)-乙腈梯度洗脱系统;流速,1.0 mL.min-1;柱温,30℃;DAD检测器,检测波长284 nm。质谱条件:色谱柱,Agilent SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相,10 mmol.L-1醋酸铵缓冲液(以醋酸调pH 4)-乙腈梯度洗脱系统;流速,0.4 mL.min-1;柱温,30℃;MS-ESI正离子模式检测,去溶剂温度300℃,去溶剂气(N2)流速10 L.min-1,雾化气压力241 Pa,毛细管电压4 kV,离子扫描范围为m/z 100～600,选定m/z269.1,503.2,519.2,535.5进行选择性离子扫描(SIM)。结果:对照品替代法与常规的含量测定法测得的结果基本一致。结论:本方法经济、实用、快速、高效,可用于贯叶连翘提取物及其制剂中金丝桃素的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏而给含量测定带来的困难,大大降低了分析检测的成本。

绿色分析化学与中药检测方法

本文在学习绿色分析化学原理和基本原则的基础上,结合中药检测方法的实际,从分析样品处理、高效液相色谱和中药对照物质替代三方面分析了中药分析检测标准中可以采用的绿色化策略与方法。

替代对照品法同时测定茯苓中多种三萜酸类成分的含量

目的:建立替代对照品法测定茯苓中7种三萜酸类成分含量。方法:色谱柱为Thermo Acclaim 120 C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm),流动相为乙腈-磷酸水,梯度洗脱,流速1 mL·min^(-1),检测波长:210 nm,柱温30℃,进样量20μL。以中药标准物质替代品熊果酸作为内参物,分别建立去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的相对校正因子,计算其含量,并与外标法测定结果进行对比分析,验证替代对照品法的合理性、可行性。结果:所建立的7种三萜酸相对校正因子重复性良好,25批茯苓中测定结果的计算值与实测值无显著性差异。结论:该方法测定结果可靠,实现了只用一个对照品同步测定茯苓中多个成分的方法,可为中药多指标成分质量评价模式提供参考。

HPLC校正因子法在药物分析中的应用

随着对药物有关物质的深入研究和国内仿制药一致性评价的开展,杂质相对于主成分的校正因子测定越来越受到重视。本文在分析国内外近年来校正因子相关文献的基础上,介绍了校正因子的定义、目前的测定方法和应用情况;阐述了目前杂质校正因子在测定和应用中的一些规律和要点,并对其在测定和应用中存在的问题进行了讨论,为今后校正因子测定的标准化和规范化研究提供参考依据。

替代对照品法测定龙血竭原料中龙血素A和B的含量

目的:建立替代对照品法同时测定龙血竭原料剑叶龙血树中龙血素A、B的含量。方法:提出了相对斜率的概念,解释了它与相对校正因子的数学关系,阐释了相对斜率(相对校正因子)的物理意义,进而采用相对斜率算法建立剑叶龙血树的含量测定法,并进行方法学验证。结果:方法的线性和回收率均良好;以龙血素A为参照,龙血素B的相对斜率和相对保留时间平均值为1.248和1.06,且在5个不同的色谱系统上保持稳定;相对斜率值与使用紫外分光光度计按吸光系数法测得值一致。结论:相对斜率算法简便、准确,以此进行替代对照品法测定剑叶龙血树中龙血素A、B是可行的。