启动子P_(43)表达关键酶基因对subtilosin A合成的调控作用

为提高枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168)细菌素subtilosin A的产量使其能够应用到食品防腐、医药卫生等行业。采用重叠延伸PCR将强启动子P43分别和subtilosin A合成酶基因簇中关键酶基因sbo-albA、albB-albC连接到一起,构建了高表达载体。采用改进的电击法将重组载体转化到Bacillus subtilis 168中,通过高效液相色谱(HPLC)检测,确定subtilosin A产量得到了提高,进一步通过抑菌实验证明其抑菌活性也获得了提高。该方法为提高subtilosin A产量,进而应用到生产实践中提供了理论参考。

重组枯草芽孢杆菌素subtilosin A基因的合成及其在毕赤酵母中的表达

人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,证明重组酵母GS115-p PIC9K-sbo构建正确;经枯草芽孢杆菌素蛋白电泳检测,可见明显蛋白条带,表明重组rsbo A基因在毕赤酵母GS115中获得了分泌表达。在抑菌效果检测中,重组酵母工程菌的发酵液对铜绿假单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究开创了有望替代抗生素的小分子肽细菌素异源表达新思路,为枯草芽孢杆菌素subtilosin A的工业化生产奠定了基础。

枯草芽孢杆菌抗菌肽的分离纯化及质谱检测

目的:研究枯草芽孢杆菌拮抗幽门螺杆菌的能力及分离纯化其抑菌活性物质。方法:以幽门螺杆菌国际标准株NCTC11637为指示菌,采用打孔法检测枯草芽孢杆菌抑制幽门螺旋杆菌能力;挑选拮抗能力最强菌株,对其活性物质进行分离纯化;质谱检测活性物质分子量。结果:枯草芽孢杆菌发酵上清液具有显著抑制幽门螺旋杆菌的能力,其中枯草芽孢杆菌KM抑制幽门螺旋杆菌的能力最强;活性物质经分离纯化后,质谱检测分子量为3402.524D,推测为Subtilosin A结构类似物;10株枯草芽孢杆菌Subtilosin A的前体基因的表达水平与抗幽门螺旋杆菌的能力呈正相关。结论:枯草芽孢杆菌具有不同程度体外拮抗幽门螺旋杆菌能力,其抑菌机制与分泌抗菌肽Subtilosin A结构类似物相关,该类物质可作为治疗幽门螺杆菌感染的候选药物。